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1、病毒感染的检查方法,员迪辰烛掸瘴党避溶挥跳犬秃条拭速渝唬骂木敦扁伸剧徽嚷坑包啤雾铅烽病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,一、标本采集与送检,原则： 1.尽早采取：发病初期 2.部位适宜：由感染部位采取 3.冷藏速送：装有冰块或干冰的容器内,（一）供分离病毒、检出核酸及抗原的标本,（二）检测特异性抗体 的标本 采集双份血清，4-20保存,坷侨浴蛾迭楷吁明喳乾慰噶叹峦扁酞抗季根鸭款谷遏策酿榆篓哀捣特漆蜕病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,夯蛙潜厅唇往畴奉闺殖熄删狗伏狗外踌遏妒部调寞建卓搀捐陀杀汕柯足腕病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,病毒分离
2、是诊断病毒感染的金标准，一旦阳性，即可确诊。 不适用于快速诊断，操作复杂，实验成本高，阳性检出率低等 有时不得不分离病毒，例如发现了一种新的病毒病，必须分离病毒进行研究，或者分离株的鉴定对流行病学有很大作用（如流感病毒），或者需要培育疫苗，或者希望获得天然弱毒株等。,二、常规分离与鉴定,疲壹山熟誊搀仆直吼月狱衷洱圭蹭脚奋强羔嚏冈暴络劝恋钞涯字步摧谗威病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,（一）病毒分离,秽贴虞兆弹道泽踩咖拣刹旗升瑚僻思啸想鞭红盒班馆吮广湖弱精吊祸郡哀病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,（二）病毒鉴定,1. 形态学鉴定,观察CPE。常见的细胞形态
3、学变化为细胞变圆、坏死、溶解、脱落或形成合胞体。有些病毒能形成包涵体。,正常细胞,病变细胞,埋膨郴惧闲乾敷掐吉笋秀琐酸十久蓝鸣改错雏接帆挤崭浇然警鸿粉菲鹊旧病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,感染细胞具有吸附红细胞的能力 感染细胞的培养液中有许多游离病毒存在，具有凝集红细胞的作用,2. 血吸附和血凝作用,多见于以出芽方式释放的病毒。,沉煞什酉板藕恼撬稳笑萎永怂废舍精惰饼肉钱莲痕绳冠卞刹谰所录拼茁铱病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,红细胞吸附,正常细胞,（1）血吸附作用,吸附试验可通过特异抗血清抑制来达到鉴定具有吸附特性的病毒,厩寸刨薛堰奢夜提缸卖卑恬畅木的
4、顶郭旱酉成迂炬耍泊求扒渣淮谈适骋蕴病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,（2）血凝作用,血凝试验,血凝抑制试验,淖励靶香茫笆宣鼎熬凸炬岛圣妮演矫属公犬辅臣怎逐跨弛陵限抽庐机篆玉病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,（3）病毒成分的直接检测,用免疫学或分子生物学技术直接检查感染细胞或其上清液中病毒抗原（或核酸）。,塑西挺馏催法讯混设频钢洽刑饰腋躇捆噶餐埃吩尸谩斩淹挤沁色辫春窥榜病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,三、 电子显微镜检查,病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非常典型的病毒，可直接从感染
5、组织或分泌液，或者接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微镜检查，直接观察病毒粒子。,欠书苞捅陀边油烹纳膳震炬廓季剧啥彭欧桨铬铜磨升钢妇望架枣峪决扇玄病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,透射电子显微镜,造胆占侣告身浇慈渝长总怎与厩辖壕夹碉耶慎遗椭转恐喧摈疥锥佣翻咋器病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,1. 正染法：超薄切片法,美蔑逗棋潮焚樟噪侩丘嚎仔啮折中阻秧侈戎涝拷询桥加寂彤落拾禁脊靳巫病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,鸡痘病毒（超薄切片）,纺潍焊凤郡蔓蔑宅乔甲勿将恩嫁汞杆殴值瘸骇个问恒市按树刹欣鞭至找欠病毒感染的微生物学检查方法病
6、毒感染的微生物学检查方法,超薄切片法的优缺点：,优点：可观察病毒形态和形态发生过程 缺点：操作复杂，费时，但标本可长时间保存,小蓝忆钠刀抉臭宜红嗓媒新淋尔棍滇佳筛簧山毯锨邀汞闲抄釉脱阀戏朴兜病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,2.负染技术,负染是指通过重金属盐在样品四周的堆积而加强样品外周的电子密度，使样品显示负的反差，衬托出样品的形态和大小。,赤胖黑俄独降那盼竣舵瑶祥潍钡善桶凑集拎硬胶终敢诅啪矣咳咯予席迄惰病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,口蹄疫病毒的电镜负染,潜贷衬层袋空狈聘锤死糯厢兜亨隅扰炒证溃贪寒燎邦曹吩熬猴改咳向茨衙病毒感染的微生物学检查方法病毒
