《生物学系统实验3介绍及实验安排.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物学系统实验3介绍及实验安排.ppt（42页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、雕 梧 洪 勉 构 鲜 率 攻 烁 皿 镭 佳 如 喀 裔 难 辰 褪 踊 质 逼 扦 瘟 与 智 让 追 拐 欧 惨 可 艺 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生物科学专业系统实验（生物科学专业系统实验（3 3） 微生物学专业实验微生物学专业实验 任课教师：程立忠任课教师：程立忠 13888812282 13888812282 王绍辉王绍辉 13888336373 13888336373 突 景 遂 镀 唬 癣 坠 凸 屹 此 伯 酿 膊 愚 甘 糙 扭 幌 揍 朝 憾 雏 蓝 苹 渺 赎 狡 馁 窝 承
2、韵 否 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 实验过程的首要问题实验过程的首要问题 实验安全实验安全 首先注意自身的安全问题，学会保护自已首先注意自身的安全问题，学会保护自已 。 注意避免水、电、化学药品等造成的伤害注意避免水、电、化学药品等造成的伤害 。 注意仪器使用过程出现的危险和损害。注意仪器使用过程出现的危险和损害。 实验室内部的安全实验室内部的安全防火、防水、防盗防火、防水、防盗 等。等。 出现问题不要惊慌，冷静处理，不隐瞒。出现问题不要惊慌，冷静处理，不隐瞒。 烘 晶 涛 溯 氮 挖 谓 圈 籽 赖
3、咕 诵 溪 藩 囤 灶 详 献 着 播 骂 锡 灵 闸 盆 洲 谅 墅 瘪 毁 毁 靡 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 本门实验课开设的目的本门实验课开设的目的 进一步利用已具备有的实验技能，系统综进一步利用已具备有的实验技能，系统综 合解决实验过程中的问题合解决实验过程中的问题 立足于多动手多训练，加强自主性立足于多动手多训练，加强自主性 加强实践性教学和创新意识的培养加强实践性教学和创新意识的培养 实验完成后能够达到一定自主解决实验过实验完成后能够达到一定自主解决实验过 程遇到的问题的能力（包括其它研究
4、中所程遇到的问题的能力（包括其它研究中所 涉及的问题），可以完成一些研究性实验涉及的问题），可以完成一些研究性实验 工作工作 初步积累一定自主实验的经验。初步积累一定自主实验的经验。 松 橡 品 常 荐 臃 罪 振 队 颗 塌 粱 到 股 盯 顽 绷 碎 俞 绅 恶 秩 羽 抬 孔 迭 揩 规 跋 斯 稗 医 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 实验课所涉及的命题及安排实验课所涉及的命题及安排 拟以拟以-淀粉酶细菌菌株的选育为目的；淀粉酶细菌菌株的选育为目的； 建立研究平台，在教师指导下让学生完成建立研究平台，
5、在教师指导下让学生完成 相关系统实验；相关系统实验； 实验内容将涉及微生物学的最基本研究方实验内容将涉及微生物学的最基本研究方 向，包括微生物的培养、发酵、生理学、向，包括微生物的培养、发酵、生理学、 生物后提取、生物化学分析等；生物后提取、生物化学分析等； 用到的技术主要有微生物纯化分离技术、用到的技术主要有微生物纯化分离技术、 发酵培养技术、电泳技术、酶提取及纯化发酵培养技术、电泳技术、酶提取及纯化 技术及相关生化分析技术；技术及相关生化分析技术； 整个实验时间相对固定，过程中有灵活安整个实验时间相对固定，过程中有灵活安 排（具体再商定排（具体再商定充分利用晚上）；充分利用晚上）； 侄 蔓
6、 追 涵 涅 凤 舱 琉 邵 度 魏 划 赔 臀 勺 硅 倍 妆 钨 桓 庞 慌 膏 懦 掣 蛹 借 斥 挚 粱 年 螟 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 实验分组情况及组织安排实验分组情况及组织安排 本门实验课分为若干组，每组本门实验课分为若干组，每组2424人；人； 自行组合，相互密切配合，完成试验内容自行组合，相互密切配合，完成试验内容 ，多动手，认真总结并完成实验报告；，多动手，认真总结并完成实验报告； 实验过程中的一些物品、试剂、样品等，实验过程中的一些物品、试剂、样品等， 因为下次实验还需要请自行
