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1、第六章 食品添加剂分析 拌 课 还 栏 忘 哑 窒 耶 吐 堕 刺 奄 革 淖 忌 序 洼 缚 蘸 点 履 记 亿 剃 摧 椎 辗 恼 贞 核 惋 跃 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 6.1 食品添加剂的概况 v食品添加剂是用于改善食品的品质、延长食品 保存期、便于食品加工和增强食品营养成分的 一类化学合成或天然物质。 v它在食品的制造加工、包装处理及感官评定等 方面起了很大的作用。 v世界各国为确保食品添加剂的安全使用，制定 了有关食品添加剂的法规。食品添加剂的定量 、定性分析，是食品安全的一个至关重要的方 面。 尔 士 灰 柑 固 煎 度 挖 存 冕 林 孕 递 堪
2、 班 棕 慢 滚 掌 米 劣 拔 贞 垦 草 浸 痉 屹 悲 份 丹 琳 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 食品添加剂的分类 v按来源分：天然的和化学合成的 v按功能分： 防腐剂、漂白剂、发色剂、着色剂、酸度调节 剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、膨松剂、稳 定剂和凝固剂、胶姆糖基础剂、乳化剂、酶制 剂、增味剂、被膜剂、水分保持剂、营养强化 剂、甜味剂、增稠剂、香料及其它，共22类。 绵 槐 讽 抒 辊 滚 剖 屏 后 疵 近 捍 窜 译 葛 燎 呈 案 拇 椒 踪 翁 包 辟 丘 扛 渊 感 困 苍 阵 闷 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 几种食品添
3、加剂举例： 防腐剂：苯甲酸和苯甲酸钠、山梨酸和山梨酸钾 漂白剂：过氧化苯甲酰、SO2 发色剂：亚硝酸钠（火腿肠中含有，能使肉鲜红，且有防腐的作用） 抗氧化剂：BHA,BHT,TBHQ,维生素E,维生素C 被膜剂：紫胶（用于巧克力糖的外膜涂层，防止巧克力受潮发粘） 营养强化剂：食盐中的碘， 氨基酸， 维生素， 矿物质，如、钙、铁、锌。 袁 腕 迎 海 企 虫 队 木 唉 瞄 碳 仆 暖 伟 滞 掀 瞒 钙 餐 庞 醛 羊 获 终 捻 喜 谓 能 乒 戒 惊 勃 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 食品添加剂的作用 食品添加剂的发展大大地促进了食品工业的发 展，其所以如此，是因
4、为食品添加剂具有以下 作用： (1)增加食品的保藏性，防止腐败变质 (2)改善食品的感官性状 (3)有利于食品加工操作，适应生产的机械化和 连续化 (4)保持或提高食品的营养价值 (5)满足其他特殊需要 斥 桓 极 河 批 第 箩 丰 反 拾 粟 莎 镭 央 淀 芬 辨 县 其 蛊 聘 熟 饿 扼 侈 寞 刘 捞 杯 唁 惶 夸 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 食品添加剂的一般要求 根据多年来的工作，由动物实验对添加剂已作 出 毒理学的评价，从而规定了添加剂的“每日允许 摄取量”（Accepted Daily Intake),即ADI值。 ADI值，是指人每天允许食用的
5、量，就是说，某种 化学物质某种化学物质一个人每天食用同样的数量 ，并且长期不断食用下去，对人体也不致产生危害 的剂量。这是通过动物试验的结果将它应用到人类 而制定的。 任何对人体有重要作用的不可缺少的物质，都是 有一定限量的，超过就会对人体有害。 污 其 载 次 止 壬 逐 滋 历 涛 唬 抄 伎 攀 乙 穿 银 庇 剿 滋 扭 繁 积 拇 德 伎 亡 伶 派 雷 边 仁 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 6.2 某些食品添加剂的检测 6.2.1 防腐剂 能抑制食品中微生物的繁殖，防止食品腐败变质，延长 食品保存期。常用的防腐剂有苯甲酸及其钠盐、山梨酸 及其钾盐、对羟基苯
6、甲酸酯，以上三种防腐剂主要用于 酱油、醋、果汁、汽水、果酱、果子露和罐头等。此外 还有二氧化硫，用于葡萄酒、果酒。丙酸钙主要用于面 包、糕点、酱油、醋、黄油和乳制品。 嘛 鞋 辆 靴 朋 裤 胳 府 呛 该 虏 芒 瓜 焉 惦 猾 盗 装 饿 逗 傲 胎 搜 悔 吟 者 虱 蘸 届 御 闷 隅 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 苯甲酸、山梨酸及对羟基苯甲酸酯 样品处理 v从食品中提取苯甲酸、山梨酸最常用的方法是蒸气 蒸馏法或乙醚萃取法。 v当样品加酸酸化后，其中的苯甲酸钠盐、山梨酸钠 盐转变为苯甲酸和山梨酸，在酸性条件下可随水蒸 气馏出，导入碱性吸收液中，然后酸化。用乙醚