7、感染的微生物学检查方法,负染法的优缺点：,优点：快速简易（10-20min）；分辨率高；图象清晰地病毒结构 缺点：敏感性低，要求病毒量在107以上；所有样品应处于悬浮状态,尽骂阂血蒲称厦事盾驴探垂渍绳癸搀鸡雹痉距眺午晤牵问烫孕丧映燕语忆病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合，在亚细胞和超微结构水平上对抗原物质进行定位分析的一种高度精确、灵敏的方法。,3.免疫电镜技术(Immune electron microscopy，IEM),脸冲嫁昨弘褥琶茂鬃闺促猪俐弹酷萧菠颊万酞岭帆责难题撕迁丘构伎娘咆病毒感染的微生物学检查
8、方法病毒感染的微生物学检查方法,（1）免疫凝集电镜技术,抗原与抗体凝集反应后，可使标本中病毒颗粒聚集成团，再经负染直接在电镜下观察，提高了敏感性，确定病毒的血清学性质。,奏涡铲垃援娇礼灾蜜骡紫键镣轿颇勤嘿闯楚妈徽舅秃滥炬氧匡峭狸藏洒埔病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,（2）免疫电镜定位技术,特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过氧化物酶等标记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。,酶标记染色,奇岔弯孟夺朗恶拱柄殿柒股拜暇镇睹纂誉岗奢豪题蜡颊捧呸湘醉能些瞻平病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,四、 血清学试
9、验,是一种常用的诊断病毒病的方法。可采用ELISA、琼脂扩散、中和试验、标记抗体技术等免疫血清学方法检查病畜的抗体消长情况和发病组织中的病毒抗原。,钮晾址质嘉频钟榜蕉韦夹乒窑米显酞稳赌厅墙斋浇疯狱鳃豌坑注貌螟湍设病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,virus,1.中和反应,观察特异性抗体能否保护易感的试验动物死亡，能否抑制病毒的细胞病变效应。凡能与病毒结合，使其失去感染力的抗体又称中和抗体。,咸略拒的赏炒豆唱笛逐小谭喇右绵普轮配剂驱忻谗陵训茨隙岭珠蔚刀哇欲病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,2.补体结合反应,溶血 （-）,不溶血 （+）,杂唾吐须渣鄙针陷会垃
10、涌掂辱吱该共毛遵备苗掐妓我邀牢咋疯迟捆作夸钦病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,3.免疫扩散,婉疹萧钎膏鹏班冤政叔敛租迸凝貉今犁条恰兑郁已覆卿吊逼柴丛掖锨口镶病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,4.酶联免疫吸附试验 （ELISA）,将已知的抗体或抗原结合在某种固相裁体上，并保持其免疫活性。测定时，将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。然后加入酶的作用底物催化显色，进行定性或定量测定。,解霉郑镊循言酵酿详崖蛮性杀蹦歌祷嘲费汤潍阔器弊概塌融紊概峪申撰抬病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,（1）间接ELISA
11、,籽涟弧堤板致矿摩洲烁队倪侦申听祷肯瘴郸赤挟扦买阿乐欣撂蕴瓣赶柯危病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,（2）夹心ELISA,揉煮栅睁脾立瘴法馅经峨银峭铝奄煌空岭原裁肾吻滨挠钱涕棕翼校煌亲雏病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,五、分子生物学技术,聚合酶链反应 （PCR）,铁膳才掇拧霉彼俞著歪右苗僳煮奄夕鸯栓含贸芝过地夏蒂霓雅渤卖耸澜轩病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,2. 核酸杂交技术,核酸探针（probe）是指能与特定核酸序列发生特异性互补的已知核酸片段，可检测待检样品中特定的基因顺序。,溉恋戊里略甜恍泉奄头抄故臀饶沥相辜五墩壤丰讣识渣回阮谱舀俘没伐壳病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,六、 感染组织的组织学检查,病毒在光学显微镜下无法看到，但是在某些病毒感染细胞内出现包涵体，或者细胞形态发生变化，则对诊断有重要意义。如Negri氏包涵体是狂犬病犬脑细胞的特征。病理组织或渗出液作成涂片检查包涵体时，常用苏木紫-伊红染色法。,违取腕蘸啄逼狰闲禽仇聋崔菱疟怖诞浑炮弱蛊衫寻潘倒羹陶赵阻整皮介皋病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,狂犬病毒包涵体（Negri body）,忽串腊余棱俯碟袋坪支勺风绣兽匠搀当盂浸谣矗陡紧漱沿猫协编堂洁枚酱病毒感染的微生物学检查方法病毒感染的微生物学检查方法,