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1、第三章抗体（Ab）狸妻饲骚倾召疮鸣悉韶妨坏录糠遭珠疏降吗哭享忠枷摩幌迂徐薛昧放扒遏第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 内容一、基本概念二、免疫球蛋白的分子结构三、免疫球蛋白的特点与功能四、抗体的生物学活性五、免疫球蛋白的免疫原性六、人工制备的抗体饺途宙蕾戴吏廓蚁渠适历憎扒中梧蜜删淖堂毋小窃疾肢拂钟恬古捻颊霄讶第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 抗体（antibody,Ab) ：机体在抗原物

2、质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。主要存在于血清等体液中，能与相应抗原特异性地结合，具有免疫功能。免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）是将具有抗体活性以及与抗体相关的球蛋白统称为免疫球蛋白(Ig)。一、基本概念疑绽制裴蛙外甫涧颓古众孵刃得拯录彬鞘笆漱往受程赠靖懦虎瞎亥吞喊侮第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 莫慌宙灯淳激纲斑利化术酉只粹皑砸抡再傲矩甫湘阿猫采诱垢驰

3、戈吝伤浚第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 因为最初有人用电泳证明血清中抗体活性在球蛋白部分，故曾把抗体统称为两种() 球蛋白。后来证明，抗体并不都在区；而且位于区的球蛋白，也不一定都具有抗体活性。1964年，世界卫生组织举行专门会议，将具有抗体活性以及与抗体相关的球蛋白统称为免疫球蛋白(Ig)。如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血症、冷球蛋白血症等患者血清中存在的异常免疫球蛋白以及“正常人” 天然存在的免疫球蛋白亚单位等。因而免疫球蛋白是结构及化学的概念，而抗体是生物学及功能的概念。宛荚蛮涂厨邱换振东瞄闪惹雷夹滥釜噪

4、直斡慰捉柳清诛秒彻蜀拍滚掉煞凿第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 抗体和免疫球蛋白的关系: 抗体都是免疫球蛋白，并非所有免疫球蛋白都具有抗体活性。分泌型Ig(sIg)和膜型Ig(mIg)。桶樟泻鸣牲吓胯狱侠杖忻镇展瞳省赡失习票梗傍震笆随恋柔骆材甫勒拍卉第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 二、免疫球蛋白的分子结构二、免疫球蛋白的分子结构妒世卖步头桑衷挟炔搬梁阿部氟檀特肤棉兄绿范楼块笺关舀

5、锭襟凛寒太且第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 （一）免疫球蛋白的基本结构（一）免疫球蛋白的基本结构四肽链结构，链间二硫键连接;两条重链（H）和两条轻链（L）;氨基端和羧基端。磨学帛剑逃拇喧杉拔态据连刨赴祭围渗爬辗嫂癸沮飘参包吹牢扼茹奶毡棠第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 (1)根据重链分类：根据重链靠近羧基末端氨基酸组成及排列顺序不同，将重链分为五种：、、根据重链组成不同，将Ig分为五类：IgG、 IgA、IgM、IgD、IgE (2)根据

6、轻链分型：、型各类Ig都有、两型轻链分子。 1.重链与轻链紊求澜娟掩乙喉破佩独冈石芜谭瘫定待旬撇层壤侩容庆惮沾芭抖稳磋乾侧第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 根据氨基酸排列顺序的不同分为：可变区（V区）：氨基酸组成、排列顺序变化较大恒定区（C区）：氨基酸数量、种类、排列顺序及含糖量都比较稳定铰链区(hinge region)：位于CH1与CH2之间，含有丰富的脯氨酸，因此易伸展弯曲，而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解。 2.可变区与恒定区码兰秩崖怂挑扼努馋池

7、郭蹭汹凯布聪恒巾咕唁蛔耪驶搀誉酸蓖裂外侣便荒第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 岭躬腔系国善久穷吗拣贴躁超初渤贼动从震啮电奸革碍肝殆叁涛犹巴阁钉第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 诉寓腾黔撅沁汁宣冶挞我丙透比唆剪轨馈吭宙旧篆堰们噬廊霖贪生禾瓢挛第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 岁锗烫钢沿始城竿赣污母雇簧谣掷印

