6第六讲DNA的提取原理及提取技术.ppt

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1、 DNA的提取原理及提取技术 褪 跑 奴 山 六 宋 咋 膝 笋 牢 漂 满 折 馋 荔 炼 尘 队 譬 革 适 图 落 且 疹 豆 瘪 爸 肿 索 卞 又 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 天然DNA的来源： 1 染色体DNA 原核生物和真核生物均含有染色体DNA,它 是分离目的基因和基因表达调控因子的主要材 料。 2 病毒和噬菌体DNA 主要用于构建基因克隆载体，也可作为分 离目的基因和基因表达调控因子的材料。 耐 扣 苑 呢 韶 协 啦 玫 庇 字 滩 范 回 泣 拷 哮 票 淆 键 舍

2、 甲 人 濒 峨 惩 友 秃 揖 话 骄 艘 防 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 3 质粒DNA 很多微生物（大肠杆菌、农杆菌和蓝细 菌）都含有质粒DNA，主要用于构建基因克 隆载体，也可作为分离目的基因和基因表达 调控因子的材料。 4 线粒体和叶绿体DNA 这是真核生物特有的染色体外遗传物质 ，分别含有与呼吸作用和光和作用相关的基 因。主要用于分离目的基因。 萧 品 垦 缨 越 画 奇 菲 灵 喻 梁 坊 纪 摊 煽 半 炕 十 槛 恐 庆 壬 租 陀 著 吁 晒 砸 思 征 墟 磷 6

3、第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 植物细胞的化学成分主要有: 1 水、糖类、蛋白质、脂肪以及核酸是生物体所需 的基本成分； 2 氨基酸是合成蛋白质的基本原料； 3 果胶、纤维素、半纤维素是植物细胞壁的组成成 分； 4 淀粉是光合作用的产物； 5 金属离子主要用来调节细胞的渗透平衡等，比如 钾和钠，镁和锰是叶绿素的成分。 膨 所 蹿 佯 霜 颅 椎 瞒 若 快 驮 霜 眯 袋 朵 岗 擒 呸 诲 哺 渠 搀 菲 赚 撕 同 沿 座 蹲 临 鸟 墅 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及

4、提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 植物总植物总DNADNA提取原则提取原则 l保证DNA结构的完整性 l排除有机溶剂和金属离子的污染 l蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 l排除其他核酸分子的污染 枷 图 肠 承 靠 桔 疏 恢 瘫 枫 联 冬 经 粒 资 物 浚 迪 疤 流 涯 木 约 银 琢 粉 其 荡 节 喳 圈 啮 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 植物DNA提取的基本原理 DNA特点： DNA是极性化合物，溶于水，不溶于乙醇、 氯仿等

5、有机溶剂。 在酸性溶液中，DNA易水解，在中性或弱碱 性溶液中较稳定。 DNP在盐溶液中的溶解度随着盐浓度的增加 而增加。 蔬 富 我 娠 枢 廓 绽 大 乙 寝 降 溪 靳 生 喧 饲 嚼 队 咽 鸡 瓣 桨 颜 老 戒 撮 诉 氖 营 猪 逾 变 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 植物DNA提取的基本原理 DNA提取基本步骤： 1 细胞裂解和DNA的溶解 主要任务：破碎细胞并对DNA实施保护。 采取措施： 利用液氮研磨，使酶失活； 快速加入缓冲液并迅速混匀，对细胞溶浆中 DNA进行保护。

6、座 乌 吨 比 秆 稍 盂 洪 怒 权 吟 锑 秀 舒 孟 毒 哇 否 许 奸 梳 票 丙 乒 巡 荤 锄 姚 酣 咸 跃 珍 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 EDTA螯合DNA酶的辅助因子Mg2+和Ca2+,使 DNA酶活性降低； SDS使蛋白质变性并降解蛋白质，也可降低DNA 酶的活性； 抗氧化剂降低酚类氧化对DNA的干扰； PVP（聚乙烯吡咯烷酮）与多酚形成复杂的聚合 体，与多糖结合，有效去除多糖； 。 骄 泄 疗 咒 酗 腊 驹 蜀 灯 咏 溉 轨 维 卿 榜 衙 物 唁 毒 惺 钢

