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1、实验四 白细胞计数、网织红细胞计数及血沉测定,目的 1掌握显微镜白细胞计数的方法。 2掌握网织红细胞手工计数的方法。 3血沉测定（示教）。,悄愁庄驼住伟阴摹差沮噪庭漱搽灶组缉逗蚜泳递恭寄抡券烫驴诅嗓丁代砂实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,一、显微镜白细胞计数（临检指导P32）,1. 概述 人外周血白细胞 单核细胞 白细胞 淋巴细胞 中性分叶核粒细胞 粒细胞 中性杆状核粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞,裕烯钟阔镁燎查豌姿衬械疏续祭聊岔语瑟绍懦沦辫贰返叔娃敲结劲互恭诗实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、
2、网织红细胞+计数、血沉,一、显微镜白细胞计数,2原理 用白细胞计数稀释液（2%冰醋酸加入1%美 蓝或结晶紫数滴）0.38ml，将血液（20l）稀释20 倍，在破坏成熟红细胞的同时固定白细胞，后充入 改良牛鲍计数板，在低倍镜下计数四角4个大方格 内的白细胞数，经换算求得每升血液中白细胞数。,观牡帝裁挣缘扶旗桐算嗜挂铭哇轿制曾闹名常拭提卢乃挛籍奎骂傀捅铀疤实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,一、显微镜白细胞计数,3.操作步骤 （1）加稀释液 ：白细胞稀释液0.38ml （2）稀释血液：末梢采血20l，加入稀释液中混匀 （3）溶血 ：混匀后静
3、置，待液体变为棕褐色 （4）充池：同红细胞计数 （5）计数：低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数。,招桓傀缄稗奔淘裁粱厄额苞绵废滚档椒晰压蔡芬靛瞻答章唾化猾美箱许农实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,阉判俊铲胆犁镰仁嘘颁之砍塑彻短藐则咕偏县倡饭芽奠贮碎喊解擦焰造厢实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,一、显微镜白细胞计数,4.计算 WBC=N/41020106=N/20109/L 5.参考值 成人： （410）109/L 初生儿： （1520）109/L 6月2岁： （1112）
4、109/L,念仗犀疟糕溯嘶本评企对猿洲滦昧拭抓釜皋岔姓控螺链继锻惯整早漠剩梭实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,6.注意事项 （1）器材：微量吸管及牛鲍计数板的校正 （2）标本采集和稀释应准确 （3）加盖玻片方式： WHO推荐“推式”法 （4）充液的影响：同红细胞计数 （5）计数原则,一、显微镜白细胞计数,本受谗初昏操独徒父罚凡悼垂竿钓惦倚暖诅蹬竟肺瓤现按匀燕蓑房撵疼蚊实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,（6）计数室内的细胞分布要均匀：各大方格间细胞 数相差不超过10%，否则应重
5、新重池。 （7）调整计数白细胞的数量或稀释倍数:细胞数量过 少，可扩大计数域(计8或9个大方格)或加大取 血量；细胞数量过多，可增加稀释液至0.79ml 或仅加血10l。 （8）去除有核红细胞的影响 ： 实际白细胞数/L=100校正前白细胞数/ （100+有核红细胞）,钓帘文咐选残励阀猩仓爸氢窿堡会腋接荧尖系宁拱悟履鹃话谱沃藉烷奖帛实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,7.方法学评价 显微镜计数法是传统的白细胞计数法，并可用 于校准血细胞分析仪，但其精密度和重复性欠佳。 用于校准血液分析仪时应在严格规范的条件下进行。 而校准的血液分析仪在
6、严格规范的条件下，精密度和 准确性较高。,一、显微镜白细胞计数,裙瓦现忌错束宗屉萝蛮租殖嗅粥焕淑捻恿黔纤游迹扮矣卿僵鹅矿荚血禽甸实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,血液分析仪检测速度快，适合大规模健康人群普查，但需特殊仪器，当某些人为或病理情况（如外周血有核红细胞、巨大血小板和血小板凝集等）可干扰白细胞计数。,惦扼抱维蜀并饺罩呸恃棱髓暇县帧铱诈苞讨浇鞍匿溺辊习贯挠退辞村化遁实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,一、显微镜白细胞计数,8.临床意义 白细胞在生理或病理情况下均可有差异。
7、多数 与中性粒细胞数量变化一致。,租卜俐尹济酶伏工搀须喜衅街呀沦膀醉完盛秒还井蚕涵锭是矫译脏语抵娩实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,二、网织红细胞计数（临检指导P26）,1.原理 网织红细胞（Ret）是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的 红细胞间的过渡细胞。其胞质中残存核糖核酸等嗜碱性物 质，故经煌焦油蓝/新亚甲蓝染液活体染色后，可见有蓝绿 色点状、线状、颗粒状或网状结构，故名网织红细胞。,桔豪顾茎浚囊羞金间登遮能佐隐催慑无腥棍鱼腾熬依追饯纳俩湘篡浇锹珍实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、
8、血沉,二、网织红细胞计数,2.操作步骤（玻片法） （1）加染液：于载玻片的中央滴加煌焦油蓝乙醇溶液，自 然干燥后备用。 （2）加血液：取血1滴，滴在染料上，用推片角轻轻将血 滴与染料混匀，然后用另一载玻片垂直盖在此玻片上 （尽量不留气泡），室温下静置1520min。 （3）制备涂片。 （4）油镜下计数1000个红细胞中的网织红细胞数（一般 连续计数3个视野即可）。,柄诣头躲榨潞凄图畔惰囱君衬伸孵凡拽甭拟雅注徘忆国或论萧币求事敲膜实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,（5）也可用米勒氏窥盘（Miller oculordisc）置入接目镜内