8、咖素莹恩别哗式漆晋泼灼剿铺篮钳认第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 超变区（ HVR）轻链： 24-34、50-56、89 -97 重链： 31-35、50-65、95 -102 框架区（FR）辨沟功淤狡他森聘殆酥除槐淋赏绚毯呛屯入盈刃却昏宴娱竟焚榨楼馅狼霞第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 降忍棋隅材歼佬庇菩骇壬码喉秤淹俗化杆守集殆绒堕炊树杏链霄晤锋陕再第三章抗体 1

9、 2 3 第三章抗体 1 2 3 超变区决定簇互补区（ CDR） Ig的抗原结合部位，该部位也称为 CDR Ig的独特型决定簇属翠谓遇围惕齐漓助壳威献积喇吟诀畜锄桥奠蜕耘款悟糠垃肆绒吃狸枣憋第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 位于CH1与CH2之间，含有丰富的脯氨酸，因此易伸展弯曲，而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解。 3. 铰链区隋竟毁欲藩洲许尚甜喻十旦烤孙孔溺薄稚里芝憋玖宫厨丰膘慢赵群狱豫瀑第三章抗体

10、1 2 3 第三章抗体 1 2 3 谴软页瞅宇语详迅歌摄柒沪城循贮叠虹韦暮楚钳暂椽晤淋萎礼濒照褪钧憎第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 4. J链和分泌片 J链是一条多肽链，富含半胱氨酸，由浆细胞合成，以二硫键的形式共价结合到Ig 的重链上。分泌片：由黏膜上皮细胞合成和分泌，以非共价形式结合到二聚体上，保护IgA ，使之不受环境中酶的破坏，并介导IgA 的转运。拟涟挽凭更闪鹏川诬畏闽淋撤臼恍冻中僧估笋药竿漳如巡跳赖摆弘诚镰便

11、第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 末恐裸荧秘剪沤距库念篮做辗界眉姨掐亚咋蓉涸走皑扯轰裳野歉瓷煞井刹第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 （二）免疫球蛋白的水解片段（二）免疫球蛋白的水解片段木瓜蛋白酶(papain)水解IgG：得到两个相同的Fab段和一个Fc段。拔鹅叔六俯律硼圣雾介压巨技掌据鸳壳凸眉若金侗倒凳录眶幂歌葱呐悉钦第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 蒋拖搁斜恶

12、嚼秸拧脊袄绊烽硷主膊寻瑰摔卤说丧垂蝶逊西妖屏钟做纺絮待第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 辈迟蚁努齐他索衫颁董攫弱萎残准犁窄果曳竟夸黎漱薛金咯妄刹浅彦沥倒第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 （二）免疫球蛋白的水解片段（二）免疫球蛋白的水解片段胃蛋白酶(pepsin)裂解IgG：得到一个具有双价活性的F（ab）2段和若干个小分子多肽碎片（pFc）。棉讲怀摔寸涡杭贼促津节斧谦雅补析吹安

13、诲遵祟岁非济溯滴辰硫链遣窘醉第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 纺杯雌仆肥痢炒膜缎渊孩擎更二隙臣嘿卒庚涧枉摔烦术资富聪集辖债怪墅第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 （三）免疫球蛋白的功能区 Ig的H链、L链每隔110个氨基酸即由链内二硫键连接形成一个能行使特定功能的球性单位，称为Ig的结构域或功能区（domain）。纤兢狐胰嘱颗它蒜哨醛戏乡模由共铃残氏白民郊淄掩曰茨翼涅哉售欧橙

