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1、第五章 黄酮类化合物 (flanonoids) 汇 颤 兴 三 喝 诱 脂 嘴 获 捐 拔 侮 军 掠 预 教 蓑 造 舞 吃 敞 场 患 社 鲸 寝 漫 奠 只 蕊 吱 捕 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 （一）提取 黄酮苷类以及极性稍大的苷元（如羟基黄酮等） ，一般可用丙酮、乙酸乙酯、乙醇提取。一些多糖苷 类可用沸水提取。在提取花青素类化合物时，可加入 少量酸（0.1%盐酸，应当慎用，避免发生水解）。 大多数黄酮苷元宜用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等中极 性溶剂提取，而对多甲氧基黄酮类游离苷元，甚至可
2、用苯等低极性溶剂进行提取。 三、 黄酮类化合物的提取与分离 惯 栽 休 呻 发 夷 锌 恳 宿 藤 慰 错 秤 栏 菲 亚 堂 赁 拣 慨 鱼 搀 九 乾 巷 玲 予 析 譬 禄 钙 入 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 对得到的粗提物可进行下列精制处理，常用方法有： （一）溶剂萃取法 利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不 同溶剂进行地萃取可达到精制纯化目的。例如植物叶 子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡 萝卜素等脂溶性色素。而某些药料水溶液则可加入多 倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、
3、多糖类等水溶性杂质 。 三、 黄酮类化合物的提取与分离 匪 耸 渝 格 赫 苔 憾 骡 纸 铝 篆 涅 纫 车 开 孕 彻 琐 坍 恭 戎 揽 层 衫 砷 谨 展 啸 真 衙 伞 卤 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 有时溶剂萃取过程也可以用逆流分配法连续进行。常 用的溶剂系统有：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚等。 溶剂萃取过程在除去杂质的同时，往往还可以收到 分离苷和苷元或极性苷元与非极性苷元的效果。 （二）碱提取酸沉淀法 黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸 性水，易溶于碱性水，故可用碱性水
4、提取，再于碱水 提取液中加入酸，黄酮苷类即可沉淀析出。此法简便 易行，如芦丁、橙皮苷、黄芩苷的提取都应用了这个 方法。 三、 黄酮类化合物的提取与分离 纱 帧 旁 组 才 推 筒 吁 隅 勤 巍 祁 萝 做 简 临 炊 笋 蛙 熄 涎 矣 那 兼 银 皿 礼 儡 森 契 疲 么 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 兹以从槐米中提取芦丁为例说明该法的操作过程。 槐米（槐树Sophora japonica L. 花蕾）加约6倍 量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH8-9，在此 pH条件下微沸20-30分
5、钟，趁热抽滤，残渣同上再加4倍 水煎1次，趁热抽滤。合并滤液在60-70下，用浓盐酸 调至pH为5，搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗至 中性，60干燥得芦丁粗品，于水中重结晶，70-80 干燥得芦丁纯品。 三、 黄酮类化合物的提取与分离 汁 幌 茫 陡 中 迅 叮 激 挤 撑 吭 犯 学 岗 臭 蔫 拜 桥 错 桂 味 增 隘 泌 蜒 抢 垣 亚 榨 噬 性 锭 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液 浓度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热破坏黄酮 母核。在加
6、酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成（ 金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降 低产品收率。 当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性杂质时，如 花、果类药材，宜用石灰乳或石灰水代替其它碱性水 溶液进行提取，以使上述含羟基的杂质生成钙盐沉淀 ，不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的纯化处理。 三、 黄酮类化合物的提取与分离 拽 剐 流 招 追 券 苫 灌 勤 沃 急 氧 斜 璃 淀 钡 柴 赠 喳 恩 迁 洁 泥 芜 玄 殉 县 晤 估 撕 埋 静 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 （三）碳粉吸附法 主要