7、萃 取游离酸，挥干乙醚，加适当的溶剂溶解残渣，便 可进行测定。 瞅 戮 浦 乃 饲 石 叶 瑰 鄙 敞 咙 削 咐 汝 掩 祭 倪 强 招 茧 纲 解 资 憾 诞 都 速 椰 吃 吹 皱 扫 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 v有时食品中的其它干扰物质存在时对提取会造成麻烦 ，因此在提取苯甲酸、山梨酸之前应先进行样品处理 ，目的是为了防止提取过程中出现乳化现象而损失苯 甲酸、山梨酸，并消除苯甲酸、山梨酸以外的酸性物 质给测定带来的误差。具体处理方法如下： 除二氧化碳 碳酸饮料中二氧化碳可用超声法除去。 除酒精 因酒精既可溶于乙醚，又可溶于水，当用乙 醚提取苯甲酸时便容易乳
8、化，故应先加热挥去酒精， 再将样品酸化后用乙醚提取苯甲酸。 晨 沙 慎 嫌 淳 茵 嫂 枣 裁 舍 粒 慎 贤 古 咯 严 赘 揉 学 鹊 杰 杜 停 谬 饶 地 躇 骚 虽 刊 是 叮 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 除脂肪 因脂肪易溶于乙醚，而脂肪酸也能消 耗碱，当用酸碱滴定法分析苯甲酸时会带来正 误差。通常在碱性条件下用乙醚提取出脂肪， 然后再加酸酸化，并用乙醚提取苯甲酸。 除蛋白质 蛋白质是高分子化合物，结构既有 亲脂基团又有亲水基团，当用乙醚提取苯甲酸 时，蛋白质的存在会导致乳化而给分离苯甲酸 带来困难。除蛋白质的方法很多，例如盐析、 加蛋白质沉淀剂、透析等。
9、 妹 颐 酶 浴 紊 巾 腋 堕 追 微 辗 坤 纫 转 仕 霹 铆 阅 冬 拿 庐 休 秋 甘 跑 度 森 撤 诸 晰 喉 娇 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 v样品经酸化后，蒸馏法提取山梨酸、苯甲酸 和对羟基苯甲酸酯，这一方法在基体复杂的 食品中得到广泛应用。通过对大量不同样品 的分析，蒸馏法的提取率一般在75-95 之间。蒸馏法可以将防腐剂从含氯化钠和酒 石酸的基质中提取出来，导入至二氯甲烷- 水的混合溶液（75：25）中，防腐剂被提取 到有机相中，经浓缩后进行GC分析。 悠 戒 诫 锐 纹 旗 黎 岭 荚 皮 含 祭 策 晾 驹 崔 邢 纬 孟 崇 本 史 腔
10、巡 葵 射 航 辫 逮 枢 竟 贸 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 （）气相色谱法 苯甲酸和山梨酸可以被气相色谱法直接测定，一般用极性 固定相进行分离。如果将苯甲酸、山梨酸衍生为酯（甲酯 、丁酯）或硅醚的形式，则用非极性固定相分离。 例： Graveland用3磷酸-乙醚溶液提取面包里的山梨酸和苯 甲酸，离心后上清液作为样液进行GC测定，色谱柱为 2m2mm的玻璃柱，内填Carbowax20M/对苯二甲酸固定 液涂渍在60-80目ChromosorbW担体上，柱温以5/min 从100升高到210，载气为氮气65mL/min。丙酸、山 梨酸和苯甲酸在25min内完成分离
11、，最低检出量为5ng。 呛 企 肖 纵 带 惊 率 间 付 贫 衍 痢 厘 新 暗 腺 蔓 氯 涨 酗 展 棋 勿 硝 貌 头 燕 扎 阎 篓 杠 属 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 （2）液相色谱法 苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯可以用HPLC直接测定。 添加剂样品提取方法流动相及色谱柱回收率/% 苯甲酸、山梨 酸 苯甲酸、山梨 酸 苯甲酸、山梨 酸、脱氢乙酸 、对羟 基苯甲 酸酯、丙酸 苯甲酸、山梨 酸 调味品等 饮料 果酱、调味 品、饮料、腌 菜、人造黄油 果汁、饮料、 乳制品、酱、 冷食等 膜过滤 超声脱气、 膜过滤 饱和硫酸铵 水蒸气蒸馏 膜滤及乙醚 提取 2
12、5mmol/L NaH2PO4-甲醇（3：7 ）；TSKGEL ODS-80Tm柱 甲醇0.02mol/L乙酸铵（3：7） ；C18柱 0.025mol/L磷酸（pH7.2）-甲醇（ 95：5）；Inertsil-pH柱 甲醇-0.02mol/L乙酸铵（5：95） ；ODS C18柱 104-108 98-113 82-101 95-101 电 市 尊 雾 铃 蛔 层 拐 征 绎 迷 侮 惭 悄 斟 燃 揉 洽 芳 肇 厉 歇 靠 蝇 谨 导 晤 控 最 了 计 鱼 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 （3）薄层色谱法 苯甲酸、苯甲酸钠经分离提纯后，用薄层层析分离，在 紫外
13、光下或显色后与标准比较定性与概略定量。 （4）紫外分光光度法 苯甲酸、苯甲酸钠在酸性溶液中蒸发出来后，在重铬酸 钾硫酸溶液中氧化除去挥发性的杂质及山梨酸，再进行 蒸馏分离，蒸馏液在波长225nm处测光密度与标准比 较定量本法适用于酱油、酱菜、果汁、果酱等样品。 缎 牵 刑 蝶 侄 崭 氧 芽 欣 夹 龟 靳 眉 遵 财 馏 犁 彪 劳 苦 咐 狙 植 暂 迁 毋 精 该 盾 乓 赂 宰 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 6.2.2 发色剂 v发色作用，抑菌作用 v亚硝酸盐是添加剂种急性毒性较强的物质之一，其次亚硝 酸盐为亚硝基化合物的前体，具有致癌性，因此对其用量 及残留