7、保管好（连续因为下次实验还需要请自行保管好（连续 过程）；过程）； 相关试剂不够用，请和教师联系配制；相关试剂不够用，请和教师联系配制； 完成实验后由本班次负责人安排值日生进行相应完成实验后由本班次负责人安排值日生进行相应 的卫生打扫和公共物品整理；的卫生打扫和公共物品整理； 注意：实验时间可能远远超过注意：实验时间可能远远超过7272学时。学时。 咳 醒 阜 奶 呐 财 衷 郴 咏 螺 塘 猿 莎 循 驹 袄 柬 罐 颖 胡 挞 征 佰 酵 甲 褪 嫩 丧 内 谣 琅 滁 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排
8、实验考核成绩评定实验考核成绩评定 平时成绩（占平时成绩（占2020分）分） 实验习惯（占实验习惯（占1010分）分） 实验报告（占实验报告（占3030分）分） 考核及考试（占考核及考试（占2020分）分） 按组答辩（占按组答辩（占2020分）分） 董 忿 钒 滞 栽 癸 住 澜 前 必 娱 绝 贷 闻 茁 严 斑 圭 圣 佣 绒 诧 悠 巍 撑 曙 裙 狼 喂 哦 孔 乱 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 科学研究工作需要解决和注意的一科学研究工作需要解决和注意的一 些问题些问题 研究目的的确立研究目的的确立
9、区分基础研究和应用区分基础研究和应用 研究；研究； 研究内容和方法的建立研究内容和方法的建立很多时候是一很多时候是一 种开创性的工作；种开创性的工作； 检测手段的解决检测手段的解决高效、专一、准确；高效、专一、准确； 数据结果的分析数据结果的分析从表观现象揭示内在从表观现象揭示内在 的联系和结果；的联系和结果； 不要怕出错或忽视和自已的预见不符的结不要怕出错或忽视和自已的预见不符的结 果果认真分析，创新发现。认真分析，创新发现。 扶 妖 模 仓 妹 稳 赔 尝 栋 婆 使 咳 殿 女 邓 宛 椒 醒 怔 眯 膛 鼎 欠 懒 瞎 镰 豹 喻 那 意 明 隶 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍
10、 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 本门实验课的具体内容本门实验课的具体内容 1.1.从土壤中分离产淀粉酶的菌株从土壤中分离产淀粉酶的菌株分离纯化、分离纯化、 检测、筛选培养（初筛和复筛）（检测、筛选培养（初筛和复筛）（3 3周完成）。周完成）。 2.2.产酶发酵条件的优化研究（产酶发酵条件的优化研究（3434周完成）。周完成）。 3.3.酶的提取纯化及电泳检测分析（粗提、纯化）酶的提取纯化及电泳检测分析（粗提、纯化） （分批次（分批次4545周完成）。周完成）。 4.4.酶生物学特性研究（酶生物学特性研究（3434周完成）周完成） 5.5.水解及
11、产物分析实验（水解及产物分析实验（1212周完成）周完成） 注意：实验内容涉及较多，实验过程中遇到的未注意：实验内容涉及较多，实验过程中遇到的未 定因素较多，经费时间有限，这些可能造成相关定因素较多，经费时间有限，这些可能造成相关 实验内容完成有困难，各组之间最终结果要求不实验内容完成有困难，各组之间最终结果要求不 定定注重过程和训练目的。注重过程和训练目的。 体 丫 无 稍 混 椎 桃 变 歌 毁 烃 渔 桂 酌 霓 眩 酚 串 剖 故 同 祈 撼 谭 疙 避 或 袖 药 橱 使 避 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实
12、验 安 排 从土壤中分离产淀粉酶的菌株从土壤中分离产淀粉酶的菌株 分离步骤和方法分离步骤和方法分离用培养基、检测方法分离用培养基、检测方法 ，从土壤中分离得到一株产淀粉酶的菌株（以细，从土壤中分离得到一株产淀粉酶的菌株（以细 菌为主）菌为主） 对已有菌株进行相应产淀粉酶初发酵研究，得对已有菌株进行相应产淀粉酶初发酵研究，得 到最初产酶发酵水平（包括初筛和复筛两部分）到最初产酶发酵水平（包括初筛和复筛两部分） 。 蛀 卑 栗 堕 鸟 邑 力 楼 电 垛 却 途 唐 惶 究 挝 橱 丫 兑 芽 使 瓷 岸 浑 龋 削 忱 拌 稿 隆 肉 莱 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安
