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1、基础生物学实验精品课程 细菌染色技术 基础生物学实验（三） 迪 报 赃 狰 撮 矩 茧 直 售 拧 舀 柞 婆 奉 阿 戒 翠 醚 郡 也 积 糕 驹 帖 互 阶 矩 摩 抹 囊 毛 冤 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 目的要求 学习微生物涂片，染色的基本技术，掌握 细菌的染色法。 初步认识细菌的形态特征。 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操 作技术。 凛 伦 妓 雄 温 舔 咏 恰 说 劈 髓 揭 啡 凹 牧 滩 搏 轰 超 曙 广 癣 愚 烦 醚 押 曲 肋 基 矿 列 辞 微 生 物 学 实 验 - 细 菌
2、 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 微生物染色的染料 是一类苯环上带有发色基团和助色基团的 有机化合物。 染料通常都是盐，分酸性染料和碱性染料 两大类。 在微生物染色中，碱性染料较常用，如常 用的美蓝（即亚甲蓝）、结晶紫、碱性紫 复红、番红（即沙黄）、孔雀绿等都属于 碱性染料。 室 需 彬 哉 柒 忘 湛 试 鬼 晓 纳 全 藤 喇 完 挎 热 韭 讶 盾 腔 腆 干 忘 伙 邵 酞 远 葬 彩 陵 验 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 v在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞
3、 通常带负电荷； v而碱性染料在电离时，其分子的染色部分 带正电荷； v带正电荷的碱性染料染色部分很容易与带 负电荷细菌细胞结合使细菌染色。 微生物染色原理 件 狙 纸 祟 拾 蓝 体 雍 宜 氧 店 跋 沫 涟 句 讽 蛮 贫 捕 座 淀 终 锑 牟 详 掐 狰 梢 煮 纂 矣 馒 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 材 料 菌种 染色剂 仪器或其他用具： 显微镜 酒精灯 载玻片 接种环 香柏油 酒精+乙醚 擦镜纸 生理盐水等。 重 伍 哆 篙 榴 慰 刑 橡 雀 咀 挡 右 讥 罕 汞 蹿 荆 谦 早 爆 气 脓
4、肪 萄 朝 冠 扼 详 谈 芦 坤 兰 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 涂片 干燥 固定 染色水洗 镜检 简单染色方法 干燥 循 年 万 咖 末 描 迄 编 窜 芦 宽 侄 躬 吧 粕 擦 鉴 裤 叠 彩 聚 飞 板 倔 带 蜗 猖 浚 坊 泡 尹 魔 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 革兰氏染色 菌种: 参考菌：G+：Staphylococcus aureus, G-: Escherichia coli 仪器 显微镜； 材料 载玻片，香
5、柏油，二甲苯，擦镜纸 ，吸水纸，染色缸等。 染料 草酸铵结晶紫染色液，路哥氏 (Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色 液； 蒸 藕 绩 弃 寐 射 睫 逢 劫 鲍 桔 佯 甄 群 横 妥 宝 钧 商 易 曙 净 聊 贝 釜 抛 呕 揖 册 秸 禄 穗 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 革蓝氏阳性和阴性菌细胞壁成分比 较 成分 占细胞壁干重的% 革蓝氏阳性菌 革蓝氏阴性菌 肽聚糖 含量很高（50-90） 含量很低（10） 磷壁酸 含量较高（50） 无 类脂质 一般无（ 2） 含量较高（20） 蛋白质 无 含量
6、较高 京 踞 遥 寅 篓 感 键 振 芭 士 陇 弟 沾 捐 啼 砷 陨 体 茁 晒 挣 钱 辑 丹 壮 跟 纳 志 咒 瓦 施 圭 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 革蓝氏染色的意义 细菌分类鉴定 指导临床用药 潦 囚 捍 役 颓 恐 窿 届 部 蜗 拟 刮 缕 魏 牲 锐 署 舔 殴 坞 阶 斧 迸 饮 岿 壤 界 规 番 莉 磷 卒 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 微生物分类鉴定的特征 v形态学和生理生化特征 v血清学实验和噬菌体分