14、量有严格的要求。 v抗坏血酸与亚硝酸盐有高度亲和力，在体内能防止亚硝化 作用，因此在肉类腌制时添加适量的抗坏血酸，有可能防 止生成致癌物质。 v虽然硝酸盐和亚硝酸盐的使用受到了很大限制，但至今国 内外仍在继续使用。其原因是亚硝酸盐对保持腌制肉制品 的色、香、味有特殊作用，迄今未发现理想的替代物质。 更重要的是亚硝酸盐对肉毒梭状芽孢杆菌的抑制作用。 逮 酌 吹 据 坠 磷 瓦 梨 商 雹 强 砰 弧 本 淹 虎 鲍 茁 轿 艾 菩 枷 理 铱 裸 叙 掘 店 麓 传 伐 弦 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 v硝酸盐和亚硝酸盐的测定方法 主要有比色法、气相色谱法和液相色谱法
15、。 （1）盐酸萘乙二胺法（测亚硝酸盐） 样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件 下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与 盐酸萘乙二胺偶合形成红紫色染料，与标准比 较定量。本法检出下限为0.1mg/kg。 祸 镑 胺 豁 领 苞 娄 伍 逊 智 阅 啃 隆 诚 讶 块 淹 锗 忽 樊 暑 凰 哗 讥 刽 熏 绩 击 男 隆 惦 注 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 （2）镉柱法（测硝酸盐用） 样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，溶液通过镉柱， 使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子，在弱酸 性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再 与盐酸萘乙二胺偶合形成红紫色染料，测得亚硝
16、酸 盐总量，由总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量 。 （3）气相色谱法 测定前要进行衍生化以形成易挥发性的物质。 硝酸盐的测定通常是将其衍生为硝基苯，用热裂解 检测器测定，检测限为100-200g/kg。 亚硝酸根衍生物的分离一般采用非极性固定相。 着 袍 剩 刊 脉 篓 保 就 朵 旬 适 杀 壮 援 眶 招 剃 凝 旱 伤 歼 克 昆 问 衍 痔 皋 以 文 商 锤 沃 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 （4）液相色谱法 v硝酸根和亚硝酸根的液相色谱测定方法，大多 采用阴离子交换法分离，然后以抑制型电导或 紫外检测。用离子交换色谱法分析食品中硝酸 根和亚硝酸根不仅简便
17、、快速，而且选择性好 、准确度高。 蛀 靖 哪 给 才 妖 渤 硒 绿 肩 瘴 沪 喳 刽 遣 涧 造 檬 搜 运 溃 宽 恤 弥 茹 稗 闸 晌 式 街 毒 倔 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 6.2.3 甜味剂 v甜味剂是指能赋予食品甜味的一种食品添加剂。 v天然甜味剂主要是从植物组织中提取出来的甜味物质， 近年也采用人工合成法获得。它可分为糖醇类和非糖类 。 糖醇类：木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、乳糖醇等 非糖类：甜菊糖苷、甘草、奇异果素、索马甜等。 v人工甜味剂主要是一些具有甜味但又不是糖类的物质。 它的品种很多，其中磺胺类有糖精、甜蜜素等；二 肽类有阿斯巴甜、阿
18、力甜等；蔗糖的衍生物有三氯蔗 糖、帕拉金糖、果糖低聚糖等。 婪 谍 穿 镍 察 桐 殆 嘎 衰 葫 枪 妈 筏 堕 敛 最 迅 宝 志 寨 况 残 匠 凶 华 缉 扭 怜 厦 楔 斟 皿 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 糖精 v糖精是广泛使用的人工甜味剂，我国规定糖精最大使 用量为0.15g/kg。 v糖精的甜味是蔗糖的500倍，但食后会有一种金属余 味，通常与甜蜜素配伍使用。由于糖精对人体并无营 养作用，也不是食品中的天然成分，应尽量少或不用 。对婴幼儿食品、病人食品和大量食用的主食食品不 得使用。 茶 彻 炭 郭 篷 锦 惩 梗 棉 或 粪 掉 二 夏 堵 华 搜
19、桅 卸 一 搂 揣 舒 莱 簿 诚 蔽 棠 瘸 炽 朋 尾 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 （）比色法 糖精经氯仿、苯提取分离后，与酚和硫酸于175加 热，转化成酚磺酞，然后用碳酸氢钠处理，形成的 红色在558nm波长测定，和标准比较而定量。 （）紫外吸收光谱法 食品中的糖精钠用透析法进行透析，用乙醚提取，转 至aHCO3溶液中加盐酸和锌粉进行还原生成二氧 化苯并异噻唑啉，此还原生成物用紫外吸收光谱法 进行定性定量测定。 品 刚 瘫 父 小 廓 僻 溉 亲 捡 弘 渤 心 邻 诞 拓 鉴 纳 酿 敏 仇 摔 操 姓 总 贷 砌 蚤 叮 土 挖 催 食 品 添 加 剂 分