13、排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 产酶发酵条件的优化产酶发酵条件的优化 利用产酶的培养基成分及培养条件，利用利用产酶的培养基成分及培养条件，利用 正交设计优化产酶发酵条件正交设计优化产酶发酵条件 结果将结合相关的分析统计软件进行统计结果将结合相关的分析统计软件进行统计 分析研究，获得优化条件分析研究，获得优化条件 衬 囊 赴 于 责 泵 唇 嘉 聪 牙 篷 跨 冤 橙 愁 帖 阴 拒 顽 翘 蛋 案 驾 述 利 荧 舀 识 足 拳 餐 农 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 酶的提
14、取及电泳检测分析酶的提取及电泳检测分析 在产酶高峰期，收集发酵液，制备粗酶在产酶高峰期，收集发酵液，制备粗酶 液液 利用相应的蛋白质提取技术，沉淀酶蛋利用相应的蛋白质提取技术，沉淀酶蛋 白，得到粗酶粉白，得到粗酶粉 利用柱层析系统，分离提纯酶蛋白利用柱层析系统，分离提纯酶蛋白 各步骤利用蛋白电泳技术检测酶蛋白的各步骤利用蛋白电泳技术检测酶蛋白的 纯度，及酶蛋白的分子量。纯度，及酶蛋白的分子量。 掸 某 锗 蚊 阅 纺 循 凉 帘 矮 遮 撮 弓 牲 凳 窟 慎 炊 邓 宙 敢 吠 雍 狂 济 唆 氯 堆 宙 猪 标 雇 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系
15、 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 酶生物学特性研究酶生物学特性研究 利用已纯化的酶蛋白，并进行相应的酶学利用已纯化的酶蛋白，并进行相应的酶学 特性研究特性研究 最适最适pHpH值的测定值的测定 最适温度的测定最适温度的测定 热稳定性的测定热稳定性的测定 相关金属离子等物质的影响测定相关金属离子等物质的影响测定 KmKm及及VmaxVmax的测定的测定 蝉 浸 园 涂 童 遂 讹 戌 筹 汁 拟 姑 成 凭 邓 受 持 昭 活 呵 国 瞧 佣 押 俺 珍 渠 韭 竖 酝 乔 泛 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实
16、 验 安 排 水解及产物分析实验水解及产物分析实验 利用自己分离纯化的酶制品，水解淀粉利用自己分离纯化的酶制品，水解淀粉 得到葡萄糖（水解材料可以自选），并测得到葡萄糖（水解材料可以自选），并测 定其转化率定其转化率 通过薄板层析等手段进行一定酶产物分通过薄板层析等手段进行一定酶产物分 析研究，并介绍有关仪器分析方面的知识析研究，并介绍有关仪器分析方面的知识 介绍相关的生物分析知识介绍相关的生物分析知识 仔 枉 暗 谍 腹 郧 儡 狱 侮 疏 涡 返 钨 号 寞 巳 汇 昧 潘 穴 逛 舜 溺 晨 腰 补 赐 涛 揭 度 皱 忙 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生
17、物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 相关参考书目相关参考书目 1.1.沈萍沈萍 范秀容范秀容 李广武主编李广武主编 微生物学实验微生物学实验 高等教育出版社高等教育出版社 2.2.林稚兰林稚兰 黄秀梨主编黄秀梨主编 现代微生物学与实验技术现代微生物学与实验技术 科学出版社科学出版社 3.3.宋大新宋大新 范长胜范长胜 徐德强等主编徐德强等主编 微生物学实验技术教程微生物学实验技术教程 复旦大学复旦大学 出版社出版社 4.4.东秀珠，蔡妙英主编东秀珠，蔡妙英主编 常见细菌系统分类和鉴定方法常见细菌系统分类和鉴定方法 科学出版社科学出版社 5.5.焦瑞身焦瑞身 周德庆主编周德庆
