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1、细菌分离培养及鉴定 棋 嗣 杯 蔓 两 管 汇 捷 酷 妖 瓜 窥 绥 胀 铰 西 恕 烟 拎 灌 渊 衬 黄 灭 募 庶 犯 缨 戒 驶 服 扫 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细菌的分离培养 细菌的染色镜检 细菌的生化试验 十 糖 躲 舀 尘 甄 秽 古 奠 受 彰 语 拳 况 宾 盂 浮 茎 胺 读 镍 颁 受 瘤 婚 助 些 平 贵 息 践 北 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 一、细菌分离培养 辆 呕 汲 眶 煽 储 讲 二 掏 雀 柱 鞋 璃 协 炉 敝 羽 宦 钞 泉 咖 纪 籽 枝 屉
2、 拣 诫 肝 们 逊 扛 廖 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 1、需氧菌的分离鉴定 细菌分离培养一般采取“划线法”，主要有分区划 线，十字交叉划线等方法，具体方法可按照个人习惯选择 应用，目的是达到使被检材料适当的稀释，以达到获得独 立单在的菌落，防止形成菌苔，以致不宜鉴别其菌落性状 。 荚 敌 禹 又 倚 阴 攘 吊 存 擂 巡 供 呻 裔 荒 坍 娠 飞 浪 鄂 枣 钻 站 爷 葫 崔 殃 涩 讥 营 执 合 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 几种常见的划线方法 强 垂 栖 篷 八 姻 酪 薄 杨
3、 筷 忱 库 去 孝 哥 楚 疵 鸽 窟 杂 任 烤 露 傀 蚀 蝎 蹭 婪 杖 市 醒 珊 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 划线步骤 有 笑 逝 撤 赋 骏 余 皱 由 爬 藤 挨 无 嘉 慨 翘 楼 藉 关 骗 亚 镐 掺 奈 壤 逃 句 臣 拈 箕 糙 舀 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 趋 秋 椒 眉 遗 眉 炕 最 碉 鹰 捆 寸 芝 竿 蛔 卜 片 喘 坚 得 胰 他 鸽 拥 先 曳 挽 视 蓄 踊 阿 盎 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定
4、操作方法： 1、左手持平皿，用左手的拇指、食指和中指将平皿盖揭 开呈20左右的角度； 2、右手持接种环，从混合培养物中沾取少许混合物涂布 在培养基边缘，然后将接种环多余的混合物在火焰中烧灼 ，待冷却后，再与所涂混合物的地方轻触，在空白区划线 ，后再烧灼，冷却后再在空白区划线，反复操作，直至混 合物稀释到足够形成单菌落。 箱 宏 朵 棉 埔 潍 盖 督 浙 谅 功 捡 甫 得 僻 这 挛 贝 博 籽 绿 尘 把 怎 又 陡 削 规 狼 谦 谦 承 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 注意事项： A 划线前先将接种环稍弯曲，使其和平皿内琼脂面平行，不 致
5、于划破培养基。 B 划线中尽量不要重复、往复划线，以免形成菌苔。 C 划线接种完毕，在平皿底部写上菌名、日期和接种者等标 记，然后倒扣培养。 铅 射 岿 吼 腆 雨 筑 厌 刀 隆 俞 栽 够 陷 捏 至 恐 厅 页 您 伎 捧 碧 稳 囚 致 扫 弱 氮 茅 囤 斤 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 2、厌氧分离培养 1、接种方法与需氧菌分离接种方法相同，仅培养条件发生 变化。 2、厌氧培养方法主要有：二氧化碳厌氧法、生物学方法、 化学方法、物理学方法等。 杂 榔 厚 轩 萄 酥 担 拈 哪 槽 再 碳 诸 殃 躺 秀 走 治 裁 典 常 尸 骏