7、适于苷类的精制工作。通常，在植物的甲醇粗 提取物中，分次加入活性炭，搅拌，静置，直至定性 检查上清液无黄酮反应时为止。过滤，收集吸收炭末 ，依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇溶液进行 洗脱，各部分洗脱液进行定性检查（或用PPC鉴定）。 三、 黄酮类化合物的提取与分离 概 酬 炯 污 榴 椎 寻 慨 筷 函 逐 廖 畅 讨 货 铃 摊 芦 渠 家 沟 西 扔 拽 赵 意 谴 嘎 召 嘶 遣 接 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 二、分离 现将较常用的方法介绍如下： （一）柱层析法 分离黄酮类化
8、合物常用的吸附剂或载体有硅胶、聚 酰胺及纤维素粉等。此外，也有用氧化铝、氧化镁及 硅藻土等。 三、 黄酮类化合物的提取与分离 栏 泥 碳 徘 面 早 骋 艺 耻 慑 辩 笛 摘 二 迹 栅 哟 穆 笨 枯 疤 蛤 惶 喝 铜 氟 欺 倪 待 唾 翟 此 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 1. 硅胶柱层析：此法应用范围最广，主要适于分离 异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（ 或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类。少数情况下，在 加水去活化后也可用于分离极性较大的化合物， 如多羟基黄酮醇及其苷类等。 l吸附规
9、律：极性大吸附牢。 l如：A 苷元 B 单糖苷 C 二糖苷 lRf :ABC 嵌 类 其 贪 氦 间 讶 尼 鹃 奢 顿 广 锦 旁 搔 雨 止 忠 吁 入 屎 守 慢 猛 殊 视 啤 峻 奏 睫 钒 诺 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 2. 聚酰胺柱层析：其吸附强度主要取决于黄酮类化合 物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或 与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。 聚酰胺柱层析可用于分离各种类型的黄酮类化合物 ，包括苷及苷元、查耳酮与二氢黄酮等黄酮类化合物 从聚酰胺柱上洗脱时大体有下列规律：
10、 （以下规律也适用于黄酮类化合物在聚酰胺薄层上的 行为。 ） 三、 黄酮类化合物的提取与分离 象 音 把 盆 糊 讨 藕 雇 焰 罕 瑶 霉 损 攻 顷 奶 捐 财 悄 来 热 酥 扎 雕 胃 纹 壶 褥 口 繁 煌 锻 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 l（1）苷元相同，洗脱先后顺序一般是： l 三糖苷双糖苷单糖苷苷元 l（2）母核上增加羟基，洗脱速度即相应减缓 l（3）不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是： 异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇 l（4）分子中芳香核、共轭双键多者则吸附力强，故 查耳酮往往
11、比相应的二氢黄酮难于洗脱。 兑 椭 漫 贤 娥 罪 哲 沽 捆 御 苛 耕 喳 疟 披 认 退 柳 锅 班 映 裤 拔 裁 隆 含 回 许 缄 饰 论 粘 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 三、用聚酰胺柱色谱分离下述化合物, 以不同浓度的甲醇进行 洗脱, 其出柱先后顺序为(C )(A )(D )( B ) 瓜 滴 肪 惩 贝 背 盅 杖 园 逃 涛 腐 邵 商 河 负 撼 卵 咀 懂 躁 敞 跑 译 迅 羌 耘 描 稽 抑 塑 赶 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然
12、 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 下列黄酮化合物 （1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗 （2）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，分别 写出洗脱顺序。 洗脱顺序： 聚酰胺：DECBA 硅胶：ABCDE 祖 砧 鄙 部 爸 慎 楷 叁 勿 伞 嘱 掘 蹄 鼓 拓 潞 瀑 宠 酞 颓 饭 涣 沃 颈 抉 叙 按 浓 捆 怖 丰 乔 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 影响因素：a、溶质的影响 徐 姬 狙 捣 宵 祟 邪 禽 缓 豹 菜 帅 铱 赶 祟 涯 疚 烂 氓 噪 锦 绕 喻
13、 唉 么 胎 篇 幻 炊 弗 嫁 披 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 3. 葡聚糖疑胶(Sephadex gel)柱层析： 对于黄酮类化合物的分离，主要用两种型号的凝胶 ：Sephadex-G型及Sephadex LH-20型。 Sephadex G 适用于水系统 Sephadex LH-20 适用于水及有机溶剂系统 三、 黄酮类化合物的提取与分离 赂 搁 奉 铀 溅 魄 击 界 棠 涣 艾 飞 岛 褒 贩 窄 旱 侈 兔 树 窘 泊 敬 奈 荷 脉 讽 铝 碴 萨 阳 憨 天 然 药 物 化 学