18、主编 微生物生理代谢实验技术微生物生理代谢实验技术 科学出版社科学出版社 6.6.贾盘兴贾盘兴 蔡金科等编著蔡金科等编著 微生物遗传学实验技术微生物遗传学实验技术 科学出版社科学出版社 7.7.诸葛健诸葛健 王正祥编著王正祥编著 工业微生物实验技术手册工业微生物实验技术手册 中国轻工业出版社中国轻工业出版社 8.8.汪家政汪家政 范明主编范明主编 蛋白质技术手册蛋白质技术手册 科学出版社科学出版社 9.9.苏拔贤主编苏拔贤主编 生物化学制备技术生物化学制备技术 科学出版社科学出版社 10.10.颜子颖颜子颖 王海林译王海林译 F F奥斯伯奥斯伯 R R布伦特布伦特 RE RE金斯顿等著金斯顿等
19、著 精编精编 分子生物学实验指南分子生物学实验指南 11.11.徐继初主编徐继初主编 生物统计及试验设计生物统计及试验设计 农业出版社农业出版社 12.12.李春喜李春喜 王志和王志和 王文林编著王文林编著 生物统计学（第二版）生物统计学（第二版） 科学出版科学出版 社社5 5 13.13.黄海黄海 罗友丰罗友丰 陈志英等编著陈志英等编著 SPSS10.0 for Windows SPSS10.0 for Windows统计统计 分析分析 人民邮电出版社人民邮电出版社 14.14.微生物学报微生物学报 微生物学通报微生物学通报 食品与发酵等相关期刊杂志食品与发酵等相关期刊杂志 莆 淬 翟 良
20、肇 膜 玄 獭 涅 乓 成 柬 住 住 簧 敌 冠 桑 膳 芳 盆 揭 轴 事 携 浴 氟 汁 肪 铜 粕 靶 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 雕 梧 洪 勉 构 鲜 率 攻 烁 皿 镭 佳 如 喀 裔 难 辰 褪 踊 质 逼 扦 瘟 与 智 让 追 拐 欧 惨 可 艺 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 实验实验 - -淀粉酶活力测定方法介绍淀粉酶活力测定方法介绍 垄 洗 踞 揩 胃 捉 搓 壹 据 翻 默 蓟 上 芽 圣
21、 酮 雾 铲 铀 篆 响 郭 洲 鼻 律 硝 跪 卓 搜 岂 薛 落 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 酶活力单位测定的介绍酶活力单位测定的介绍 测定的目的测定的目的纯化不容易；纯化过程中容易失活纯化不容易；纯化过程中容易失活质量（重质量（重 量）不能用于定量；量）不能用于定量； 酶活力和酶活性的差别酶活力和酶活性的差别 酶活力反应的实质酶活力反应的实质催化反应速度高低催化反应速度高低 酶活力单位的定义及表示酶活力单位的定义及表示增加可比性增加可比性 国际标准（国际标准（2525、1min1min、1umol
22、1umol） 实际应用的标准实际应用的标准 酶活力的测定方法酶活力的测定方法 单位时间内底物的减少量或产物的增加量单位时间内底物的减少量或产物的增加量 反应完一定量底物的时间长短反应完一定量底物的时间长短 测定物的要求：可测性、反应的专一性、稳定性、简便性测定物的要求：可测性、反应的专一性、稳定性、简便性 比酶活力的定义比酶活力的定义1mg1mg酶蛋白的酶活力（有时用酶蛋白的酶活力（有时用1g1g表示）表示） 测定过程中的条件控制测定过程中的条件控制温度、温度、pHpH等等 捏 苹 迢 栗 丧 句 夷 箭 律 叶 吼 阴 绣 鼓 赢 讳 接 俩 崇 嗽 斌 捍 幕 戮 纷 咳 范 吝 斑 慢
23、盛 靶 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 酶活力测定的方法酶活力测定的方法 碘比色法（有相应的国家标准）碘比色法（有相应的国家标准） 在一定反应条件下，在一定反应条件下，1 1小时转化小时转化1g1g淀粉变淀粉变 为糊精的酶量定义为为糊精的酶量定义为1 1个酶活力单位个酶活力单位 3 3，5-5-二硝基水杨酸比色法（二硝基水杨酸比色法（DNSDNS法）法） 在一定反应条件下，在一定反应条件下，1 1分钟反应生成分钟反应生成1mg1mg 麦芽糖的酶量定义为麦芽糖的酶量定义为1 1个酶活力单位个酶活力单位 注意：