20、 析 食 品 添 加 剂 分 析 （）薄层层析法 糖精在酸性条件下，用乙醚提取，浓缩后经薄层层析分 离，自薄层板上刮下，定量溶解，酸化后在波长207nm 测定。 （）纳氏比色法 糖精先经薄层分离，自薄层板上刮下，定量溶解后，加 2SO4 和H2O2 消化，使成为铵盐，然后和碘化汞、碘 化钾的复盐(HgI22KI)反应生成黄色化合物，用铵盐为 标准，间接求出糖精的含量。 序 吼 赢 磕 传 凄 氟 例 缸 美 遇 届 畜 回 鸟 高 啦 颂 整 水 眺 灼 描 诛 枕 伊 汞 遵 攀 雹 异 夜 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 （5）气相色谱法 GC法测定糖精（钠）是将样
21、品酸化后，用乙酸乙酯提 取糖精，提取液浓缩后，用甲基化试剂衍生成甲基化 合物，用GC测定。 （6）液相色谱法 HPLC法测定汽水、果汁、配制酒类中糖精钠为我国国 家标准方法中的第一法（GB/T5009.28-2003),样品处 理相对简单，将样品加温除去二氧化碳和乙醇，用氨 水（1：1）调pH值约7，过滤后就可以进样分析。 侯 熊 脐 隅 慈 紊 搐 创 企 赏 瓣 芭 板 盒 抄 滴 亭 细 喜 俺 文 旬 迪 十 佑 向 踪 赏 锨 蕊 钠 牲 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 6.2.4 色素 v食用色素按其性质和来源，可分为食用天然色素和食 用合成色素两大类。 v
22、天然色素安全性较高，但染色力弱，稳定性较差：叶 绿素，类胡萝卜素花色苷等。目前已经有170多种不同 原料的天然色素，常见的有叶绿素、类胡萝卜素、花 色苷、紫胶、胭脂虫红、红花素、栀子黄、焦糖色等 。 v合成色素着色能力强，且稳定性好，但大多数对人体 有害（一般毒性、致泻性和致癌性）：苋菜红，胭脂 红，日落黄，柠檬黄等。 换 帅 候 烂 沂 梯 阵 寡 铂 日 胶 末 拷 屡 瓢 拭 腕 因 腺 樱 慈 籽 政 坯 丢 吻 烯 伞 钨 塌 坤 秀 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 v合成色素多以苯、甲苯、萘等化工产品为原 料，经过磺化、硝化、偶氮化等一系列有机 反应化合而成
23、。因此，食用合成色素多为含 有R-N=N-R键、苯环或氧杂蒽结构化合物 ，它们对人体存在一定的不安全性或者产生 有害作用。 卫 驭 澳 趟 棺 柳 畸 镀 嫌 杆 抗 禽 候 吵 狰 醛 燃 馅 餐 躁 靠 兜 赦 挽 梁 扼 新 夹 位 协 灰 沤 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 “苏丹红”风波 “苏丹红”型色素是一种人造化学制剂，全球 多数国家都禁止将其用于食品生产。这种色 素常用于工业方面，比如溶解剂、机油、蜡 和鞋油等产品的染色。科学家通过实验发现 ，“苏丹红”会导致鼠类患癌，它在人类肝细 胞研究中也显现出可能致癌的特性。 惜 雪 应 粤 哲 霍 溜 准 柯 键
24、 慑 慕 呸 砷 镇 耕 狸 王 届 斡 渡 五 芯 湛 实 但 狰 枝 埔 频 蜡 括 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 晾 罗 川 肿 情 谐 株 玫 探 翠 桐 毕 燕 筋 河 础 班 嘉 壹 钢 赫 陌 寸 酬 崩 默 贬 纠 稽 焉 彤 渐 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 v苏丹红是一种人工合成的偶氮类、油溶性的化 工染色剂，1896年科学家达迪将其命名为苏丹 红并沿用至今。苏丹红被大量地用在工业、化 学和医学领域，用于机油、汽车蜡和鞋油等工 业产品，以及生化毒理学研究的着色剂等。 v目前，苏丹红系列常见4种，其中二号、三号和 四号均为一
25、号的化学衍生物。苏丹红一号为暗 红色；二号为红色；三号为有绿色光泽的棕红 色；四号为深褐色。 至 箭 吩 浇 壬 波 陈 滓 导 娃 五 汗 坠 译 赎 鸟 象 航 剧 弱 镇 号 欢 榔 桓 座 向 欧 厂 遵 嗽 娠 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 1995年，欧盟和其他一些国家已开始禁止在食品 中添加苏丹红一号；我国1996年出台的食品添 加剂使用卫生标准中不包含苏丹红及其系列色 素（标准中没有公布的添加剂不准用于食品中） 。2003年6月，欧盟规定所有进口的辣椒及其制 品必须检测苏丹红项目，确定未添加后方可进口 ，并要求成员国对市场上销售的辣椒及其制品进 行随机
26、抽样检测。 峭 业 烁 右 碎 瞒 坛 救 单 谤 芦 吼 裤 画 庇 淹 疤 座 段 掏 蛛 克 仙 灸 味 口 围 姿 福 腰 昼 茂 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 2005年3月，国内已经证实的“涉红”产品名单： 肯德基肯德基新奥尔良烤翅、新奥尔良烤鸡腿堡调料 亨氏美味源(广州)食品有限公司美味源桂林辣椒油和美味源金唛桂林 辣椒酱 麦当劳麦当劳西部烧烤调味汁调味料 麦当劳地戎芥末蛋黄酱调味料 麦当劳凯馓调味汁(普通脂肪型)调味料 麦当劳凯馓调味汁(低脂肪型)调味料 广州田洋食品有限公司田洋牌“辣椒红一号”复合食品添加剂 河北邯郸中进天然色素有限公司辣椒精 珠海市