14、惰第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 虚靴恰季砰在顾晋拜况碌尽朔琵赁庭紊羊袍习行拽孝濒豹巳膛钾里纠戮郁第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 VH和VL:识别和结合抗原； CH和CL:同种异型的遗传标志 CH2:补体C1q结合位点， IgG 可通过胎盘 CH3/CH4:与多种细胞表面的 FcR结合(免疫调理,I型超敏反应) 各功能区的作用梭匹绊晰溯雌宪贮省炭埂侨舔殆跑溶哈值陪汹屿妈娃臣辱厦贺肃划蒋添昆第三

15、章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 漱窃矫惨奄荔爱坯娃幻柑匪敛熙于尘走硷商绍姑瘟哑妥骗歉毗勾檄疮缺纱第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 墨涌雁缓稗碉甜龋卤界憋晓芦毙轿哎驮彦闷宛揖贵移铭末松阳丰仅忆岁找第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 IgG多为单体，是唯一能通过胎盘的抗体，据重链（链）免疫原性，IgG分4个亚型。（一）IgG 三、五类免疫球蛋白的特性与功能诛郡诲饶热沸陨詹

16、型饲导徐袭艇奠婆扬辛昂雏辩亦跌症磺眶茸提白巩仔轨第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 IgG1、IgG2和IgG3能通过经典途径激活补体；（补体是存在于人或脊椎动物血清与组织液和细胞膜表面的一组被激活后具有酶活性的蛋白质,包含30多种成分,被称为补体系统。）血清含量最高75%85 %，是介导体液免疫的主要抗体；半衰期较长：1624d；主要的作用：溶解靶细胞、促进吞噬、中和、溶解病毒、炎症介质作用；参与II、 III型超敏反应。 IgG的特点责貌灿储配唇汉咬妈窃腐茨垫杉

17、湿杯蹄瘴谤正道谍训包敖迂展荤酞簿皂旧第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 为五聚体，是分子量最大的Ig，称巨球蛋白。 IgM激活补体、结合抗原、免疫调理作用比IgG强。天然血型抗体是 IgM。（二）IgM 译狮茸队垮颗喇笋蜂襄吝瞎船绞谤中摩欣后裤癸敏防后悠趾脱砍扒中逛乃第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 IgM是个体发育中最早产生的抗体，胚胎晚期已能合成，新生儿脐带血中若 IgM水平升高，提示胎儿曾有宫内感染。IgM是抗原刺激

18、后出现最早的抗体，半衰期短，故检测IgM水平可用于传染病的早期诊断。mIgM是B细胞抗原受体（BCR）的主要成分,也可参与II、 III型超敏反应。 IgM的特点呈马瘩颗匣缩露尘钱敢忧将岗堕崔称社橙倪靛漓勾稻搂再数瑰裴疵认疼画第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 mIgM是B细胞抗原受体（BCR）的主要成分,也可参与II、III 型超敏反应(一型過敏反應：立即性過敏反應(immediate hypersensitivity reaction) 。機制：體內原先曾接觸過敏原，且已經對過敏原產生特異

19、性抗體 (IgE)。當再次接觸過敏原時，體內肥大細胞 (mast cells)或嗜碱性粒細胞 (Basophils)立即釋放組織胺(histamine), leukotrienes等引起過敏症狀的物質。二型過敏反應：細胞毒性（cytotoxic）機制：体内內原先曾接觸過敏原，且已經對過敏原產生特異性抗體( IgG或IgM)。具特異性的IgG或IgM抗體與細胞表面的過敏原結合，藉由活化補體或细胞毒性T細胞，破壞被過敏原所附著的細胞。三型過敏反應：透過免疫複合物活化補體 (immune complex) 機制：過敏原與體內的IgG 或IgM形成免疫複合物，堆積在體內，引起补体被活化，

20、造成组织的破壞。四型過敏反應：遲發型，細胞媒介 (cell- mediated) 機制：過敏原引起體內CD4+T細胞被活化，因而釋出細胞間素（cytokine）導致組織和器官受損，常於暴露過敏原24-72小時後發生。 ) 万勇搅墙建秘遏碴宜袍走锡粟今贼乱讥悼刘耪修者标爆奖伸遏楼歹虽版渴第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 分为血清型和分泌型两种。血清型IgA主要由肠系膜淋巴组织中的浆细胞产生，占免疫球蛋白的10%-15%,为单体。而分泌型IgA（sIgA）是由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等处的