24、去除注意：去除-淀粉酶的干扰淀粉酶的干扰 医学上的一些测定方法（专用试剂盒，通医学上的一些测定方法（专用试剂盒，通 过生化仪器反应测定，需要微量快速）过生化仪器反应测定，需要微量快速） 诬 玖 斩 鱼 途 放 寝 坑 壶 肪 腕 奴 抽 采 讳 印 溢 麦 袁 军 酸 梭 饱 趁 圾 替 雁 误 垂 罕 短 愧 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 对微生物酶发酵研究中的一些问题进行讨论对微生物酶发酵研究中的一些问题进行讨论 标准曲线制作的问题（配制所需测定物质的梯度浓度）标准曲线制作的问题（配制所需测定物质的梯
25、度浓度） 酶的诱导问题（微生物长期适应进化的结果）酶的诱导问题（微生物长期适应进化的结果） 酶发酵中氮源问题（蛋白质合成的一些问题）酶发酵中氮源问题（蛋白质合成的一些问题） 酶的合成中能量问题（需要消耗大量的能量）酶的合成中能量问题（需要消耗大量的能量） 摇瓶发酵中的容量问题（三角瓶，摇瓶发酵中的容量问题（三角瓶，250250、500ml500ml） 发酵中的溶解氧问题发酵中的溶解氧问题 缓冲液的配制问题缓冲液的配制问题 在在-淀粉酶发酵培养基中淀粉酶发酵培养基中CaClCaCl 2 2 的使用问题的使用问题 在摇瓶发酵中非可溶性物质的加入问题在摇瓶发酵中非可溶性物质的加入问题 化学分析中基准
26、物的处理（纯度、结晶水的处理化学分析中基准物的处理（纯度、结晶水的处理不不 稳定）稳定） 敛 硼 秆 拳 拼 搔 份 长 蒜 堵 篆 动 自 无 页 械 亨 琉 亩 惰 钾 粉 斥 颂 返 锰 鸡 奔 芭 役 忘 好 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 相关概念的介绍相关概念的介绍 复壮复壮狭义的复壮仅是一种消极的措施，指的狭义的复壮仅是一种消极的措施，指的 是在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和是在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和 测定典型性状、生长性能等指标，从已衰退的群测定典型性状、生长性能等指
27、标，从已衰退的群 体中筛选出少数尚在未退化的个体，以达到恢复体中筛选出少数尚在未退化的个体，以达到恢复 原菌株固有性状的相应措施；而广义的复壮则应原菌株固有性状的相应措施；而广义的复壮则应 是一项积极的措施，即在菌种的典型特征或生产是一项积极的措施，即在菌种的典型特征或生产 性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离 和生产性状的测定工作，以期从中选择到自发的和生产性状的测定工作，以期从中选择到自发的 正变个体。正变个体。 句 朝 既 裤 毖 浙 傈 罚 辛 须 凶 砚 恫 导 嫉 啪 喳 萍 疟 遏 筏 例 锁 捎 鲤 功 萍 冯 优 赚 华 款 生
28、 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 相关概念的介绍相关概念的介绍 菌种活化菌种活化使保藏的菌种（休眠状态）使保藏的菌种（休眠状态） 恢复到最佳生长状态（包括一些菌种性能恢复到最佳生长状态（包括一些菌种性能 的恢复），生长状态的均一化（相对）。的恢复），生长状态的均一化（相对）。 一般包括：斜面活化（平板划线形成单菌一般包括：斜面活化（平板划线形成单菌 落）；液体摇瓶培养；种子培养（针对大落）；液体摇瓶培养；种子培养（针对大 规模工业生产）规模工业生产） 棕 鲜 栗 幂 辐 辱 佛 岸 刨 姨 姿 诬 祥 喇 筏
29、泉 芍 哎 冻 囱 咀 役 饲 趣 捐 轻 锅 严 爷 瘦 美 炉 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 相关概念的介绍相关概念的介绍 种子培养基：种子培养基： 营养成分相对丰富，一般无限制性因子，有营养成分相对丰富，一般无限制性因子，有 利于菌体的增殖，生长好；利于菌体的增殖，生长好； 发酵培养基：发酵培养基： 营养成分有利于积累所需代谢产物，一般在营养成分有利于积累所需代谢产物，一般在 培养基有一些限制性因子（包括培养条件培养基有一些限制性因子（包括培养条件 ）。）。 注意：注意： 种子培养基接种于发酵培养基
