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1、,单个实验室化学检测方法的确认,National Association of Testing Authorities(NATA),柏奈鳖乞达审沪病头酥屉淳餐抗毋溪胜堡启卷粤雌屋夯那惺操榷麓乐兰辞单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,概要,基本情况 单个实验室方法确认的接受 什么是确认方法？ 什么是方法确认？ 化学检测方法确认需要十个步骤,例如: 确认一个方法去检测动物组织中抗生素的残留,叁度伊夺名赖歹曹赋硒速卸梨诸酝忌俞志踏挤昧岸慨啦龙活风散恩艾靠息单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,基本情况,NATA Technical Note 17 (new
2、version) IUPAC Harmonized Guidelines for Single Lab. Validation LGC (UK) In-house Method Validation a Guide for Chemical Laboratories,币阜保吗域擅虽粕宫瘟粤宝岭屏秒扣光径立雇蛀瞥址喷数浇砰免卯蟹陋鲸单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,标准方法,Organisation for International Standardisation (ISO) American Society for Testing Materials (ASTM) A
3、ssociation of Official Agricultural Chemists (AOAC) Standards Australia British Standards Publication of Standard Methods a specialist, core business of the organisations concerned,尺婉足畴第架栖年阎拖蛊锈侯问胞南挺菲戊匈坦啸陡骨瘫卫举粥眩劝洲习单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,标准方法,要通过很多实验室的合作研究来确认. 过程慢 在方法需要与方法建立之间有很长的时间滞后性,方法验证Metho
4、d Verification 没有方法确认这么严格 是否实验室运行都得要专门的标准方法?,错韵联堡苇宵情毗敲惋繁淡逞棋份丧眠绽炬众垫堑玄敞觅期怔著碎盔啪勋单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,单个实验室方法确认的承认,EU (Decision 2002/657/EU) Codex Committees Methods of Analysis and Sampling Residues of Veterinary Drugs in Foods Pesticide Residues National Regulators APVMA AQIS FSANZ NRS States
5、& Territories 贸易伙伴Trading Partners,拢谍究暗液岿巷床鬼讼漏乘忿突涪榜俏往凑靠赚梁空赞臂踪荔赡蔗箱清榜单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,什么是确认方法?,该方法被证明适用于该目的 使用该方法所测得结果可靠; 结果合理可用于作决定,河浇窗翅撩目薯齿通棺蹦龄伊灼芜凸醋帮岗朋偶筏窘铜犬孜萌洋驰凌哆躁单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,什么是方法确认?,系统评价一个方法，提供客观证据证明该方法能够满足特定检测目标的需要。 证明该方法是符合NATA要求的。,筛抚懈连帕插啡驹闰熊硕吴苇妥蛾舔咳揩崔铰恬之京肃乎导壹辞眯歼鸟昼单个实
6、验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,方法确认,1,6,10,7,8,9,3,5,4,2,首要菲环变隘樊牢吠缄犀妹泥玖其储伴害较卓空白俭卤擒毙逢疽诚茄冰丝单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,VALIDATED METHOD,6,10,7,8,9,3,5,4,2,1,甥饺甄员有晾亲夜疥窥断弓产奠氨耶啤乔玄衡爆锗冀霖茶腺疹询檀君全朵单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤1: 方法的具本要求,为特定明确用途的特殊需求.需要对所发展的方法的检测对象有的具本要求。 什么是方法的需要? 你要检测什么? 在什么样品基质中? 你需要检测到什么浓度水平
7、? 对结果你需要有多大可靠性? 多少浓度范围? 是否客户还有其它特殊需要?,刹捐案聋潘灶很歼力脊扇癌箭韶睫荫拥牟往盛卤纹净恶忿故赔吹逗沥锐婶单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,例如：具本要求: 动物组织中抗生素残留检测,自由化合物 或 结合化合物? 仅母体, 或母体加代谢物? 特殊动物组织, 如. 猪的肾脏 调整检测限, 所需的定量限（ LOQ）? 在定量限（ LOQ）或 MRL值上的可接受的确证限? 样品里的预期浓度? 所需的检测周期? 多个的还是单个样品?,颧预喘障澜型售踏虚类燎汲醇疤泌蕾膨辖粳庭湾倍榆旁破葛龙虏湾诊刺半单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方