27、“公仔DOLL”牌产品公仔日式碗面 牛肉味公仔米粉劲辣牛肉味公仔面 公仔拉面屋红烧牛肉(两种)公仔拉面屋红油排骨牛肉味公仔面 长沙“坛坛乡”调料食品有限公司“坛坛乡”牌风味辣椒萝卜含有“苏丹 红四号” 塘 摘 京 捻 宏 拯 滞 喘 风 讳 蛰 晤 嘛 铃 想 吠 存 向 惯 残 梗 罩 陇 膛 恬 绩 腹 晶 乾 梢 书 疤 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 v2006年11月，河北白洋淀的“红心鸭蛋”苏 丹红事件 v2006年12月，陕西出产辣椒面再现苏丹红 置 晓 并 合 些 危 耽 赊 敌 陵 攫 匀 雕 凰 行 尊 骑 娄 碘 肖 党 邹 菲 序 惧 玻 摧 涩
28、 旅 掖 屉 司 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法(GB/T196812005) 范围 v本标准适用于食品中苏丹红染料的检测。 v本标准规定了食品中苏丹红、苏丹红、苏丹红、 苏丹红的高效液相色谱测定方法。 v方法最低检测限：苏丹红、苏丹红、苏丹红、苏 丹红均为10ug/kg。 方法要点 v样品经溶剂提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色 谱紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量 。 帘 炕 腥 茫 胎 旅 耿 顺 袱 藤 率 只 壹 定 淳 刻 耍 螺 胖 搐 罪 矮 竟 舶 如 抽 袄 场 釜 酪 骨 郧 食 品 添 加
29、 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 样品处理 1.红辣椒粉等粉状样品 称取1g5g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入 10mL30mL正己烷，超声5min，过滤，用10mL正己烷 洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸 发仪浓缩至5mL以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证 层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在 全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗 浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化铝表层吸附的色素带 宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂 质的多少用10mL30mL正己烷洗柱，直至流出液无色， 弃去全部正己烷淋洗液，用含5%
30、丙酮的正己烷液60mL洗 脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45m 有机滤膜过滤后待测。 漱 顺 疲 瘦 脏 蓉 琉 肇 耿 旅 港 谅 仗 辽 蒂 县 字 旅 邱 荣 乘 伊 托 颇 讹 环 忠 筏 趴 酣 嵌 木 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 2.红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品 称取0.5g2g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入适 量正己烷溶解（约1mL10mL），难溶解的样品可于正己 烷中加温溶解。按1中“慢慢加入到氧化铝层析柱过滤后 待测”操作。 3.辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品 称取10g20g（准确至0.01g）样品于离心管
31、中，加10mL 20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品多加水，加入 30mL正己烷：丙酮=3：1，匀浆5min,3000rpm离心 10min,吸出正己烷层，于下层再加入20mL2次正己烷匀 浆，离心，合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤 后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL正己烷溶解残 渣后，按1中“慢慢加入到氧化铝层析柱过滤后待测”操作 。 英 阮 恐 懊 礼 昏 为 仁 应 壕 荚 伤 廊 泄 纫 榜 钟 裸 枣 字 绪 血 荷 核 填 酚 妆 傲 慨 利 午 误 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 4.香肠等肉制品 称取粉碎样品10g20g（准确至0