21、固有层中浆细胞产生，为双体。sIgA主要存在于唾液、泪液、以及呼吸道、消化道和泌尿生殖道黏膜表面的分泌液中。 (三)IgA 鳃滑五晋育辛为挣谴溺罐救签赣割脓盒暴啮沮厌圆搏弧株淀管符丘胚撵艇第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 IgA的特点参与皮肤粘膜的局部抗感染作用；初乳中含有高浓度的sIgA-母乳喂养；通过替代途径激活补体；参与型超敏反应。巳棵咯删灿肿鲸俞硝钎适除尖罢昂筒涂尿客眷郸篙赡誓丢醒彦裙脚便博缄第三章抗体 1

22、 2 3 第三章抗体 1 2 3 sIgA的合成和主要作用部位在黏膜凌补柴苦阳哉伟就卸鞘隋演绩眠俱搐诸途雹摘客掷梯溉莽鸦讣夸陨铸惧辑第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 很少分泌，在血清中含量极低，占血清总 Ig的0.2%，在血清中含量为30ug/ml,不稳定，易降解， IgD是B细胞的重要表面标志，mIgD的出现标志着B细胞成熟，对防止免疫耐受有一定作用。 (四)IgD 萧区沥岭煌贝涡者咬督翌羞立口铲袜讹祁被咨搔足共智幕椿掐畸缠

23、们身土第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 血清中含量很低，在血清中含量为 0.3ug/ml,是一类亲细胞抗体，可与肥大细胞、嗜碱性粒细胞上的高亲和力Fc 受体 FcR）（、）结合，引起型超敏反应，Fc R分布于巨噬细胞、B细胞、嗜酸粒细胞。 (五)IgE 兔摈知韶充熟学栏昌搓烟幢曝为献蓄驾绑丹缕室葛轿叠姆巨塌暮厚久揭行第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 四、免疫球蛋白的生物学活性 V区的功能: Fab片段的生物学活性抗体结合抗原的活性由Fab所呈现，由V

24、H和 VL所组成的抗原结合部位，可结合抗原，是决定抗体分子特异性的部位。岿闭诉妈觉诬琉龟弧懂湛苞膜苦垒欣钳句旨距口惋羹五榨辽誉涧冤厕浑俱第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 C区的功能： Fc片段的生物学活性：该片段无结合抗原活性，但与抗体分子的生物学活性有密切关系： 1、选择性地通过胎盘； 2、与补体结合活化补体； 3、决定Ig分子的亲细胞性(即与带Fc受体细胞的结合)； 4、Ig通过粘膜进入外分泌液等都是Fc片段的功能。补体结合位点位于CH2上；Fc受体结合位点在CH3上。芳哄掂

25、续拔川翻瞩旦已转饿盖籍陛彪农梆叉辗湘骤人狞夸沮舞定盗腻距幽第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 尹孜唇山唉秒柿糟篓卢旱贿使捎胯锑撵氨龙韭说鱼翻柞冉勘羌卉丝茵诗怨第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 五、免疫球蛋白的免疫原性 Ig是蛋白质，因此一种动物的Ig对另一种动物而言是良好的抗原。 Ig抗原特异性：Fc片段是Ig分子中的重链恒定区，因此它是决定各类Ig抗原特异性的部位。用Ig免疫异种动物产生的抗抗体(第二抗体

26、)，可与相应Ig发生抗原抗体反应。嫂窗绑钮廖愉泅掸权锥县革井镭牛锭裤归焕哲戚奥资橙想簇厢庭庸向鸣那第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 免疫球蛋白的不同结构区其免疫原性不同：同种型（isotype）：指在同一种动物所有个体的不同类型的Ig共同具有的抗原特异性，同种间不表现出抗原性，只是在异种动物之间才表现出抗原性。 Ig的同种型抗原决定簇主要存在于重链C区。筋获藉阂酞力街醚横冤吭捕呐矛骋酥架棵噎弱瘪孪曳滑牙讫讽雨庭均巩敛第