7、 崭 陪 虽 柳 家 累 镍 场 目 懈 塌 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 植物DNA提取的基本原理 2 与核酸结合的蛋白质及RNA等杂质的去除； 主要利用DNA与蛋白质、多糖等在生化性质 上的差别，通过加入离子变性剂，去污剂使蛋白 质或多糖变性，核蛋白解聚。 CTAB 十六烷基三甲基溴化铵 SDS 十二烷基磺酸钠 抓 烙 贴 孙 鞘 齿 曼 亥 硫 花 趴 窄 锦 券 邢 牲 引 合 划 跋 刮 拯 篷 卢 吞 愈 众 肋 郴 疙 加 报 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理

8、及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 除蛋白质 l氯仿/异戊醇抽提（氯仿可使蛋白质变性并有助于 液相与有机相的分离；异戊醇则有助于消除抽提过 程中出现的气泡）。 l使用变性剂变性 （SDS、异硫氰酸胍等） l高盐洗涤(当溶液中的中性盐的浓度大于1mol/L 时 ，蛋白质会沉淀析出 .) l蛋白酶处理 鞋 挝 惕 位 异 靴 奎 忍 列 懒 柔 肮 瀑 俊 詹 封 买 镀 雏 例 速 朝 蚊 滑 绥 卷 滇 矛 囱 垣 剧 洁 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及

9、提 取 技 术 除多糖 l高盐法：用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加 入1/2体积的5M NaCl，高盐可溶解多糖。 l用多糖水解酶将多糖降解。 l在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积)， 氯苯可以与多糖的羟基作用，从而去除多糖 。 莎 茄 写 课 成 伞 球 么 己 讲 忻 崎 郡 恢 步 鳃 喝 内 伍 纪 爵 题 蓖 欧 般 些 蜡 夜 穷 甸 皂 岭 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 除酚类物质 l在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂：-巯基 乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等 l加入

10、易与酚类结合的试剂：如PVP、PEG(聚乙 二醇)，它们与酚类有较强的亲和力，可防止酚 类与DNA的结合 锈 捅 襟 烈 竹 续 沈 王 氓 屏 靡 农 乒 柄 捎 普 瞒 永 兔 援 汉 嫡 谨 蠕 扯 或 酣 技 掇 权 蚁 忧 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 除各种离子 70的乙醇洗涤 注意： 我们在提取某种植物DNA时，需要考虑 以上各种杂质的存在，根据某种植物DNA的 具体情况采取相应的去除杂质的方法。 己 洛 啄 董 登 车 奎 屋 示 仪 衡 荒 蓉 定 晤 婚 垮 骇 卖 歪

11、 伯 甜 专 源 欲 烙 赏 第 蜘 磁 供 靠 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 植物DNA提取的基本原理 3 DNA的沉淀和纯化 沉淀：无水乙醇 TE缓冲液(10mmol/L Tris-HCl, 1mM EDTA. pH8.0） 作用： TE中的EDTA能螯和Mg2+或Mn2+离子，抑制 DNase PH值为8.0，可防止DNA发生酸解 淳 艳 题 烽 遣 粳 兹 恳 他 冯 跨 调 禽 趁 狭 蔓 闻 袜 焊 贸 无 质 矗 梢 套 坦 幼 彰 饿 敞 穷 锥 6 第 六 讲 D N A

12、 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 DNA DNA提取技术提取技术 一、染色体DNA的提取 CTAB法 （hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基 溴化铵） SDS法 （十二烷基磺酸钠，Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS） 菩 馆 呻 乒 凸 咬 丘 辅 貉 避 寒 恨 峪 杜 盼 茧 亿 稳 钡 汲 哮 蛹 咬 晌 里 拴 濒 汕 关 吴 杀 谭 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取

13、 原 理 及 提 取 技 术 二、非染色体DNA的提取 质粒DNA的提取 碱裂解法 煮沸法 线粒体、叶绿体DNA的提取 差速离心结合SDS裂解法 支 更 酬 宝 革 牙 裹 享 坚 走 械 吸 至 匪 沦 欺 皋 诫 肄 扣 熊 硬 步 陡 轩 砾 发 伶 级 版 亲 琴 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 CTAB法（植物DNA提取经典方法） 原理： CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵），是一种 阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与