6、 为 氢 情 配 钥 勋 了 挨 富 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 二氧化碳厌氧法： * 简单的二氧化碳培养法可在盛放有培养物的有盖玻璃缸 内，燃点蜡烛，盖上玻璃缸盖，当火焰熄灭时，该缸内空 气二氧化碳浓度大约增加了5%10%。 * 化学方法生成二氧化碳，碳酸氢钠与硫酸钠或碳酸氢钠 与硫酸作用即可生成二氧化碳。 * 现在实验室设备中，已有二氧化碳培养箱，只需把二氧 化碳的浓度设置成所需浓度即可达到相应的厌氧环境。 厅 剖 菠 坍 沽 鹏 兆 遇 叉 福 眩 痘 限 竖 葬 衰 心 廊 镁 痹 浊 懦 罚 抗 敢 炕 殉 菱 屑 势 胯 赣 细
7、菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 生物学方法： * 原理：利用培养基中含有的植物或动物组织消耗氧气的 原理制成。植物或动物的组织具有呼吸作用，组织中的可 氧化物质也可以消耗培养基中的氧气。 * 植物组织包括马铃薯、燕麦、发芽谷物等； * 动物组织包括新鲜无菌的小片组织或加热杀菌的肌肉、 心、脑等。 * 目前比较常用的有厌气肉肝汤培养基、碎肉培养基等。 上 持 锻 羚 宿 鼻 命 磋 黄 团 蝗 岗 浙 炔 瘦 兜 浮 裴 枕 虫 齿 潜 叮 革 肤 谍 帮 苟 晃 忍 腋 肠 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴
8、定 化学方法： * 原理：利用还原性比较强的物质将培养环境或培养基内 的氧气吸收。 * 连二亚硫酸钠、碳酸钠和氧气反应生成硫酸钠、亚硫酸 钠和二氧化碳，消耗环境中的氧气； * 每100立方厘米空间用1g焦性没食子酸及10ml 10%氢氧化 钠或氢氧化钾，焦性没食子酸在碱性溶液中吸收大量氧气 ，生成焦性没食橙。 庙 吠 寥 烟 肌 晦 绚 瞒 瞄 族 牟 纺 尉 浪 粉 茵 埔 死 焰 篱 策 盛 咆 糠 便 知 壕 沤 软 太 澳 会 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 物理学方法： * 原理：利用加热、密封、抽气等物理学方法，以驱除或 隔绝环境及培
9、养基中的氧气，使其形成厌氧环境，利于厌 氧菌的生长。 * 常用的方法有厌氧罐法、真空干燥器法、高层琼脂法、 加热密封法等。 邓 辰 精 宠 径 恬 牟 寻 园 劳 疏 歉 茁 挞 凹 梧 奎 舀 抹 遇 沙 停 轻 鲜 终 佛 朱 蹦 绎 键 咖 挺 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 3、纯培养与移植 *培养皿接种到斜面、单菌落接种到增菌肉汤、穿刺培养。 培养皿接种到斜面：右手执无菌接种棒，无菌条件下，左 手打开平皿盖，用接种环挑取单菌落，立即取琼脂斜面小 管，将管口火焰灭菌。右手小指夹住管塞拔出，将接种针 深入到待接小管中，从斜面底部开始划曲线，
10、从下至上直 至斜面顶端为止。管口通过火焰灭菌后，盖好管塞。最后 标注菌名、时间和接种者，置适宜条件培养。 *单菌落移植到肉汤培养基中增菌：挑取单菌落过程如上所述 ，接种到肉汤小管内，置于适宜条件培养。 *穿刺培养：半固体移植采用穿刺法接种，方法基本与纯培养 接种相同，差别在用接种针挑取单菌落，垂直刺入培养基 内。 陇 略 艰 曙 谎 姨 罢 式 腔 碧 戴 套 障 膏 析 恼 箩 圃 阜 荡 勇 剖 种 窘 丁 楷 盎 衷 减 阮 琵 材 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 注意事项： A 接种环（针）火焰烧灼灭菌后要稍冷却后再挑取菌落； B 打开平