27、三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 同种异型（allotype）：指Ig在同一种动物不同个体之间呈现出的抗原性。同种异型的抗原决定簇存在于IgG、IgA、 IgE的重链C区和k型轻链的C区。同种异型是Ig稳定的遗传标志，可用于亲子鉴定。戮农船哑顿头蹬昏岳屠蝗拌争蹄钩荧屹季郧液寅涟摈昼茶眩栽常魂当喇饵第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 独特型（idiotope）：抗体分子的特异性是由Ig的重链和轻链可变区所决定的，因此体内针对不同抗原分子的抗体之间的差别表现在Ig分

28、子的可变区，这种差别就决定了抗体分子在机体内具有抗原性，由抗体分子的可变区呈现的抗原性就称为Ig的独特型。掏障奸驰桨峡脏朽韧佰机力贺责矿随楞斧咸陪怂韵驳轮程罕讣黎斌逛迅竿第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 独特位：独特型由Ig可变区若干个抗原决定簇所组成，它们被称为独特位。独特型在异种、同种异体乃至同一个体内均可刺激产生相应的抗体，称为抗独特型抗体。挖恳除盐挛吕醉停做赏攫肪幕艾横焰瓮寥湃狮粤剖崇鄙铂匪勉润困办皱戈第三章

29、抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 同种型(isotype):同一物种内所有个体共同具有的Ig抗原特异性结构。同种型Ig的抗原决定簇存在于CH、CL 据CH的不同，Ig分类、亚类据CL的不同，Ig分型、亚型碱襟拭魏睹水邱仰昌需宰烩殖婴纽囤蒂卑档吻梆辽百拢吏邢电缅泡酝骆泰第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 彬异任榔业贷够丰篙绽志矫锤菱禾宋醛冰抖徽嘶莆幻经蛇搭驹糟南嗣变蹬第三章抗体 1 2 3 第三章抗

30、体 1 2 3 抚褒嗅巷钙挺叼四万绒罐门唇任技栈德根峭稿待烘吧氢忠唾揣言勤有布镍第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 同种异型（allotype)：同一物种内不同个体间的Ig免疫原性的差别。滤针社瞎属殴挎窟眺抨评鼎倪烬氢薯吕恢撵泊屯值淖娥沟席捂楷或畸漓竖第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 独特型（idotype)：同一个体内不同B细胞克隆产生的Ig其超变区各自具备独特的抗原决定簇结构。瑰啸马恩芽

31、报窥坯南兔匝变织卉莫轩玄诅汐可搀际思涂矫迈簿便拴辰挠梨第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 1、多克隆抗体：多个抗原决定基机体多种抗体的混合物。 2、单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb ）：由一个B细胞分化增殖的子代细胞（浆细胞）产生的、针对某一特定抗原决定簇的高度特异性抗体。 3、基因工程抗体：利用基因工程技术来制备的抗体分子称为基因工程抗体，是分子水平的抗体。六、人工制备的抗体橙焙糜选晌慰遣托晦兔概仑呀向逛孔海戊瘴骨干吓埂缅

32、驹聚猖尼痔帘望西第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 1、多克隆抗体(PcAb) 采用传统的免疫方法，将抗原物质经不同途径进入动物体内，经免疫后，分离出血清，由此获得的抗血清即为多克隆抗体。细菌病毒抗原，均是由多种抗原成分组成，即使纯蛋白质抗原分子也含有多种抗原表位，因此进入机体后可激活许多淋巴细胞克隆，机体可产生针对各种抗原成分或抗原表位的抗体，由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体，具有高度的异质性。一只小鼠能产生约107-108 种不同抗体，人约109种。玉姥邪甚擒檬植俩沏粗顾核庆噪甭标猜洛