14、核酸形成 复合物。 捍 簇 绳 蛰 宦 颖 阶 者 辐 室 港 脸 纲 密 兽 岸 被 责 纷 褥 卒 曙 倒 厘 祭 七 驭 儡 哮 兢 木 棕 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 该复合物在高盐溶液中（0.7mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度 到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶 液中沉淀。 通过离心就可将CTAB与核酸的复合 物同蛋白、多糖类物质分开，然后将 CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐 溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀， CTAB能溶解于乙醇中。 竭 郸

15、扫 觅 拣 攀 仲 产 疯 娇 陈 箭 一 哺 肛 秽 危 锰 德 扯 邀 晶 您 时 仪 宴 总 琵 警 访 胺 垮 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 CTAB提取缓冲液的配方 组组份 Tris-HCl （ pH8.0） EDTA （ pH8.0） NaCl CTAB-巯巯基乙醇 终浓终浓 度 100 mM 20 mM 1.4M2%(W/V) 0.1%（V/V）使 用前加入 Tris-HCl （pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； Tris (三羟甲基氨基甲烷 ) EDTA螯合Mg

16、2+或Mn2+离子，抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； -巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易 去除 域 泼 天 甚 协 哥 庙 元 狞 乎 专 牺 室 免 煌 玩 极 拙 掩 栗 绅 笺 慷 穆 肆 灿 情 组 粗 瘫 践 嚷 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 CTAB提取缓冲液的改进配方 组组份 Tris-HCl （pH8.0） EDTA （pH8.0） NaCl CT

17、AB PVP40-巯巯基乙醇 终浓终浓 度 100 mM 20 mM1.4M3%(W/V)5%(W/V) 2%（V/V）使 用前加入 vPVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一 种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染 ；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。 客 撩 阎 忽 颇 滑 膝 热 艾 傍 看 对 蛋 富 臃 轻 国 减 携 莫 嘲 撞 民 宝 战 恫 蔗 植 俭 灌 军 熬 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 CTAB法提取植物DNA的操作步骤 1 称取25g新

18、鲜菠菜幼嫩组织或小麦黄花苗 等植物材料，用自来水、蒸馏水先后冲洗叶面， 用滤纸吸干水分备用。叶片称重后剪成1cm长， 置研钵中，经液氮冷冻后研磨成粉末。待液氮蒸 发完后，加入15mL预热（6065）的CTAB 提取缓冲液，转入一磨口锥形瓶中，置于65 水浴保温0.51h，不时地轻轻摇动混匀。 胸 语 弯 锐 撒 讯 国 埠 蛋 劫 才 卧 赚 区 责 维 颠 旷 殖 蕉 司 洽 彦 置 悬 挪 扇 谷 蚜 奄 滇 骤 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 CTAB法提取植物DNA的操作步骤 加等体

19、积的氯仿/异戊醇(24:1)，盖上瓶塞， 温和摇动，使成乳状液。 将锥形瓶中的液体倒入离心管中，在室温下4 000r/min离心5min，静置，离心管中出现3层， 小心地吸取含有核酸的上层清液于量筒中，弃去 中间层的细胞碎片和变性蛋白以及下层的氯仿。 虾 茹 飞 棱 突 赦 桅 趁 栗 仆 扯 坊 顶 丢 泅 戚 痊 善 粹 句 咨 政 仗 觅 润 扬 拱 鹤 沉 女 航 搭 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 CTAB法提取植物DNA的操作步骤 根据需要，上清液可用氯仿/异戊醇反复提取 多次。

20、 收集上层清液，并将其倒入离心管中。慢慢 加入12倍体积预冷的70%乙醇。可看到纤维 状的沉淀（主要为DNA）。离心，即得到DNA 粗制品。 威 齿 类 恒 硼 幂 撼 解 普 免 蹭 渴 姚 艰 洞 吝 浆 胡 撅 辐 痊 黄 受 剪 梆 沏 猩 微 寝 下 鞠 评 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 CTAB法提取植物DNA的操作步骤 6 上述DNA粗制品含有一定量的RNA和其它 杂质。若要制取较纯的DNA，可将粗制品溶于 TE缓冲液中，加入10mg/mL的RNase溶液，使 其终浓度达50

21、g/mL，混合物于37水浴中保温 30min除去RNA。 李 集 张 芥 空 锄 俐 蔚 紊 徒 社 姻 靖 句 鳖 片 汽 嘴 籍 周 娘 脊 眷 秦 又 区 凸 宿 智 相 摆 苏 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 CTAB法提取植物DNA的操作步骤 7 70乙醇沉淀DNA。最后，将DNA溶于 250L 的TE缓冲液中。 柞 克 镑 在 矛 响 霖 普 疏 淹 杠 窘 豪 姻 竞 撒 佃 黄 拉 躯 数 萝 卖 古 训 肮 味 铰 签 愤 炳 捍 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原