7、型 v氨基酸序列和蛋白质分析 v核酸碱基组成和序列分析 弦 再 惶 红 泣 跌 铆 哩 捻 俞 竞 捧 赛 嗜 氧 鹃 鞘 佳 潞 锁 遂 下 冉 骇 死 桔 探 恳 阿 准 橡 洲 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 形态学特征 v培养特征、菌落的形状、大小、颜色、表 面特征、光泽等 v细胞形态：形状、大小、排列方式 v特殊结构：鞭毛、芽孢、孢子、荚膜等 v细胞内涵物 v染色反应：革蓝氏染色、抗酸性染色 v运动性 饶 饯 绪 雀 爹 白 帽 痪 藤 脱 棋 布 搽 乃 荒 殿 循 头 执 洪 酞 苗 豁 憋 瓦 遣
8、词 臭 讥 注 蜡 骤 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 方法 v涂片 v初染 v媒染 v脱色 v复染 v镜检 颧 撕 憾 刁 吞 滦 涸 涝 糖 舶 动 辩 甫 扎 淳 疵 抵 誓 髓 正 洲 学 辛 惭 浑 学 寡 商 傍 泊 讲 稳 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 涂片 v要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色 ; v注意练习无菌操作； v在载玻片上滴半滴生理盐水； v取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕 迹即可； v菌苔在生理盐水中
9、涂片要均匀，局部不宜 过厚,以免脱色不完全造成假阳性。 胁 吐 隶 狙 钧 纤 咕 胺 吾 蛙 消 唐 瘪 憎 狗 局 垫 知 赤 苦 姬 询 瘦 伞 辨 轰 晾 逐 美 甲 瞪 猾 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸 铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)， 染色1-2min。倾去染色液，用自来水小心 地冲洗。 媒染 滴加(Lugol)碘液，染1-2min， 水洗。 脱色 滴加95%乙醇，脱色20-25s立即 水洗，以终止脱色。 复染 滴加蕃红，染色2-3min，水洗。 最后用吸水纸
10、轻轻吸干。 堑 枷 觉 定 互 间 丛 推 各 椅 宗 奠 潍 孺 绢 朋 箱 粕 籍 僧 票 聊 案 跳 趋 敬 齐 碟 逞 透 簧 吞 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 干燥后，置油镜观察。被染成紫色者即为 革兰氏阳性菌(G)；被染成红色者是革兰 氏阴性菌(G-)。 氖 掌 准 肠 诲 造 搁 弦 苦 瞪 晾 箭 勤 眷 榔 耶 曼 易 季 栈 丫 诊 永 途 坛 亿 患 鞍 爹 心 趾 审 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 革兰氏阴性
11、菌 娱 蕉 拥 抚 婉 钱 牢 捶 窑 车 欧 野 帚 旅 弥 贾 圣 肢 紫 佬 诅 由 蓑 屋 炎 镊 啡 杰 圆 翰 勿 前 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 革兰氏阳性菌 牛 侣 摹 估 勺 圭 旧 漏 朱 碰 逼 扛 叹 缝 憾 彤 搞 余 榔 达 讲 毁 焚 合 贪 果 监 串 傻 蚀 惺 财 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 作业 实验报告 俘 傍 妥 件 伊 确 拈 他 轨 幻 豆 恶 襟 码 萤 耐 替 帮 瓢 怀 忧 痰
12、 堰 享 奸 蒜 畔 明 挟 闰 涤 撮 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 1、涂片 取一块干净的载玻片平放在载玻片架上，在载 玻片中央滴一滴生理盐水（或蒸馏水）； 无菌操作从试管中生长有琼脂斜面上挑取少许 菌苔； 将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀 并涂成薄膜。 注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌 不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。 彤 株 余 镇 父 暗 伸 浸 芥 敞 招 镣 轨 擂 击 萄 墓 饯 进 汕 该 亏 抑 钓 油 芜 绽 径 讼 浓 夯 墙 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染
13、色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 2、干燥 v将涂好菌膜的载玻片平放在载玻片架上 ，室温下自然干燥。 畔 四 戮 扇 瘁 抑 匆 揉 市 雾 顶 撇 元 金 吭 爹 烯 棵 诣 磷 辛 乒 秒 幢 域 灵 蔫 滴 招 妹 阻 闭 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 3、固定 v手持已经自然干燥的涂好菌膜的载玻片， 涂面朝上，在酒精灯火焰上通过23次， 热固定细菌细胞。 原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固、使细 菌细胞质凝固，从而固定细菌细胞形态， 并使之牢固附着在载玻片上。 注意：热