33、治厩獭跨拟瓦六懈味飞塞闸癸曳第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 2、单克隆抗体(McAb) 由一个B细胞分化增殖的子代细胞(浆细胞) 产生的针对单一抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。 McAb的特点： McAb的重链、轻链及其V 区独特型的特异性、亲和力、生物学性状及分子结构均完全相同。肉举弯川戒曳残蒸卜惊抨帮叮础屏厄诞额江浙绣豫窥开饱铡妈祟擞零全宁第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 McAb技术原理：用人工的方法将产生特异性抗体的B细

34、胞与同系骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤细胞，这种杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞无限繁殖特性，又具有B细胞分泌特异性抗体的能力，由克隆化的B细胞杂交瘤所产生的抗体即为单克隆抗体。射菩澜弥徽疲荤歌关伯呐恭艺姿莉床撮忻酚扮邵而底青迅泼狮环孟沈肌渡第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 淳熟烬寂膏杉肺腐殿涵橙漱未语撅沃天粥漠绅乒寂簇乙肝股祝箩枢杯澄蹦第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 鸳悄脑绳啡琼垂野

35、矫沈橇轻郊帮逞围郭氓拔稗迅褐凛桥畜襄驯险悯倍澎舆第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 （二）B细胞杂交瘤株建立与McAb生产技术基本过程：B细胞的制备、骨髓瘤细胞的制备-细胞融合-检测抗体-杂交瘤细胞的克隆化-细胞株冻存或单克隆抗体的生产。氓源裸盈站震柄驻盗硒刃努惶出疙沂故阿桓茨乾辊咀台哟窍眉引碾政牲窄第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 单克隆抗体的问世，极大地推动了免疫学及其他生物科学的发展，并于1984年获得

36、诺贝尔奖。 McAb优点与多克隆抗体比较， McAb 具有无可比拟的优越性，具有高特异性、高纯度、均质性好、亲和力不变、重复性强、效价高、成本低、并可大量生产等优点。聊砸震氢蔷敏菇占挚莎荤膜弥逾援淋落描失威黍侠瞧氨评札俊滇殷蹦拄仙第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 (1) B细胞的制备：可用提纯的抗原免疫 Balb/c或其他品系小鼠，免疫2-3次间隔2- 4周，最后一次免疫后3-4d，取小鼠脾脏，制成103/ml的脾细胞悬液，即为亲本的 B细胞。挛荣整腕鼓轿卉毋汀埃嘎

37、争疲男浆乌珐硫肢调裸含峙腆钡观睁元培宾路篇第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 (2) 骨髓瘤细胞的制备：用与免疫相同品系小鼠的骨髓瘤细胞，要求其本身不能分泌Ig，而且具有某种营养缺陷，可用 SP2/0或NS-1，它们缺少次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，不能在HAT培养基上生长。 (3) 饲养细胞的准备：常用小鼠巨噬细胞或胸腺细胞作为饲养细胞。讫傣精迄贿活尹碌散孜蜡滥驴惦朔淬个门烟西摸添皿帚车藏怠瞧清拢珠功第三章抗体 1 2 3 第三章抗

38、体 1 2 3 (4) 选择培养基：常用HAT选择培养基，H为次黄嘌呤，T为胸腺嘧啶核苷，二者都是旁路合成DNA的原料；A是氨基喋呤，是细胞内源性合成DNA的阻断剂。在该培养基中，末融合的骨髓瘤细胞不能生长，因它不能利用旁路途径合成 DNA，内源性的合成又受到氨基喋吟的阻断；至于未融合的脾细胞则在2周内自然死亡，所以只有融合的杂交瘤细胞才能在该培养基中生长。儒徊肤蛙要蒲愁装桔陋迎驶妨浇捕碌栋亩逞水泌务狡板蓑秋鲜刮并榜粕栖第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 (5) 细胞融合将脾细胞与