30、时，注意微种子培养基接种于发酵培养基时，注意微 生物生长延滞期（有一定营养成分重叠）生物生长延滞期（有一定营养成分重叠） 。 叫 促 邀 沉 铝 称 拳 漳 睹 紊 柳 毅 脱 服 磐 埃 翠 疾 弧 非 朔 阁 咽 渔 富 铆 皮 唐 扇 永 熄 玄 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 实验室摇瓶机（摇床）的作用实验室摇瓶机（摇床）的作用 使培养基一直保持均匀状态使培养基一直保持均匀状态菌体始终菌体始终 接触到新的营养成分（相对来说）；快速接触到新的营养成分（相对来说）；快速 稀释代谢废物（一般对细胞有毒害作
31、用，稀释代谢废物（一般对细胞有毒害作用， 对人类来说可能有用）对人类来说可能有用） 增加培养基中溶解氧的浓度，提高菌种的增加培养基中溶解氧的浓度，提高菌种的 有氧代谢强度，加快物质的转化，有利于有氧代谢强度，加快物质的转化，有利于 代谢产物的合成和积累。代谢产物的合成和积累。 建 货 谚 朝 访 未 烃 一 墒 瞎 尊 漏 磅 朋 瘩 蓉 链 盆 洱 运 防 殖 幌 溯 咆 塘 荚 笆 瘸 峪 复 本 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 摇瓶机的种类摇瓶机的种类 旋转式旋转式转速相应较高（转速相应较高（2002
32、00转以上）转以上） ，培养液贴壁旋转；，培养液贴壁旋转； 往复式往复式转速不易太高，一般转速不易太高，一般120120转转/ /分分 左右，培养液来回振荡，振荡液面较高；左右，培养液来回振荡，振荡液面较高； 往复式的溶氧效果较好（相对旋转式）；往复式的溶氧效果较好（相对旋转式）； 注意摇瓶机的振幅（偏心距）。注意摇瓶机的振幅（偏心距）。 桶 涎 莲 递 趴 厕 展 行 辊 接 痘 霍 帆 蝶 除 过 惠 卢 贪 肥 娄 悬 寐 牧 磕 探 酉 短 音 祭 职 旁 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 摇瓶发酵试
33、验时三角瓶装量的要求摇瓶发酵试验时三角瓶装量的要求 一般要求装液量为三角瓶标注容量的一般要求装液量为三角瓶标注容量的 1/101/51/101/5 如如500ml500ml三角瓶经常加入三角瓶经常加入50100ml50100ml（ 常装常装50ml50ml或或100ml100ml）；）； 如如250ml250ml三角瓶经常加入三角瓶经常加入2550ml2550ml（常（常 装装50ml50ml）；）； 注意：根据需要可以特制（如加挡板，增注意：根据需要可以特制（如加挡板，增 加溶解氧）。加溶解氧）。 匈 卸 复 躺 垃 铃 淳 殃 盔 惹 闲 记 崩 误 宵 噶 径 坝 酚 楚 圃 咱 哗 藻
34、 掘 吃 忻 辆 蝗 敷 溜 适 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 培养过程温度的保持培养过程温度的保持 空气浴空气浴通过加热空气来保持培养空间通过加热空气来保持培养空间 的温度，相对简单，实验室设计空间可大的温度，相对简单，实验室设计空间可大 可小，精度低（可小，精度低（0.510.51），传热慢；），传热慢； 水浴恒温水浴恒温通过加热水恒温器皿内的溶通过加热水恒温器皿内的溶 液，一般设计空间较小（实验室科研用的液，一般设计空间较小（实验室科研用的 较多），精度高（较多），精度高（0.10.1），传热快。）
35、，传热快。 势 病 休 耍 溃 命 跋 嘎 粕 凿 吁 应 淋 儡 跺 茄 挞 手 律 吵 镑 肋 毁 厅 琼 误 好 如 摹 票 弗 意 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 缓冲溶液（缓冲溶液（Buffer solutionBuffer solution） 能够缓冲由于加酸或加碱而使溶液能够缓冲由于加酸或加碱而使溶液HH+ +浓度（ 浓度（pHpH值值 ）改变的溶液（也是其主要作用）；）改变的溶液（也是其主要作用）； 另一个作用是可以在溶液浓缩或稀释时而不改变溶另一个作用是可以在溶液浓缩或稀释时而不改变溶 液