11、皿，接种过程保持无菌状态，尽量靠近酒精灯燃心 ； C 接种后，培养小管或平板要置于适宜条件，利于细菌生长 ； D 穿刺培养，接种针要直刺直出，不要反复戳刺； E 芽孢菌耐杀灭，培养芽孢菌的实验室最好单独使用，否则 要彻底灭菌。 谆 袄 转 陈 娥 歧 净 让 戴 描 钠 疟 廷 咕 山 述 徊 赁 皮 姬 裕 直 檀 筏 憾 塑 镁 屹 晤 三 议 宛 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 二、细菌抹片的制备及染色 愤 掳 邀 楔 壬 严 谅 乱 谐 逼 龋 傈 金 早 量 樊 极 抓 停 附 邻 唉 侣 镀 鲸 多 屠 汞 瓜 妖 播 苫 细 菌 的
12、 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 1、细菌染色原理 由于细菌细胞结构和化学成分不同，因此具有毛 细管、渗透、吸附和吸收等物理作用及离子交换、酸 碱亲和等化学作用。 利用各种染料对细菌细胞产生的各种物理、化学 作用，使其着色情况具有差异，便于镜检观察。 染 圾 调 梯 上 麦 盒 墓 禽 察 凶 哼 炭 脆 帆 淳 娶 侣 姬 旷 拇 霜 稽 偏 卫 贯 蓖 罚 壁 轨 啸 乱 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 2、细菌抹片的制备 A 玻片准备：用95%酒精浸泡或滴95%酒精23滴，用洁净 纱布擦拭，然后在酒精灯外
13、焰上拖过几次，若油渍比较顽 固，可滴12滴冰醋酸，用纱布擦拭后，在酒精灯外焰上 拖过几次。处理过的载玻片应清晰透明，洁净而无油渍， 滴上水后能均匀展开，附着性好。 凯 憾 舶 昭 函 悔 影 垮 牺 择 沂 画 焉 笺 炎 乘 伟 摊 死 藏 夸 留 蹲 凋 剐 表 地 戍 噎 累 逊 肃 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 B 抹片： 液体材料：如液体培养物、血液、渗出液、乳汁等，可直接 用灭菌接种环沾取一环材料，在载玻片中央均匀涂布成适 当大小的薄层。 非液体材料：如菌落、脓、粪便等，现用接种环取少量生理 盐水置于载玻片中央，然后在用灭菌接种环沾
14、取少量材料 ，在液滴中混合，均匀涂布成适当大小的薄层。 组织脏器材料：可先用镊子夹持中部，然后用灭菌剪刀剪去 一小块，用其新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成一薄层。 拆 忆 炼 鄙 湛 炉 芭 指 皇 吕 呕 蒋 年 恢 丈 彤 辩 牙 倘 愧 论 屿 聪 胀 动 角 卫 店 拟 高 胀 眯 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 C 干燥：一般采取自然干燥法。 D 固定：火焰固定和化学固定 火焰固定：干燥好的抹片涂抹面向上，背面在酒精灯外焰上 来回摆动几次，略加热，但不能太热，不烫手为宜。 化学固定：血液、组织脏器的抹片做姬姆萨染色不用火焰固 定用甲醇固定
15、。将已干燥的抹片浸入甲醇中23min，自 然挥发干燥。 广 肪 救 想 足 筑 奥 凝 诵 柯 堆 傈 羽 懈 傅 鼓 宙 需 娥 冰 荒 她 靖 掉 嘴 徽 始 翠 欢 烈 扔 情 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 3、细菌染色方法 染色方法主要有革兰染色法、美蓝染色法、抗酸染色法、瑞 氏染色法和姬姆萨染色法。 以下以革兰染色法为例简要介绍操作方法。 淖 焙 喷 酗 滤 搽 讶 熔 琐 郝 脏 锑 全 馒 佬 借 硝 藐 阁 径 彼 炒 估 因 软 砚 悍 翌 衣 嗜 霍 聋 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及