32、.01g）于三角 瓶中，加入60mL正己烷充分匀浆5min，滤出清 液，再以20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次 滤液，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸 发仪上蒸至5mL以下，按1中“慢慢加入到氧化铝 层析柱中过滤后待测”操作。 胰 械 肾 暖 厕 媚 桃 庚 德 脐 教 予 弄 肩 剑 舀 尔 癸 去 须 护 驴 誊 神 丈 衅 服 排 钮 擞 顷 肖 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 推荐色谱条件 1.仪器条件 色谱柱：ZorbaxSB-C183.5m4.6mm150mm（或相当型号色谱柱） 流动相：溶剂A0.1%甲酸的水溶液：乙腈=85：15;溶剂B0.1%
33、甲酸的乙腈溶液：丙 酮=80：20 梯度洗脱：流速:1mL/min柱温：30检测波长：苏丹红478nm；苏丹红、苏丹 红、苏丹红520nm；于苏丹红出峰后切换。进样量10l。 2.标准曲线 吸取标准储备液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL，用正己烷定容至25mL，此标准系列 浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56g/mL,绘制标准曲线。 3.计算 按公式（1）计算苏丹红含量 R=CV/M（1） R样品中苏丹红含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； C由标准曲线得出的样液中苏丹红的浓度(g/mL)； V样液定容体积，单位为毫升（mL）； M样品质量，单位为克（g）
34、。 锨 哥 幻 京 畦 媒 滓 蝉 绿 絮 杆 影 礼 徽 竞 沸 干 偶 荔 亲 插 焉 梅 魁 阻 箔 左 蚜 纽 缴 岔 突 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 苏丹红标准色谱图 掐 持 伴 秘 佣 淹 人 什 戮 普 阀 募 遣 温 女 母 滓 倚 殿 值 嘉 圭 趁 艇 刊 骤 贡 承 码 纂 碍 辨 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 孔雀石绿 一种带有金属光泽的绿色结晶体，又名碱性绿、孔雀绿 ，易溶于水，溶液呈蓝绿色。孔雀石绿是一种有效杀灭 霉菌的染料类药物，具有相当好的杀真菌效果。由于鱼 类在运输中易发生碰撞，造成鱼鳞脱落而引起鱼体真菌
35、感染，以致出现霉烂、死亡等现象，孔雀石绿恰恰可以 治疗这些鱼类碰撞伤。因价格廉、容易得、用量少、疗 效高，在过去水产养殖疾病防治中曾被广泛使用。一些 不法商贩滥用孔雀石绿，包括在运输前使用孔雀石绿溶 液对车厢进行消毒，不少储放活鱼的鱼池也采用这种方 式进行消毒。 盏 坏 瘁 菲 署 挑 卖 卒 宜 们 闲 谗 舰 妇 武 概 股 娄 粘 毁 操 靳 掇 喜 撤 狈 捕 比 德 萤 麦 生 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 v 科研结果表明，孔雀石绿具有高毒素、高残留和致癌 、致畸、致突变等副作用，有“苏丹红第二”之称。鉴 于孔雀石绿的危害性，美国、英国、日本等许多国家 已
36、禁止将其用于水产养殖业。我国也于2002年5月将 孔雀石绿列入食品动物禁用的兽药及其化合物清单 中，禁止用于所有食品动物。 v 但是,事实上包括我国和英国在内的许多禁用孔雀石绿 的国家，从对市场上销售的鱼类等水产品中孔雀石绿 的监测情况来看,仍有在鱼场中非法使用孔雀石绿的现 象。 煽 剩 流 朽 遏 讲 翻 吾 工 秆 墅 健 骏 载 汲 党 帜 硷 卒 伟 撩 嘲 玉 耿 浅 疑 虱 秽 宗 膳 暗 钧 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 被孔雀石绿浸过的甲鱼 暑 方 芒 旧 秤 掳 乞 卡 钦 削 炳 掷 见 敷 码 勋 固 募 脐 饥 支 毕 覆 紊 晴 巡 角 斑
37、绎 孜 严 旨 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定 GB/T198572005 范围 v本标准规定了水产品中孔雀石绿及其代谢物隐色 孔雀石绿（Leucomalachitegreen）、结晶紫及 其代谢物隐色结晶紫(Leucocrystalviolet)残留 量的液相色谱-串联质谱和高效液相色谱的测定方 法。 v本标准适用于鲜活水产品及其制品中孔雀石绿及 其代谢物隐色孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色 结晶紫残留量的检验。 特 氓 前 陛 玖 逛 虚 傅 箩 峙 风 绊 侣 甭 熏 覆 列 蔽 余 枚 纯 旷 彰 蒜 晴 靠 掇 汽 沁 欠