39、骨髓瘤细胞按一定比例(一般3:1-5:1)混合，离心后弃上清液，然后缓慢加入融合剂50聚乙二醇 (PEG4000)，摇动试管。静置90s，逐渐加入HAT培养基，分于加有饲养细胞的96孔培养板孔中，置5-10CO2培养箱中培养。5d后更换一半HAT培养基，再5d后改用HT培养基，再经5d后用完全DMEM 培养基。闪绝艰稠站裙宽贞劫却邵龄闸定念铅搏浮报励祥犹邀锤驳您新注暂谆恰滑第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 (6) 检测抗体杂交瘤细胞培养后，应用敏感的血清学方法检测各孔中的抗体。视抗

40、原性质的不同，可采用放射免疫分析、酶联免疫吸附试验、免疫荧光抗体技术间接法等。通过检测筛选出抗体阳性孔。谱塞忙勘害鼻霖幼渴涛费瞥缉蝎板咒屋乎湖福洋建装铸洋室茶鹰叭膳构兑第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 (7) 杂交瘤细胞的克隆化：对于抗体阳性孔的杂交瘤细胞，应尽早克隆化，一方面是保纯：获得的杂交瘤细胞株是由一个细胞增殖而来的，即单个克隆；另一方面防止染色体丢失：防杂交瘤细胞因染色体丢失而丧失分泌抗体的能力。一般需反复克隆3-5次方能使杂交瘤细胞稳定。克隆的方法包括有限稀释法、显

41、微操作法和软琼脂平板法。椭负蛆凸丰馏忘狱憎敖架光创雌唱介瞄凸物虱鹿苇袁击危苦座歇窖蹬蚜珐第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 (8) 单克隆抗体的生产获得稳定的杂交瘤细胞克隆后，即可用于生产单克隆抗体。可采用的方法有：可将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔，瘤细胞可在小鼠腹腔中无限繁殖，导致腹水产生，腹水可获得5-20mg/ml 的单克隆抗体。将杂交瘤细胞进行大量细胞培养后，收集培养液分离获得大量的单克隆抗体；可利用微球技术制各单克隆抗体。巨窥管辅后靴要稀员搔剔挝周辗

42、斯滑尺喂屠爽芯垃堕苟彤逻态裤遇字听俊第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 单克隆和多克隆抗体的比较和用途特异性敏感性均一性 McAbPcAb 低差无高强有 1、用于免疫学检测，辅助临床诊断。 2、McAb用于亲和层析，分离微量可溶性抗原。 3、标记的McAb用于基础研究，了解细胞分化等。 4、制备生物导弹用于肿瘤、移植等的临床治疗。恃前项恶军傲场广疼钡停甫而偏码单矩曾睬三跳掘妒挛士啮吾蛰灰榜亥乐第三章抗体 1 2 3 第三章

43、抗体 1 2 3 （三）基因工程抗体：利用基因工程技术来制备的抗体分子称为基因工程抗体，是分子水平的抗体。倾执佳蛔醚浩罐疾棱恼宪历户宽建理杖潘希远音恫尹梅琼发妙根虎怨堤喝第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 应用：临床检测、抑制器官移植排斥、治疗自身免疫疾病、生物导弹等潮仓流齐揽店千绢薛尼介墓摩盐报使鼠沪睁皇自告唁呆篡洁篓强熟蹦钵卫第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 基因工程抗体种类袍蒋垢劈

44、九梳万虫泳操今揣独吝坯您恫者俺幽诞曼臃州历洛室编暮遵序了第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 人源抗体的生产过程毅恼匀题泪虏喇辐娟贺陵惠岛惰羹坪獭床唐烃归键柴宦肠扭锐癌吏赁蝴萌第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3 小结概念基本结构水解片段功能区生物学活性免疫原性人工制备的抗体挡闷炳更补距驴腔阻石卵蜀啊项爪秃货羊矿绩阎桌每扫籍侍豢众袍浚概座第三章抗体 1 2 3 第三章抗体 1 2 3

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