36、的液的pHpH值（或影响很小，值（或影响很小，1010倍以内）倍以内） 渊 倔 患 秋 眼 迅 肉 代 坤 啮 愚 拧 香 洪 降 棋 犹 痰 亭 璃 悍 坛 牟 特 挤 缕 兼 乒 坡 池 鳖 蜜 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 用于生物学实验的缓冲剂的要求用于生物学实验的缓冲剂的要求 不能透过生物膜；不能透过生物膜； 生物学稳定性以及不干扰新陈代谢和生物生物学稳定性以及不干扰新陈代谢和生物 学过程；学过程； 对紫外线和可见光无明显吸收；对紫外线和可见光无明显吸收； 离子成分或盐浓度对实验的影响极小；离子
37、成分或盐浓度对实验的影响极小； 温度对其温度对其pHpH值的影响极小。值的影响极小。 搏 经 尊 概 仁 赊 挚 泌 综 陋 伟 喇 陨 誓 震 笔 通 登 炎 惹 哀 象 歹 级 彝 悄 九 姻 檀 刚 桂 凌 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 配制系列浓度稀释液的方法配制系列浓度稀释液的方法 线性稀释线性稀释稀释液的浓度梯度是相同的稀释液的浓度梯度是相同的 （0 0，0.20.2，0.40.4，0.60.6，0.80.8，1.01.0） ； 对数稀释（倍数稀释）对数稀释（倍数稀释）系列溶液的浓系列溶液的浓
38、 度比是一常数，取决于稀释梯度度比是一常数，取决于稀释梯度22倍稀倍稀 释（释（1 1、1/21/2、1/41/4、1/81/8）；）；1010倍倍 稀释（稀释（1 1、1/101/10、1/1001/100、 1/10001/1000）；）； 调和浓度稀释调和浓度稀释系列溶液的浓度为连续系列溶液的浓度为连续 排列整数的倒数（排列整数的倒数（1 1，1/21/2，1/31/3，1/41/4 ，1/51/5）。）。 啦 泽 阀 先 播 翅 疽 雹 凳 奈 哼 陈 付 僳 茎 繁 嗓 明 浊 膘 吮 季 急 懦 洞 陵 晋 逆 凑 庶 堪 并 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安
39、 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 缓冲液的配制方法缓冲液的配制方法 单独配制相关药品的溶液，根据所需配制单独配制相关药品的溶液，根据所需配制 缓冲溶液的缓冲溶液的pHpH值、体积，量取一定体积混值、体积，量取一定体积混 合而成；合而成； 根据所需配制缓冲溶液的根据所需配制缓冲溶液的pHpH值、体积，计值、体积，计 算药品的用量，称取后溶解定容；算药品的用量，称取后溶解定容； 以一种所需药品为主体（一定浓度），用以一种所需药品为主体（一定浓度），用 pHpH计检测滴加相应酸或碱调节至所需计检测滴加相应酸或碱调节至所需pHpH 值后，再定容。值后，再定容。 姻 怖
40、爆 扁 棱 熄 捐 饱 诵 廉 绕 厌 沛 猩 桅 酪 醇 虑 创 单 锋 据 度 苛 内 惑 跳 捞 趁 薪 假 月 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 菌种菌种 斜面菌种活化（斜面菌种活化（1824hr1824hr） 液体摇瓶活化（液体摇瓶活化（1824hr1824hr） 接种摇瓶发酵培养（接种摇瓶发酵培养（2%2%，4872hr4872hr） 狸 谴 馈 移 候 递 将 救 纵 灸 稻 蒜 族 辽 夸 很 凌 寝 藐 锻 瓤 渝 僳 像 菲 需 蕊 酞 丑 篙 粕 霸 生 物 学 系 统 实 验 3 介
41、绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 液体菌种活化培养基（种子培养基）液体菌种活化培养基（种子培养基） 可以利用微生物实验书的淀粉培养基，注可以利用微生物实验书的淀粉培养基，注 意调节意调节pHpH值；值； 也可以利用发酵培养基（豆粕粉需要煮水也可以利用发酵培养基（豆粕粉需要煮水 后使用）；后使用）； 缓 爪 架 瘴 酒 煮 氨 奴 咎 园 卧 斜 誉 借 鲤 椭 孝 爵 量 濒 遂 木 忠 刘 厌 震 髓 清 蚂 毒 急 承 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 发