38、掂 戏 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 原理 v试样中的残留物用乙腈-乙酸铵缓冲溶液 提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯 甲烷层，经中性氧化铝和阳离子固相柱净 化后用液相色谱-串联质谱法测定，内标 法定量。 液相色谱-串联质谱法 单 痪 湾 疥 告 厚 精 要 柿 惟 汪 瓣 支 佣 撤 呈 虐 昔 衬 竹 镭 瓷 裤 韧 衔 脐 糟 酶 毙 具 勋 它 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 样品制备 1鲜活水产品 a)提取 称取5.00g已捣碎样品于50mL离心管中，加入200L 混合内标标准溶液，加入11mL乙腈，超声波振荡提取 2min，800
39、0r/min匀浆提取30s，4000r/min离心 5min，上清液转移至25mL比色管中；另取一50mL 离心管加入11mL乙腈，洗涤匀浆刀头10s，洗涤液移 入前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，漩涡 混匀器上振荡30s，超声波振荡5min，4000r/min离 心5min，上清液合并至25mL比色管中，用乙腈定容 至25.0mL，摇匀备用。 深 疾 君 敖 况 十 呜 扛 氯 邻 式 棚 市 邑 凹 本 援 现 咳 挫 鹿 傀 绷 盟 传 钙 失 祭 幌 酿 等 华 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 b)净化 移取5.00mL样品溶液加至已活化的中性氧化 铝柱上
40、，用KD浓缩瓶接收流出液，4mL乙腈 洗涤中性氧化铝柱，收集全部流出液，45 旋转蒸发至约1mL，残液用乙腈定容至 1.00mL，超声振荡5min,加入 1.0mL5mmol/L乙酸铵，超声振荡1min，样 液经0.2m滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱 测定。 履 账 抹 麓 篙 完 桌 掖 错 付 奏 恼 莽 演 缅 臼 茄 涣 祷 惹 楷 鞋 天 陛 肢 履 拣 骆 夷 质 侯 涛 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 2加工水产品 c)提取 称取5.00g已捣碎样品于100mL离心管中，加入200L混 合内标标准溶液，依次加入1mL盐酸羟胺、2mL对-甲 苯磺酸、2mL乙
41、酸铵缓冲溶液和40mL乙腈，匀浆 2min(10000r/min)，离心3min(3000r/min)，将上清液 转移到250mL分液漏斗中，用20mL乙腈重复提取残渣 一次，合并上清液。于分液漏斗中加入30二氯甲烷 、35mL水，振摇2min，静置分层，收集下层有机层于 150mL梨形瓶中，再用20mL二氯甲烷萃取一次，合并 二氯甲烷层，45旋转蒸发近干。 用 观 项 谣 架 登 杂 锌 扒 闽 驰 娠 阉 货 雍 圣 谆 催 打 驶 汞 长 挣 羚 瞬 彦 漳 肮 颓 狭 泣 叮 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 d)净化 将中性氧化铝柱串接在阳离子交换柱上方。6mL
42、乙腈分 三次（每次2mL），用旋涡震荡器涡旋溶解上述提取物 ，并依次过柱，控制阳离子交换柱流速不超过 0.6mL/min，再用2mL乙腈淋洗中性氧化铝柱后，弃去 中性氧化铝柱。依次用3mL2%（v/v）甲酸溶液、3mL 乙腈淋洗阳离子交换柱，弃去流出液。用4mL5%（v/v ）乙酸铵甲醇溶液洗脱，洗脱流速为1mL/min，用 10mL刻度试管收集洗脱液，用水定容至10.0mL，样液 经0.2m滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱测定。 知 邻 镰 汞 纬 束 咆 赠 耙 搞 龙 簇 火 这 辰 秃 哀 愁 马 颊 诌 昼 台 铜 灭 剑 问 洽 纂 甲 芬 乘 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添
43、 加 剂 分 析 液相色谱-串联质谱条件 a)色谱柱：C18柱，50mm2.1mm（i.d.），粒度3m； b)流动相：乙腈+5mmol/L乙酸铵=75+25(v/v)； c)流速：0.2mL/min； d)柱温：35； e)进样量：10L； f)离子源：电喷雾ESI，正离子； g)扫描方式：多反应监测MRM； h)雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各气体流 量以使质谱灵敏度达到检测要求； i)喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度； j)监测离子对：孔雀石绿m/z329/313（定量离子）、329/208；隐色孔雀石绿m/z 331/316（定量离子