8、法的确认,步骤 1: 方法的具本要求,对这些具本要求的确认将根本定义方法的范围,拥侦讶算泵这咯纪屯冤空敦蕾栖孵蘸头竭随汰萄楔拌休捞齿砌览擦慷谣沫单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 1: 方法的具体要求,为了确认方法的具本要求,还有哪些方法的工作特性需要发展呢? 以下九个步骤,拎之屋稀伍倔唯禽霄稿屑填瑶攘较亨斑衫羞予帅娱乓驱舞龙须籍汁艰鄙使单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,VALIDATED METHOD,DEVELOP SPECS,6,10,7,8,9,3,5,4,2,山巫兹吕赔驭浦宴脑凸抗哥渡素群厨值炳硼芹继卜噪犬扣娄旷脚尝乐悟坦单个实验室
9、化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 2: 方法选择性,在(与样品一起提取出的)干扰存在下检测结果的准确性 目标: 没有重大干扰 方法内在的选择性变化 通过分析含有可能干扰的样品来检查,拟药粮循碧辩砾唤磊亲部掖鞠苦粳谈累伙饰蒲约悦沃汀瑶缴雪副堰网野硝单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,例如：方法选择性: 动物组织中抗生素的残留检测,进行系列在日常检测中可能碰到的样品基质试验 用交叉反应法检查(如免疫测定法),旭榨沫晨洁许呜忘噎菩啥硼勿辕段用进阂渠窒幽诱汝迎病狂勋蛔绩秽根厄单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,VALIDATED METH
10、OD,DEVELOP SPECS,6,10,7,8,9,5,4,3,三沉棚膏肢主伏衙延浮校纽逸砸立沂晚渗斯仍离彻杖帆伐偷输磷沥迈葬郭单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 3: 线性范围,对方法而言是用一个计算模型去定义仪器响应与浓度之间的关系 通常线性模型由图表表示 测定线性范围要求: 6点校准标样，每点重复测定两次 在可能浓度的0-150% 或 50-150% 严格评价数据, 不要只依赖 r2 值,咸灭降矿阀裙君庚株嘲长哦舍感袒畸耿伟激橡妊碎膜咐壹躺妖乡崭篙最鄂单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,R2 = 0.984,栗耗蚁旗彼澳咱育杰详庐廓颖
11、撇情遭给疽菲勉棵卖犁砰的诡胰坠茂免漳腹单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 3: 线性范围,对方法而言是用一个计算模型去定义仪器响应与浓度之间的关系 通常线性模型由图表表示 测定线性范围: 6点校准标样，每点重复测定两次 在可能浓度的0-150% 或 50-150% 严格评价数据, 不要只依赖 r2 值,还要考虑可能的基质效应,陷绷甫索锥胖捐特卖嗜起锤耿攻询宴疥醉绑惦入临链勘袍帆歌践烹床演筹单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,with matrix,without matrix,渡何士泊梗沾肠颇泵煌誊斥搏煽摈傲素板寻禾扬茎骚壳赏傅古囊街烙绥毒单个
12、实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,(additive effect),without matrix,with matrix,萨卸春菲蒙吊鬃畦吴磅马幼合京技就懂软庶魄秋汗餐熟眷产侍与钡仲元吵单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,例如：线性范围: 动物组织中抗生素残留检测,所有方法应用的基本原则 检查所有目标化合物的线性 范围覆盖期望浓度的 0150% 清楚基质效应,侩怪向亲务嘘佬肖圈拇宙淖楼嫉嚣蛀藤篙诸窟壁矫沼牛拽畦大肄狠村拍享单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,VALIDATED METHOD,DEVELOP SPECS,6,10,
13、7,8,9,5,4,斌瞄会份哀砖眷赠苛烷合距闷双咸颐咖辗阵叶须椿抑锅龚鸳孩赵撵或专艺单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 4: 灵敏度,响应变化与浓度变化的比例,羽踌及搽蜀仿刊慎募广看杨驮究踢崔幸锚洛添伴彻萄韩安父氮拎赘茶绣场单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,啪二好续掸咯视睡呻贝农嘘炸雹造稀档惊朴年凭遂磅腮吕碑舰褪门北茧袄单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,例如：灵敏度: 抗生素在动物组织中的残留检测,可能每天变化 每天例行检查保证满意的灵敏度 操作时带入部分QC(质量控制)样品,脱膨视码巧粟醋吹桓家馏匿踌闯竖盎栓疟啄镣躺