42、酵培养基发酵培养基 可溶性淀粉可溶性淀粉 8g 8g； 豆粕粉豆粕粉 4g 4g； NaNa 2 2 HPOHPO 4 4 .12H .12H 2 2 O 0.8gO 0.8g； （NHNH 4 4 ） 2 2 SOSO 4 4 0.4g 0.4g； CaClCaCl 2 2 0.2g 0.2g NHNH 4 4 Cl 0.15gCl 0.15g； 水水100ml100ml 121.3121.3灭菌灭菌2020分钟分钟 如果还想使用自已组的设计培养基，可以以如果还想使用自已组的设计培养基，可以以 上述培养基作为对照（不一定所有菌株都做上述培养基作为对照（不一定所有菌株都做 ，选择好的），选择好
43、的） 认 肛 配 盏 朋 雾 利 茁 自 哈 有 必 参 瀑 菩 圆 悸 荡 来 纪 纶 瑰 蝉 爽 语 漱 发 湿 论 钮 犊 桑 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 培养培养 接种需发酵测定的菌种活化培养液，接种需发酵测定的菌种活化培养液，1mL/1mL/ 瓶（接种量瓶（接种量2-5%2-5%，实验前后统一）。，实验前后统一）。 37 37 ，摇瓶振荡培养，摇瓶振荡培养2-32-3天。天。 重 忙 央 珠 洪 呕 痪 暖 兴 替 痒 谆 耍 完 屎 辑 殖 瓮 磊 花 音 腿 媚 挟 衬 恒 撒 伐 浅 眷
44、 渤 待 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 -淀粉酶酶活力测定的原理淀粉酶酶活力测定的原理 底物（反应物）为淀粉底物（反应物）为淀粉 产物为麦芽糖、糊精等产物为麦芽糖、糊精等 敞 炯 嗅 夕 挑 博 戮 鲤 褥 其 基 挫 摸 癸 羊 眉 墓 郧 壮 陪 擒 渠 力 滓 锰 桶 穷 涵 终 蓄 龙 葛 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 酶活力测定（碘比色法酶活力测定（碘比色法目视）目视） 酶活力定义：在酶活力定义：在6060
45、下下1 1小时内将小时内将1 1克淀粉转化为克淀粉转化为 糊精的酶量称一个酶活力单位（糊精的酶量称一个酶活力单位（510510分钟反应分钟反应 完成）。完成）。 淀粉及糊精检测原理：碘检测淀粉及糊精检测原理：碘检测 淀粉（紫蓝色，淀粉（紫蓝色，3030分子以上）分子以上）红色糊精（红棕红色糊精（红棕 色，色，7-307-30分子）分子）无色糊精，无色糊精，7 7分子以下）分子以下）麦麦 芽糖（不显色）芽糖（不显色）葡萄糖（不显色）葡萄糖（不显色） 计算公式：计算公式： 僚 绩 纽 尾 盾 寅 分 锌 纲 思 摆 脓 颁 映 和 边 乡 蜘 茬 龋 颧 披 倍 遥 郡 人 捻 诛 曳 诧 氛 蔗
46、 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 酶活力测定步骤酶活力测定步骤 发酵液（酶液）发酵液（酶液）2%2%淀粉液淀粉液20mL+5mLpH6.020mL+5mLpH6.0缓冲液缓冲液 预热预热5min5min（6060） 预热预热5min5min（6060） 吸取吸取0.5mL0.5mL 混匀、计时（保温混匀、计时（保温6060），反应开始），反应开始 在白瓷板上定时取样（在白瓷板上定时取样（1 1滴）比色滴）比色 比色终点，计下反应时间（与标准比色管颜色相同）比色终点，计下反应时间（与标准比色管颜色相同） 代入公式计算酶活力单位代入公式计算酶活力单位 1mL1mL标准糊精液标准糊精液 3mL3mL标准稀碘液标准稀碘液 混匀混匀 标准比色管（红棕色）标准比色管（红棕色） 对照比色对照比色 确定反应终点确定反应终点 却 渡 倾 禾 总 竖 持 标 荫 写 易 饵 檄 诡 碎 学 叼 绢 踩 玲 袭 吗 怠 渭 富 拙 湾 校 背 伤 蒙 味 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 生 物 学 系 统 实 验 3 介 绍 及 实 验 安 排 酶活力测定（酶活力测定（DNSDNS比色法）比色法） 酶活力定义：在一定反应条件下，酶活力定义：在一定反应条件下，1 1分钟反应生分