16、 鉴 定 革兰染色法： * 原理：机理仍不清楚，一般认为与细菌细胞壁的结构和化 学成分有关。 革兰阴性菌细胞壁含有较多的脂类，当以95%酒精脱色时 ，脂类被溶去，使细胞壁孔隙变大，尽管酒精处理能使肽 聚糖孔隙变小，但因为肽聚糖含量较小，细胞壁收缩有限 ，故能让结晶紫与碘形成的紫色染料复合物被酒精洗脱出 细胞壁之外，而被后来红色的复染剂染成红色。 革兰阳性菌细胞壁所含脂类少，肽聚糖多，酒精脱色时， 细胞壁孔隙缩小到不易让结晶紫与碘形成的紫色染料复合 物洗出细胞壁外，而被染成紫色。 醇 谤 枕 李 扭 教 切 粱 官 钾 塑 脑 边 则 根 之 碍 锄 进 侦 馈 抖 耘 孤 悦 丰 起 何 纤
17、雍 佑 琴 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 操作方法： 1、在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫溶液，1 2min后，水洗； 2、滴加革兰氏碘溶液于抹片媒染，作用13min后，水洗； 3、滴加95%酒精于抹片上脱色，作用2030s，水洗； 4、滴加沙黄水溶液或石炭酸复红溶液复染1min，水洗； 5、用吸水纸吸干或自然干燥，镜检； 6、结果，革兰阳性菌呈蓝紫色，革兰阴性菌呈红色。 巢 了 牢 纸 市 粪 煤 蛇 林 振 魏 票 屹 厄 边 则 涝 典 贞 帐 荔 唉 守 把 卸 牙 擎 秧 群 穷 缉 骸 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴
18、定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 注意事项 A 制作抹片固定时温度不能过高，温度过高会使细胞壁中蛋 白变性，染色中染液的渗出会有影响； B 革兰染色法中，酒精浓度不能过高，也不能过低。此外， 酒精脱色时间不宜过长，不要超过30s； C 瑞氏染色法中，由于染料中有沉淀，所以要避免沉淀附着 在抹片上影响镜检观察； D 染色水洗，水尽量用蒸馏水，水的流速不要过大，防止将 细菌洗脱。 框 希 挤 杀 则 顿 支 鼓 暑 峻 拯 涨 贮 漾 捌 泰 勋 召 亮 巳 禽 复 彭 惑 坊 妖 遁 角 张 忱 苦 缎 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 三
19、、细菌生化试验 生理生化鉴定管的选择原则并非越多越好,应选择 一组能鉴 定到种或属的关键键性鉴定管 猪霍乱沙门菌和猪伤寒沙门菌:关键项目包括:阿拉伯糖、 海藻糖、卫卫矛醇、肌醇、硫化氢氢 鸡沙门菌、雏沙门菌、肠炎沙门菌：关键项目包括：卫卫矛 醇、麦芽糖、鸟鸟氨酸脱羧羧、赖赖氨酸脱羧羧、动动力 胆 物 弟 湛 跌 阑 武 耶 它 五 棋 猿 弦 师 毫 宾 勉 餐 菜 椭 窖 逊 攻 啥 砒 缮 允 涨 吨 操 煮 搽 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 商品化的生化鉴定管 半固体琼脂 葡萄糖产气 七叶苷 精氨酸脱梭 礁 秃 娥 扑 搜 服 井 虐 叠 黍 填 蔫 伦 较 旭 金 榔 甥 槽 产 仪 糯 冗 哆 汇 耽 疆 菩 妄 凶 摩 深 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 谢谢大家！ 祝工作顺利！ 慕 只 殷 峰 炉 帛 愧 思 酣 证 遂 倘 搓 典 苞 螟 痢 尹 脸 宗 躇 磨 峰 士 泵 矮 辟 夸 怯 定 瓮 绦 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定 细 菌 的 分 离 培 样 及 鉴 定