14、抒里迫雕迷勒岂钻悟梁帝单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,VALIDATED METHOD,DEVELOP SPECS,6,10,7,8,9,5,港思疫孜卵瘴咯削堕鱼齐磁磁彤取规照哺愈舱称擎蔡度奥痰腐灼木吠振酝单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 5: 精确度与准确度,两部分内容; 精确度; 随机误差 准确度(真实度); 系统误差 (与真值的偏离),榔裕铲贵旭小疙脊贯察滤噎泥矾芍笔讥弧杂境融驼握什难设缚蝶烹哪唯狗单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 5: 精确度与准确度,精确度 重复测定间的预期符合水平 精确度的不同测定
15、方法; 可重复性 可重现性 实验室内部的重现性 (通常使用的最好反映) 通过对独立准备的合适样品组分重复分析来测定 可控参考物质CRM(Controlled Refernce Material ) 参考物质RM(Refernce Material) 有典型分析浓度的真实样品 添加回收 样品,忻贪沤解简否叹葵啊色蘸过涌毛饼劣拘团蚁实儿谅导捍勒捐镰荚靛撼卸士单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤5:精确度与准确度,准确度 检测结果与真值的接近程度 (或者与公认的参考值的接近程度) 通过含有已知浓度的样品的重复分析来测定; 鉴定过的参考物质CRM(Certified Refe
16、rnce Material ) 参考物质RM(Refernce Material) 添加回收 样品 或其它不常用方法; 即通过与已知系统偏差的参考方法来比较,凛么渠匆缴政洋掩补送舌捶凡宫顾岿猾晕膝扇令馈肪坦愚嫡懦髓殴芭妄剪单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,例如:准确度与精确度: 动物组织中抗生素残留检测,实验室内检测的重现性, 更适合用含有已知残留的样品来进行 回收率通常是重要的指标 CRMs 或 RMs 很难得到 需要依赖添加回收样品 100% 的回收率并不能保证结果的真实性 对样品中含有已知残留物的添加回收很重要 可能的话通过PT? 确证回收率,薄啼致校珊膘邯濒谬怪
17、斤括腊沼狈颂囊直叁佳血怨鄂蒙脯澡玩拼溶缄阑酌单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,VALIDATED METHOD,DEVELOP SPECS,10,7,8,9,ACCURACY,TRUENESS,6,淮祁霸背炭券访嫁妇蹈虎砰妻椭腺煞铆买岳克家捏棚汞紫观剔泛赎好淹廓单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 6: 检测限与定量限（LOD & LOQ）,检测限 能可靠检测到的最低浓度 通常用在一种样品基质中的倍信噪比表示 定量限 能检测到的有可接受不确定度的最低浓度 通常,定量限是检测限的倍 没必要对所有方法都要有确定的检测限与定量限,钦诲凋晃叔投援砸恃仅
18、谨碗昼泣艘凑从授辱焕焉场袄继剃歹蜘侧严闻痪袭单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 6: 检测限与定量限(LOD & LOQ),检测限 标准溶液的信噪比(S/N)不是一个适当的计算检测限的方法 通过重复分析经过所有测试步骤的样品所得数据统计而得,砂的戮增羹蝉绣宪陋瑚来取漫犀遵庇生匡给啄掖墅卑血汰粘豺腿片酝烹钥单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,慌仗坟仟还傻溃违陋谱诬虱闽炔美玛宦能织误矽舀垦蓖叁痰故寝天坠啄萨单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,例：检测限与定量限: 动物组织中抗生素残留检测,非常重要典型的残留检测方法 对确切的目
19、标有详细的要求 对每一个的检测对象有不同的检测限与定量限 报告的结果表述为“未检出”有重要意义 NATA 要求对痕量有机物残留进行确证 检测限 = 能被有效检测到与确证的最低浓度,忠候菌烈瘩贝泡纸滇莉逐瞄国憨币舀悸靶渣丸糖吵幸喻蒂金郡精蔽善死米单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,VALIDATED METHOD,DEVELOP SPECS,LOD & LOQ,10,8,9,ACCURACY,7,TRUENESS,四师运汪脏砧棉逛乐乒尽娘毡腑玻绅慈钒栋乖下胎倘稀普崭辕歪翌村官恤单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 7: 线性范围,方法的工作范围，该
20、方法下对结果有一个可接受的不确定度水平 定量限 线性校正范围的高限（即最下限） 定量限 用在方法确认中的最低浓度,作硬商堪蛰墩渭浙擦杖发坦磅律搅趁孕格茹秽腐藻与剧霹伎困奎很峰苞沿单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,例：线性范围: 动物组织中抗生素残留检测,定量限 能可靠定量的最低浓度,脐筛畅趁补袱袋看配耘拌逐炊驱闹撕伎丢丢适寅寒伊壹狐坊笔旗须雕末严单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,VALIDATED METHOD,DEVELOP SPECS,10,RANGE,9,LOD & LOQ,ACCURACY,8,TRUENESS,暴失娄殴剑漫纪囱砍茄衬怔恃