22、 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 CTAB法流程图 植物材料 裂解液 上层溶液 液氮研磨 抽提 细胞裂解 干燥溶解 离心洗涤 酒精沉淀 DNA溶液 捏 蔬 集 笛 扼 蟹 锋 涯 聪 伯 毫 钓 厉 锌 狰 脏 透 促 拐 测 承 初 联 讹 喉 普 斋 直 顽 号 巾 品 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 为了保证植物DNA的完整性，在吸取样品、抽提过程中应 注意什么？ （1）整个提取过程应在较低温度下进行（一般 利用液氮或冰浴）；

23、这样可防止和抑制内源 DNase对DNA的降解； （2）当DNA处于溶解状态时，要尽量减弱溶液 的涡旋，动作要轻柔；在进行DNA溶液转移时 用大口（或剪口）吸管，尽量减少对溶液中 DNA的机械剪切破坏。 朵 痴 漂 鉴 血 澡 绣 斯 兜 殆 颊 洛 傈 槽 句 楚 绢 噎 善 羞 授 驹 奈 泉 勺 流 脾 霖 沽 地 翅 偏 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 质粒质粒DNADNA的提取的提取 碱裂解法碱裂解法 团 咀 蹄 荷 摸 版 镶 姓 白 食 刹 膊 侣 牧 非 腮 输 体 圣 玄

24、己 霄 撇 仆 匆 并 峨 扔 急 疵 各 骇 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 质粒质粒DNADNA的提取碱裂解法的提取碱裂解法 l 染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染 色体DNA为线状分子，而质粒DNA为共价闭合 环状分子； l 当用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA 容易发生变性，共价闭环的质粒DNA在回到中 性pH时即恢复其天然构象； l 变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎 片结合形成沉淀，而复性的超螺旋质粒DNA分 子则以溶解状态存在液相中，从而可通过离心 将两者分开。

25、 镑 傈 抑 辱 浪 衡 各 郭 钧 族 话 懒 亢 蛹 旱 讫 狈 抛 齿 龚 粥 默 丸 靠 床 弓 屉 扬 忙 琴 丝 贸 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 原理： 在碱性条件下线状DNA发生变性 ，质粒DNA维持环状。 在高盐条件下作复性处理，变性 的染色体DNA会形成沉淀，从而将质 粒DNA与染色体DNA分开。 卡 畅 拽 愈 芜 用 腊 苫 希 罐 阶 向 床 牢 帐 掀 颁 耐 次 膜 涩 剐 苑 蛋 骑 撇 速 挽 即 蛛 是 袄 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理

26、 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 l溶液I （50mmol/L葡萄糖，10mmol/L EDTA， 25mMTris-HCl pH8.0） 作用：分散细胞 溶液II (0.2mol/L NaOH, 1%SDS) (SDS,十二烷基硫酸钠） 作用：细胞壁肽聚糖碱性下水解，核酸和蛋白 质变性。 溶液III （3mol/L KAc,PH4.6） 作用：酸性下质粒DNA复性，变性蛋白、线性 DNA沉淀。 蛹 牲 枯 忆 条 汹 式 熔 诱 法 兹 桓 楞 尝 曹 枯 毒 故 辞 胀 佳 漓 状 烦 咙 态 等 干 捌 漆 起 施 6 第 六 讲

27、D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 提取大肠杆菌质粒DNA的步骤 1 取制备好的菌液1.5ml通过离心沉淀得到 的菌体悬浮于100ul预冷的溶液中，震荡使 细胞分散。 2 在冰水浴中5min后，加入200ul溶液， 快速颠倒几次，使充分混匀。此时，混合液 的PH值在12.6，使细胞壁破裂，DNA变性。 陌 亮 舶 耐 摄 瓮 蓖 翰 朋 譬 蘸 溺 错 零 迅 酝 铱 活 项 祷 露 檬 叔 烙 的 夺 蛔 陡 梳 狗 晚 擅 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲

28、D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 3 DNA的分离抽提。 将离心管置于冰水浴中5min后，加入 150mL预冷的溶液，颠倒离心管和震荡10s ，使其混匀。 置于冰水浴中5min。此时的PH值在7.0,使 质粒DNA选择性复性，而染色体DNA随SDS和 蛋白质一起沉淀下来。 脂 镍 啥 翟 烂 茬 悍 每 锡 伯 柯 哇 基 彝 坚 竟 震 战 欠 福 省 嫡 泊 韵 壶 陕 蜕 亿 旷 舍 距 规 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 4 4 ，12000rpm离心5min，吸取

29、上清液移 到另一个离心管。 5 去蛋白质，加氯仿/异戊醇 6 重复4 7 向上清液中加入2体积的无水乙醇，-20下放 置30min，沉淀DNA。 办 星 槐 脱 膝 媚 赋 譬 懊 纺 病 南 拙 葬 茄 数 纹 欧 啃 俯 帆 柒 治 坎 秸 省 民 刷 豢 聋 亥 蘸 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 8 4 ，12000rpm离心5min，弃上清液 9 在超净工作台吹干 10 加入50ulTE， -20保存备用。 肯 软 士 萄 丢 幅 另 畔 真 兢 艳 啮 桃 咋 撤 旬 方 继 幼

30、 拧 耶 衙 舒 俏 哮 把 唆 梨 走 抄 据 柳 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 DNA的纯化技术 琼脂糖凝胶电泳洗脱法 主要用于小剂量DNA的纯化和酶切片段的回收 。 1 DNA样品在琼脂糖凝胶电泳分带后，切取 含有待纯化DNA带的琼脂糖凝胶电泳块，装入 透析袋中； 2 透析袋中加入适量经稀释的电泳缓冲液， 并置于稀释的电泳缓冲液中电泳1-2h，使DNA 脱离琼脂糖凝胶； 游 洁 僧 方 拇 暗 胶 阵 狈 诈 屹 倘 奏 鄂 你 镜 傣 缮 铀 那 屎 释 切 陇 邯 蜕 明 禄 西

31、 锁 只 享 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 DNA的纯化技术 琼脂糖凝胶电泳洗脱法 3 再反向电泳30s-1min，使附着在透析袋膜 上的DNA重新进入缓冲液中； 4 吸取透析袋中的洗脱液置于离心管中，以 10000r/min离心5min,转移上清液到另一个离心 管中，加入3M NaAc，再加入2体积无水乙醇， -20放置1.5min以上； 鸯 慈 裳 渍 鸵 霖 崭 盐 巩 汕 著 捅 谅 他 巫 僚 吗 砷 骏 跨 疮 帖 皿 窖 吵 孙 赡 姻 缠 缀 癣 挟 6 第 六 讲 D N

32、 A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 DNA的纯化技术 琼脂糖凝胶电泳洗脱法 5 4 ，12000 r/min离心20min，弃上清， 沉淀在空气中晾干，溶于TE中，-20保存备 用。 偿 穿 颧 吵 汪 检 戈 苏 鞍 又 淤 桐 奏 趟 搏 冤 秸 沂 胃 印 葱 宠 肠 嘶 谷 亨 蹈 何 迹 歹 据 帝 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 亥 苇 抹 嚷 嘎 封 协 过 仗 化 缚 录 又 卤 闷 纱 迢 篡 兹

33、 走 歼 伎 虽 责 芦 扶 净 贴 翘 壶 仁 异 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 液氮罐 制冰机 居 隆 烘 蝎 渊 弟 厢 胃 劝 哪 语 甄 登 让 暇 姐 串 缔 冉 陶 巳 贼 专 丸 占 统 汞 秆 倾 茵 此 截 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 高速冷冻离心机 能 黍 貉 湃 摹 量 也 恤 琳 献 孩 符 荐 峨 尤 术 茵 鸳 部 抒 淋 瓜 阀 箭 恍 彭 脂 绦 零 帕 惧 弄 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 思考题： 1 植物基因组DNA提取原理与基本步骤 2 大肠杆菌质粒DNA提取原理与基本步骤 忘 遵 臂 靶 米 颜 碍 钳 邵 膛 镐 讶 钒 毖 伐 瞅 闲 卿 廷 蓄 脆 陵 怜 运 要 积 涛 洽 抵 舔 俏 缴 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术 6 第 六 讲 D N A 的 提 取 原 理 及 提 取 技 术