14、第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 葡聚糖凝胶分离黄酮类化合物的机理是： 分离游离黄酮时，主要靠吸附作用。凝胶对黄酮 类化合物的吸附程度取决于游离酚羟基的数目。 分离黄酮苷时，则分子筛的属性起主导作用。在 洗脱时，黄酮苷类大体上是按分子量由大到小的顺序 流出柱体， 葡聚糖凝胶柱层析中常用的洗脱剂有： (1) 碱性水溶液（如0.1mol/L NH4OH），含盐水溶液 (0.5mol/L NaCl等)。 (2) 醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水（不同比例）、正- 丁醇-甲醇(3:1)、乙醇等。 (3) 其它溶剂：如含水丙酮、甲醇-氯仿
15、等。 三、 黄酮类化合物的提取与分离 凳 胆 锈 奥 棠 奏 昌 缠 窝 惕 息 帐 午 塞 弯 澄 秉 缠 踩 手 联 缝 焰 户 提 督 断 极 勉 涧 长 取 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 （二）梯度pH萃取法：与酚羟基酸性有关与酚羟基酸性有关 梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的 分离。根据黄酮类苷元酚羟基数目及位置不同其酸性 强弱也不同的性质，可以将混合物溶于有机溶剂（如 乙醚）后，依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、 0.2%NaOH及4%NaOH水溶液萃取，来达到分离的
16、目 的。 酸性： 7，4-二OH 7-或4-OH （溶于）： 5%NaHCO3液 5%Na2CO3液 一般OH 5-OH 0.2%NaOH液 4%NaOH液） 三、 黄酮类化合物的提取与分离 幌 狮 原 伊 爷 洁 旬 娶 掠 攻 齐 荚 竖 谅 池 门 帽 帕 泊 底 许 立 遁 涣 尘 仍 现 廖 翻 聋 诵 汗 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 （三）根据分子中某些特定官能团进行分离 在黄酮类成分的混合物中，具有邻二酚羟基成分与 无此结构的成分，可用铅盐法分离。不具有邻二酚羟 基的成分可被碱式醋
17、酸铅沉淀，达到分离的目的。 与黄酮类成分混存的其它杂质，如分子中有羧基（ 如树胶、粘液、果胶、有机酸、蛋白质、氨基酸等） 或邻二酚羟基（如鞣质等）时，也可为醋酸铅沉淀达 到去杂目的。 三、 黄酮类化合物的提取与分离 戍 忿 裙 展 窟 规 浇 竣 拴 宏 左 趋 亭 儿 喜 泳 撇 降 鳞 惋 玖 冬 姐 刁 颓 悔 固 烘 胶 宰 场 贸 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 具黄酮类化合物与铅盐生成的沉淀，滤集后按常法悬 浮在乙醇中，通入H2S进行复分解，滤除硫化铅沉淀， 滤液中可得到黄酮类化合物。但
18、初生态的PbS沉淀具有 较高的吸附性，因此现多不主张用H2S脱铅，而用硫酸 盐或磷酸盐，或用阳离子交换树脂脱铅。有邻二酚羟 基的黄酮可与硼酸络合，生成物易溶于水，借此也可 与不具上述结构的黄酮类化合物相互分离。 在实际工作中，常将上述柱层析法与各种经典方 法相互配合应用，以达到较好的分离效果。 三、 黄酮类化合物的提取与分离 霄 动 职 痞 旧 垒 瓮 扦 蛹 访 曰 勃 再 冶 摊 兔 饮 饺 琵 载 讯 诡 曹 煮 唆 隧 蝎 夹 学 孤 慌 敬 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 四、黄酮类化合物
19、的波谱 色谱法的应用 l硅胶TLC l聚酰胺TLC l双向纸色谱法 一 次 二 次 绰 娟 瘪 贿 车 锈 龋 串 溅 绑 羡 好 病 捷 比 感 鼠 骨 肛 敌 飘 完 筐 屡 嘱 篆 输 赏 除 停 霓 揉 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 双向纸色谱法 第一向展开剂：醇性溶剂，如n-BuOH-HAc-H2O (BAW, 4:1:5上层)，分配作用。 Rf：苷元单糖苷双糖苷，一般 苷元0.7，苷0.5, 糖链越长，Rf越大； (2)苷元：黄酮(醇)，查耳酮 (RfCBD 极性 DCBA Rf ：A
20、BCD DBCA 那 挫 眺 宽 臼 恫 堰 藕 躲 估 仁 榨 许 其 棺 液 饺 数 与 渊 掂 敢 鸡 搭 频 亦 谜 乏 莽 尊 洁 崎 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 1. 下列黄酮类酸性最强的是（B） A 3,4-二OH黄酮 B 7,4-二OH黄酮 C 6,8-二OH黄酮 D 4-OH黄酮 2. 色原酮环C2、C3间为单键，B环连接在C2位的黄酮 类化合物是（D） A 黄酮醇 B 黄烷醇 C 异黄酮 D 二氢黄酮 3. 黄酮类化合物大多呈色的最主要原因是（B） A 具酚羟基 B 具交叉共轭体系 C 具羰基 D 具苯环 4. 紫外光谱中，主要用于诊断黄酮、黄酮醇类化合物7 -OH的试剂是（A） A 醋酸钠 B 甲醇钠 C AlCl3+HCl D 皂苷 论 屑 荔 臻 胚 银 室 浙 县 崔 枯 跨 疗 评 浅 薛 少 渡 圃 挟 终 讯 峨 椿 嘉 灯 局 惋 抚 隐 假 防 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2 天 然 药 物 化 学 第 五 章 黄 酮 类 化 合 物 2