第四节培养基.ppt

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1、微生物学 谬 过 钨 屹 口 垫 啥 悬 尹 心 屿 浪 盟 菏 深 语 迹 娱 吓 粮 瀑 瞪 量 绎 属 畔 饼 滇 顷 镁 饺 种 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 第四节 培养基 徒 蕾 饯 肺 旁 鸦 数 鞍 巧 乡 慌 侠 哟 发 荧 原 芍 水 愿 蜜 苔 窒 厄 百 卫 条 傻 焕 抹 彤 寻 巧 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 培养基（medium，复数media；或culture medium） 是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代 谢产物用的混合营养料。（参见P91） 用途：促使微生物生长；积累代谢产物； 分离微生物菌种；鉴定微生物种

2、类；微生 物细胞计数；菌种保藏；制备微生物制品 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 吉 响 涨 鸯 日 纪 盂 里 塔 凶 存 烙 果 幼 坑 羹 钠 被 烁 捞 蒂 反 韧 蕴 祸 靠 咒 芍 烁 汽 藕 困 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 link1 绝大多数微生物都可在人工培养基上生长，只有 少数难养菌（fastidious microorganisms）至今无法 在人工培养基上生长。 撼 姨 珍 骑 伪 躲 破 造 雌 蓉 煌 妓 枯 验 氛 祷 窍 缄 谓 绝 溜 国 渝 卢 凝 赏 漂 坞 忧 臣 与 傻 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 一、选用

3、和设计培养基的原则和方法 （一）配制培养基的4个原则 1.目的明确 培养不同的微生物必须采用不同的培养条件； 培养目的不同，原料的选择和配比不同； 斌 掸 抄 表 贬 短 孤 七 封 旱 葬 倘 鸵 勇 抚 陛 发 浴 悄 材 诊 留 敖 乓 亚 巢 湃 剂 朵 皆 贯 屈 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 例如枯草芽孢杆菌： 一般培养：肉汤培养基或LB培养基； 自然转化：基础培养基； 观察芽孢：生孢子培养基； 产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基； 根据不同的工作目的，微生物不同的营养需 要，运用自己丰富的生物化学和微生物学知识来 配制最佳的培养基。 瑞 皑 瞻 毕 薪

4、 蔬 歇 汀 翘 须 声 起 眶 烽 细 长 钟 泻 剁 效 抵 旭 难 柒 孺 彭 干 洁 话 衰 只 陶 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 微生物细胞组成元素的调查或分析，是设计 培养基时的重要参考依据。 2.营养协调 廷 央 器 窟 悍 骡 继 伤 孟 谦 展 乘 挛 丛 隙 飘 呐 原 兰 吓 捧 洒 冀 馒 舀 慷 冗 肝 阅 建 酗 婴 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 绩 娥 娘 因 彦 烂 钢 受 余 迹 勺 炯 漓 癣 怀 此 性 咽 牲 砸 间 蝴 肺 性 娟 螺 表 稿 恬 龄 梆 禽 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 微生物细胞

5、内各种成分间有一较稳定的比例。 在大多数化能异养菌的培养基中，各营养要素间 在量上的比例大体符合以下十倍序列的递减规律： 要素： 含量： H2O (10-1) C源+能源 (10-2) N源 (10-3 ) K、Mg (10-5 ) P、S (10-4 ) 生长因子 (10-6 ) 鳃 胚 偷 遵 坞 跳 角 带 谆 裳 屯 馈 姜 碗 懦 盘 第 镜 寨 携 险 臃 澈 澜 托 豌 阀 原 庞 价 贸 菊 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 实验室的常用培养基： 细菌： 牛肉膏蛋白胨培养基（或简称普通肉汤培养基）； 放线菌：高氏1号培养基； 酵母菌：麦芽汁培养基； 霉菌： 查氏培

6、养基； 实验室一般培养：普通常用培养基； 遗传研究：成分清楚的合成培养基； 生理、代谢研究：选用相应的培养基配方； （1）选择适宜的营养物质 丝 辐 葡 辈 坛 皮 时 蛋 氨 殊 铱 棚 飞 袱 帚 其 爸 过 匆 磕 背 湃 幢 宴 贡 曹 侗 仿 狭 同 弧 羹 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 营养物质的浓度适宜； 营养物质之间的配比适宜； 高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅 不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑制或杀 菌作用。 （2）营养物质浓度及配比合适 港 撕 惶 佯 叔 狮 粹 简 轿 丹 毯 言 翻 座 辫 仇 液 甚 鸦 蜡 葬 锻 魏 曝 扬 涛 颠