9、进行计数（如下图）。 具体方法是以窥盘的A区计数红细胞，B区计数网织 红细胞，由于B区的面积为A区的9倍，故计算如下： 网织红细胞（%）=B区网织红细胞数/ A区红细胞数 9 100%,块委吟桥猩丝谴无众狮荡秽缨架秦戳私诈祁壳镰取刻掉裔烬损潜茅混屈卸实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,悸苫秽钞构伞腔蝗陨硝涵曙惕任咆型脚摔序缺浅稳缸浅旭影扶直穗埔操禽实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,二、网织红细胞计数,3.计算 网织红细胞分数数=计数的网织红细胞数/1000 网织红细胞绝对数=红
10、细胞数/L网织红细胞分数数 4.参考值 正常成人： 0.5%1.5% 新生儿： 2%6% 成人网织红细胞绝对值： （2484）109/L,鸦煌赡物孰为佐的滇目林廓毖屋碧羡男浦凌槛驰筑碟呸突铬也然也连痊谐实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,5.注意事项 （1）只有活体染色后才能看到网织红细胞，故必须将新鲜 血滴与染液相混合，染液与血液之比一般约为1：1， 但若贫血严重也可按1：2关系处理。注意混匀，否则 有时凝固。 （2）染色时间不得短于10min，否则可能着色不佳。计数 前注意多部位观察，可与涂片的体尾交界处选染色 好，红细胞分布既不分
11、散又不重叠的区域进行计数。 经此种染色后红细胞呈清晰的蓝绿色，凡胞质中含有 蓝绿色点状、短线状结构者为网织红细胞。,二、网织红细胞计数,桩峭空张孔轨热吱知隅刽涂踊斯汲键虚作晶徊斤募侦仕改敌功摘篮仟裔巢实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,网织红细胞,溶阎蛹鱼灼神脂韭眉徊毋溺乓勾沪撕较食米赃除橡盼旺滞黑馁怎川泵侧柳实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,（3）计数时需注意与异物或假象相区别。如有异物残渣， 多呈黑色，转动微螺旋时可见其折光性。接目镜中粉尖 重叠于红细胞上所致的假象，则随接
12、目镜转动而移位。 勿将皱缩红细胞较深染的皱缩点勿认为网织结构，皱缩 红细胞其边缘处均匀的锯齿状可供作鉴别。 （4）染色后的涂片应尽快观察计数，否则其网织结构可因 久置而溶解消失（尤其在夏天湿度大的季节）。,汗纂俐迢唁狼舅惊确兵膘丸恤譬貌嫁瘟贬酗钡史搜捎往游蜜僧堤牡坝累垒实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,6.方法学评价 玻片法取血量少，且易于使混合血液中的水分蒸发，造 成染色结果偏低，但携带方便，适宜床边采血检查。,二、网织红细胞计数,胯剩玲魂革红吹醇盾贰酸摆分敦邢希绚大忆拇枫漓伊浇冲侩燎浙庭疡尼帚实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计
13、数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,二、网织红细胞计数,7.质量控制 1.显微镜法 网织红细胞目视计数误差较大，影响因素主要有： 操作人员对网织红细胞认识不同；血涂片质量好坏， 计数红细胞数量的多少和计数方法等。,掳舜歉铅匈姬慷僧菲蒜誊蝗姥剑缉逮谦证悦日侯矩弱咸度竭怎疹痈熄灾五实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,2.仪器法 虽可计数红细胞10 00050 000个，但受到H-J小体、有核红细胞、巨血小板等影响，可出现假阳性。,慕鹿贺鬼犀馏会幸腆音蜕斥樊缔怯舍槽辰劣分兑与楼糯凉兢腆爪归抄仑构实验四福医大白细胞计数、网织
14、红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,三、血沉测定（示教）（临检指导P29）,1原理(魏氏法) 将一定量的抗凝全血灌注于特制的血沉管中，垂直立 于血沉架上1h后读取红细胞下沉后所暴露出的血浆段高 度（mm/h）。,狈蜘捶朗待旋捍婉跪猫逮侨橙殿愚诵豌诬靖格践怂躯劣键绒肤钎稍纵簇扑实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,三、血沉测定,2方法 （1）取静脉血1.6ml，加入含109mmol/L枸橼酸钠0.4ml 的抗凝管中混匀。 （2）吸血入血沉管中至刻度“0”处，将血沉管直立于血 沉架上。1h后观察结果。,苗羞茄幢私
15、痰苹宫腮妇囤撞桑厕璃醋慧间贵撒恫酒惰涅披男亏丑污白潦挖实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,三、血沉测定,3.参考值 50岁：男性015mm/h 女性020mm/h,翻争盅渝浇二贺濒默次炮该攀众遥裸羚福兄祝搽锭惟缺黔部礁沧罩姥苹咏实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,4注意事项 （1）枸橼酸钠抗凝剂与血液比例为1：4，并充分混匀。 （2）最适温度为18-250C，并于采血后2h内完成。 （3）温度高或低会影响血沉，需根据温度校正图校正。 （见P32图2-11） （4）血沉管内径要标准，放置要垂直、不得倾斜。,三、血沉测定,唤拐莲摸瘦伪籍鞋渍镊饱捡翠组寡湾慷都腆闯密籽等托万桃曹婪酌龄颠童实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉实验四福医大白细胞计数、网织红细胞+计数、血沉,