44、）、331/239;结晶紫m/z372/356（定量离子）、372/251 ；隐色结晶紫m/z374/359（定量离子）、374/238；氘代孔雀石绿m/z 334/318（定量离子）;氘代隐色孔雀石绿m/z337/322（定量离子）。 又 密 甩 核 辈 翼 妊 惭 迟 貌 技 踢 章 徐 消 屑 庶 笆 筹 咱 屠 别 热 漳 畸 虞 廓 坟 扬 汤 核 狮 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 液相色谱-串联质谱测定 v按照液相色谱-串联质谱条件测定样品和混合标 准工作溶液，以色谱峰面积按内标法定量，孔雀 石绿和结晶紫以氘代孔雀石绿为内标物计算，隐 色孔雀石绿和隐色结晶
45、紫以氘代隐色孔雀石绿为 内标物计算。在上述色谱条件下孔雀石绿、氘 代孔雀石绿、结晶紫、氘代隐色孔雀石绿、隐色 孔雀石绿和隐色结晶紫的参考保留时间分别为 2.27min、2.30min、2.88min、5.21min、 5.31min、5.61min。 唤 匪 惨 诧 冯 荫 耘 裔 辈 四 湖 寸 闭 麻 急 墩 揽 哑 茸 巧 曹 芬 棕 盐 暮 困 道 富 肥 老 布 蘑 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、氘代孔雀石绿和氘代隐色孔雀石 绿标准的离子流图 杉 磷 潘 乘 歉 桔 凶 紊 听 亥 惟 括 粗 副 订 捐 当 逾
46、豆 咋 氟 迈 柏 沦 她 熄 碧 乖 用 曼 辊 恍 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 液相色谱-串联质谱确证 v按照液相色谱-串联质谱条件测定样品和 标准工作溶液，分别计算样品和标准工 作溶液中非定量离子对与定量离子对色 谱峰面积的比值，仅当两者数值的相对 偏差小于25%时方可确定两者为同一物 质。 菊 遁 密 拦 蓑 曼 后 残 郎 娘 巢 又 先 枪 醋 竞 墅 氓 夯 舆 袍 钟 傻 近 洗 灶 诸 妆 守 咬 悲 氮 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 高效液相色谱法 原理 v试样中的残留物用乙腈-乙酸盐缓冲混合液 提取，乙腈再次提取后，液
47、液分配到二氯 甲烷层并浓缩，经酸性氧化铝柱净化后， 高效液相色谱-PbO2柱后衍生测定，外标 法定量。 貌 技 俊 弓 棚 凰 孤 灾 耻 明 试 硷 旨 酷 理 膳 民 碧 豫 崎 族 含 旁 志 始 啄 实 龙 彝 姜 稍 替 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 样品制备 1.提取 v称取5.00g样品于50mL离心管内，加入1.5mL20%的 盐酸羟胺溶液、2.5mL1.0mol/L的对-甲苯磺酸溶液、 5.0mL乙酸盐缓冲溶液，用匀浆机以10000r/min的速 度均质30s，加入10mL乙腈剧烈震摇30s。加入5g酸 性氧化铝，再次震荡30s。3000r/min离
48、心10min。 把上清液转移至装有10mL水和2mL二甘醇的100mL 离心管中。然后在50mL离心管中加入10mL乙腈，重 复上述操作，合并乙腈层。 孵 帜 继 胜 层 挣 淮 蝗 涧 碍 逊 毯 扩 壬 掏 等 灿 攒 亲 壮 生 禁 挥 兽 扶 握 咆 扎 丰 址 曳 甲 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 2.净化 v在离心管中加入15mL二氯甲烷,振荡10s，3000 r/min离心10min，将二氯甲烷层转移至100mL的梨形 瓶中，再用5mL乙腈、10mL二氯甲烷重复上述操作一 次，合并二氯甲烷层于100mL梨形瓶中。45旋转蒸发 至约1mL，用2.5mL乙腈
49、溶解残渣。 v将酸性氧化铝柱安装在固相萃取装置上，将梨形瓶中的 溶液转移到柱上，再用乙腈洗涤瓶两次，每次2.5mL, 把洗涤液依次通过柱，控制流速不超过0.6mL/min，收 集全部流出液，45旋转蒸发至近干，残液准确用0.5 mL乙腈溶解，过0.45m滤膜，滤液供液相色谱测定。 蒲 焰 贿 宴 稠 捏 予 尊 历 喉 俗 油 甥 脉 社 脚 设 胯 锁 狙 常 缅 常 踩 帅 婿 滋 育 擅 淳 给 纯 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 液相色谱条件 a)色谱柱：C18柱，250mm4.6mm（i.d.）， 粒度5m，在C18色谱柱和检测器之间连接 25%PbO2氧化柱; b)流动相：乙腈和乙酸铵缓冲溶液； c)流速：1.0mL/min; d)柱温：室温; e)检测波长：618nm(孔雀石绿);588nm(结晶紫 ); f)进样量：50L。 芦 宫 痉 废 擎 瓦 疮 口 豫 钢 丈 喇 忧 道 笑 籍 辕 狐 嚣 彼 铱 礁 蔚 油 窒 蜡 淘 郡 霜 果 瘩 室 食 品 添 加 剂 分 析 食 品 添 加 剂 分 析 液相色谱测定 v根据样液中被测孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结 晶紫或隐色结晶紫含量情