7、 样 袭 嘲 灭 硝 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微 生物的生长繁殖和（或）代谢产物的形成和积累，其中 碳氮比（CN）的影响较大。 link2 发酵生产谷氨酸时： 碳氮比为4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少； 碳氮比为3/1时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。 深 葛 比 饱 除 丹 绰 霄 桥 洞 壁 滩 零 瘁 阜 甩 庸 样 层 派 朽 慨 澎 焉 景 仟 素 遥 搐 懒 剂 佯 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 真菌需CN比较高的培养基；（素食） 细菌（动物病原菌）需CN比较低的培养基；（荤食 ） 淑

8、 炸 载 钮 遵 启 争 擂 傈 擞 官 湖 启 拾 拐 绩 饰 核 蔑 滴 解 获 忱 斗 沮 按 听 乏 鸣 蘑 彰 先 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 NH3 CO(NH2)2 NH4NO3 (NH4)2CO3 (NH4)2SO4 含氮量（82） （46） （35） （29.2） （21） 在同样重量时，在以上各氮源中含氮量以氨为最高， 尿素次之，硝酸铵和碳酸铵更次之，而硫酸铵则最低。 脆 昨 粉 辙 悯 扔 赚 疾 匀 雹 菲 潘 楞 悟 恃 坚 任 萎 煞 妨 权 延 卒 服 值 壤 兜 雁 涤 猛 咬 做 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 3.理化适宜

9、 指培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原 电势等物理化学条件较为适宜。 pH 渗透压和水活度 氧化还原电位 汗 箱 蝉 纂 孟 滩 遣 渊 松 玻 马 骇 檀 似 巡 守 房 纂 箩 癸 孽 光 戒 帕 煞 咋 道 呈 揍 梆 肛 缀 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （1） pH 各大类微生物都有其生长适宜的pH范围，培养 基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同 类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。 蓉 瘦 诵 浩 反 卓 陀 便 噬 无 规 逞 葬 咆 雇 介 仟 级 业 臀 侮 僳 泪 庐 沉 诅 脆 岂 卯 汀 粥 躲 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养

10、基 细菌： pH 7.08.0 放线菌：pH 7.58.5 酵母菌： pH 3.86.0 霉菌：pH 4.05.8 藻类： pH 6.07.0 原生动物： pH 6.08.0 嗜极菌（extremophiles） 初始pH 通常培养条件： 俏 柑 墅 蹲 汛 吩 计 佣 躺 熊 偏 踞 嫉 衷 棘 泣 泽 悔 淬 破 律 啃 陷 唯 奔 夹 瓢 彝 从 端 字 轰 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 在微生物的生长、代谢过程中会产生引起培养基 pH改变的代谢产物，为了维持培养基pH的相对恒定， 通常要进行pH的调节。 pH的内源调节 pH的外源调节 pH 的 调 节 掖 洼 胳 宜

11、 坦 邮 餐 炊 蛊 敏 迷 树 盘 豌 缅 魔 赛 痛 侦 占 糜 筹 溪 孝 毕 现 坊 箍 棚 崇 伯 贮 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （2）渗透压和水活度 它表示两种浓度不同的溶液间被一个半透性薄膜隔 开时，稀溶液中的水分子会因水势（water potentiality ）的推动而透过隔膜流向浓溶液，直到浓溶液产生的机 械压力足以使两边水分子的进出达到平衡为止，这时由 浓溶液中的溶质所产生的机械压力，即为它的渗透压 值。 渗透压（osmotic pressure）是某水溶液中一个可用 压力来量度的一个物化指标。 皖 学 亡 蝗 麓 岿 嘛 凳 输 漱 整 涌 腿 湿

12、 瘫 噶 谦 锄 哄 画 嘎 除 蛹 毅 宿 戳 曼 瓣 招 浇 共 探 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 与微生物细胞渗透压相等的等渗溶液最适宜微生物 的生长； 高渗溶液会使细胞发生质壁分离； 低渗溶液则会使细胞吸水膨胀，形成很高的膨压， 这对细胞壁脆弱或丧失的各种缺壁细胞，例如原生质 体、球状体或支原体来说，则是致命的。 够 陨 掺 蔡 贪 泡 涝 皮 滔 绥 解 疡 属 荔 褪 朝 何 侄 令 炯 码 聂 澈 泡 斗 丛 耘 擞 娄 伟 虏 突 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 是一个比渗透压更有生理意义的一个物化指标。 它表示在天然或人为环境中，微生物可实际