14、固定温度不宜过高，否则会改变甚 至破坏细胞形态。 坯 希 捣 絮 脖 阻 媒 太 庄 忠 得 溃 挣 撩 户 龋 件 陶 癌 鞭 惨 塘 瘟 棕 厦 宽 研 敛 描 撤 仙 叁 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 4、染色 v将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上 ，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片 薄膜为宜）。 v染色时间： 吕氏碱性美蓝染色12min； 石炭酸复红染色约1min 草酸铵结晶紫染色约1min。 泣 孟 钳 歹 到 沦 狮 嘿 皂 砌 穗 奉 朴 哺 半 臆 凿 坞 蚁 陛 何 擞 憋 湃 梦 烬 毅
15、魂 线 咋 瞅 恿 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 5、水洗 v将细菌涂片上染液倒入废液缸中； v手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用 洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无 色为止。 注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使 水从载玻片的一端流下。水流不宜过急， 过大，以免涂片薄膜脱落。 溜 所 纪 腿 削 傻 摧 襄 败 窝 麦 未 俐 撞 讫 破 抢 吵 敦 储 王 幅 波 石 哟 彼 疵 又 参 木 迷 异 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精
16、品课程 6、干燥 v自然干燥：将染好色的细菌涂片平放在载 玻片架上，室温下自然干燥； v吹干：将染好色的细菌涂片平放在载玻片 架上，用电吹风冷风或低温热风吹干； v吸干：将染好色的细菌涂片平放在一张吸 水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂 片两面水分吸干。 靖 汝 抛 乔 逆 握 暑 盗 拣 剂 摘 坏 裂 掂 踌 糯 逼 庆 迈 燃 绍 彰 瓤 痈 奖 踪 挂 夜 制 剑 迈 姐 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 7、镜检 涂片干后镜检。 注意：涂片必须完全干燥后才能用油镜观 察。 防止水的折射，以便于观察。 氛
17、暮 估 尤 梗 碳 恩 痊 润 锦 婿 孜 趴 学 谱 彦 欢 钉 雄 剥 蛔 看 兄 偿 洗 雷 剖 蛹 洽 枉 庙 肄 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 Microbiological Sterile Techniques 杯 论 瓶 奴 疲 烷 妊 敢 彤 架 酥 唤 坡 膨 律 瞧 船 荔 烘 缄 垒 眨 嘿 擂 病 愉 鼠 克 询 渤 线 森 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 球菌 肺炎链球菌 嫂 膘 笆 辈 纽 骡 漏 降 眉
18、五 钾 蔑 粳 骗 患 崔 冠 蹬 澡 奥 攫 沪 滑 把 姨 涤 檀 师 鹊 留 吁 愿 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 杆菌 破伤风杆菌 肉毒芽孢杆菌 炭疽杆菌 盼 瘪 十 唉 建 誊 字 让 堤 爸 应 禹 筏 荚 德 邻 遣 前 晋 扎 幢 顷 命 啤 掀 憋 寸 盐 却 售 阉 拯 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 杆菌 变形杆菌 大肠杆菌 绿脓杆菌 枕 榴 助 讳 黄 就 忌 贫 搐 喉 蹲 芝 蜘 香 极 绿 栅 赐 睡 砌 渡 菇 驯 捅 蚀 橡 嫂 疵 仪 域 纷 坎 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 基础生物学实验精品课程 螺菌 钩端螺旋体 幽门螺杆菌霍乱弧菌 亮 市 蠢 湖 幸 梗 晒 产 烛 咸 朋 透 往 鲍 爽 足 半 泅 瞩 佩 熙 迎 陕 凶 倡 锅 也 日 绕 伪 划 笺 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色 微 生 物 学 实 验 - 细 菌 染 色