21、剂毖疾彭踪毋盼搬阵绥九藤溅敖朽点历未疙单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 8: 方法适应性,方法中对微小变化的适应性 象 pH, 温度, 流速,试剂浓度, 提取时间等的微小变化的影响. 方法的发展与实验室内重现性的研究将提醒化学家可能的潜在影响 可能的影响可以通过一次或同时进行的仔细设计的试验来评估 介绍限制影响的控制方法,蛆屉谢菜蔡脓妙祖窘驮科阁蚊宦朱砧搓气颧命藻关韵件新贸窘床甜笔扳酶单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,例：方法适应性: 动物组织中抗生素残留检测,在方法发展中经常使用 在方法发展和或确认中研究任何确定的影响 必要的话, 介绍在
22、可接受的限度内减少影响的控制方法 方法偏差 方法修正 内标,砰帚亥督需蛇盾指不炮兼漓伺戈堡值狐箔刨烷覆控适癌译夸厄针警斌涯宏单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,VALIDATED METHOD,DEVELOP SPECS,10,RANGE,LOD & LOQ,ACCURACY,9,TRUENESS,碳孪挛歪嫂呐璃忽调伤犯斗翱莽钾挽毛镀俭远演励腥龚料酗畦晌档卯纵喀单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 9: 计算不确定度,与计算结果关联的一个参数，用于表示所得结果的离差情况 ISO 17025 和 NATA要求 方法的不确定度知识对结果的比较以及判定
23、结果的合法性或调整检测限都是必要的 好的确认结果会有一个合理的不确定度 不确定度的估算对于检测对象及其结果的使用应该是合理的,锨啦起烫盆垃眷捣粳苑矢才焙闻乞疹再瞎憋模谗肚另林半匿陇丛荆督晨俞单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,例:方法不确定度估算: 抗生素在动物组织中的残留,估算定量限及其相关控制浓度结果的不确定度 对方法所检测的每一个化合物者估算其结果的不确度,沿哥绑赣润舵齿盏殉鹃镜倔酶印蚀甄蔽邱轻骗屈簇夷落躇敏肢节沽鸿撞移单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,VALIDATED METHOD,DEVELOP SPECS,MU,RANGE,LOD &
24、 LOQ,ACCURACY,10,TRUENESS,锯岳择雀捌怯讯磷称软熙逛绵酣块拱郝偏聂敦诱驯丢肾霄必仓凰鲁曳且曳单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,步骤 10: 溯源,检测结果必须要溯源到一定的标准,通常是通过完整的关系链溯源到国家或国际标准,所有的步骤都有相应的不确定度 没有计算不确定度无法溯源 方法确认对溯源而已是首要步骤 以下是量值溯源图,杖特波犬啥纺抽蔼喜藻挺削饵晒漓镀翠适蓑伞伎哄怔奶奖朱含黍申联谅惋单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,Traceable Chemical Test Results,Physical Measurement
25、s,Chemical Measurements,碗疥仕声钵书牢玛蚊崖霞谰廓座哇设蘑塞跟侥酒娟辽温跟缎饺此郡局罗飞单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,例:溯源: 动物组织中抗生素的残留,保证分析所用标准品都被检定过,含有一定的不确定度的纯度或浓度 通过与NATA认证的校准实验室的比对 定期校准天平,定容玻璃器皿，注射器 测试样品能完全代表所检样品并且符合规定的需要 方法完全被确认过，包括不确定度的估算,酬耗凑厉坯狼笑壮卤苑蚜叠搽絮猎汽侨僧谁介违郝谈沧系珊列板屎伎窝谬单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,DEVELOP SPECS,MU,RANGE,LOD
26、 & LOQ,ACCURACY,TRUENESS,确认方法,貉赌仅手者牵栈此码侥狠希茎眠香蠕虐吧红魏勘积慈十寓镰津授彤敖馈系单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,总结,方法的确认是对一个方法的系统评价，提供证据证明该方法 能满足专门用途的特别需要 方法的确认需要好好计划，是基于对所用方法的专门需要的理解基础上的 严格方法确认能充分保证结果是符合要求的 仔细的试验设计将会提供多方面的方法的典型特征 不是所有的方法都需要评价方法的所有参数,绞信鲤趴询藐抽红偷吹越浓厉萌校胺萍昂吝辐司粱钡鼠紫怯拦播枣滋精撵单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,范围,本方法是用于检测牛肉、肝脏及肾脏中抗生素A及其代谢物x, y & z的残留 ，浓度范围在 0.01 至 5.0 mg/kg. 定量限的结果估算不确定度是 0.005 mg/kg (95% 置信限.).,捣鸽巍睛北馁腋渤嘿兰廖呀跟锯酸曝宪店膀逮涤枚吞愤岁硅说巨丽祈舌韭单个实验室化学检测方法的确认单个实验室化学检测方法的确认,