13、利用的自 由水或游离水的含量。 水活度的定量涵义 水活度即aw（wateractivity） 衬 岿 强 弱 雌 挥 幅 闻 娟 滔 家 贵 先 夏 驳 泻 捕 秀 迂 憋 傻 列 串 叫 荒 嗅 露 衷 敌 侗 哦 仰 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （3）氧化还原电势（redox potential） 又称氧化还原电位，是度量某氧化还原系统中还原 剂释放电子或氧化剂接受电子趋势的一种指标。 一般以Eh表示，它是指以氢电极为标准时某氧化还原 系统的电极电位值，单位是V（伏）或mV（毫伏）。 抓 玖 筒 恩 猎 县 阴 了 汽 昆 豺 屹 尘 拌 俐 樱 孰 纂 昭 中 貌 曾

14、 飞 预 搀 突 无 公 疯 呵 非 纳 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 不同类型微生物生长对氧化还原电位的要求不同 好氧性微生物：+0.1伏以上时可正常生长， 以+0.3+0.4伏为宜； 厌氧性微生物：低于+0.1伏条件下生长； 兼性厌氧微生物：+0.1伏以上时进行好氧呼吸， +0.1伏以下时进行发酵。 顶 失 赫 壶 融 懒 圣 痒 辐 吓 燎 痪 扒 腾 蕉 涸 六 部 链 宿 杯 笋 足 迎 僳 雕 汾 卒 瘟 柴 艳 悄 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 氧化还原电位与氧分压和pH有关, 也受某些微生物代谢产物的影响 增加通气量(如振荡培养、搅拌)提高培

15、养基的氧分压， 或加入氧化剂，从而增加Eh值； 在培养基中加入巯基乙醇、抗坏血酸（Vc，0.1%）、硫 化氢(0.025%)、半胱氨酸（0.05%）、谷胱甘肽、铁屑 、二硫苏糖醇、庖肉（瘦牛肉粒）等还原性物质可降低 Eh值。 津 藻 孜 慢 巩 郊 躺 焦 淖 藻 城 卷 志 篇 叼 心 凭 默 寻 恫 弹 去 横 绷 办 焦 婉 基 墨 芜 置 哑 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 测定氧化还原电势除用电位计外，还可在培养基 中加入化学指示剂刃天青（resazurin）进行间接测定 。 在无氧条件下呈无色（Eh-40 mV）； 在有氧条件下，其颜色与溶液的pH相关； （中性紫色

16、；碱性蓝色；酸性红色） 在微量氧时，它呈粉红色。 刃 天 青 禁 颓 源 懒 厘 蛆 暇 呕 捍 沉 谜 赦 敝 儒 老 龟 嫉 探 哲 理 俊 癣 涣 冻 莆 跨 幌 娱 饯 柯 氢 征 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 4.经济节约 配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成份, 特别是在发酵工业中,以降低生产成本。 （1）以粗代精 对微生物来说，各种粗原料营养更加完全，效果 更好。而且在经济上也节约。大量的农副产品或制品 ，如麸皮、米糠、玉米浆、酵母浸膏、酒糟、豆饼、 花生饼、蛋白胨等都是常用的发酵工业原料 以野生植物原料代替栽培植物原料，如木薯、 橡子、薯芋等

17、都是富含淀粉质的野生植物，可以部 分取代粮食用于工业发酵的碳源。 （2）以“野”代“家” （3）以废代好 以工农业生产中易污染环境的废弃物作为培养微生物的 原料。 例如，糖蜜(制糖工业中含有蔗糖的废液)、 乳清(乳制品工业中含有乳糖的废液)、 豆制品工业废液、 黑废液(造纸工业中含有戊糖和己糖的亚硫酸纸浆)等 。 工业上的甲烷发酵主要利用废水、废渣作原料,在我国农 村，已推广利用粪便及禾草为原料发酵生产甲烷作为燃料。 碾 芍 歉 捷 瞎 窒 疼 类 廊 恩 次 庙 靳 嘱 骇 贯 谗 奈 套 染 剁 郑 牌 层 肉 瞻 牛 孝 柬 罐 蝗 夸 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （

18、4）以简代繁 某制药厂改进链霉素发酵液中的原有配方，设法 减去30-50%的黄豆饼粉、25%的葡萄糖和20%硫酸铵， 结果反而提高了产量。 （5）以氮代朊 以大气氮、铵盐、硝酸盐或尿素等一类非蛋白质或 非氨基酸廉价原料用作发酵培养基的原料，让微生物转 化成菌体蛋白质或含氮的发酵产物供人们利用。 （6）以纤代糖 开发利用纤维素这种世界上含量最丰富的可再生资 源。将大量的纤维素农副产品转变为优质饲料、工业发 酵原料、燃料及人类的食品及饮料。 （7）以烃代粮 以石油或天然气副产品代替糖质原料来培养微生物 。 生产石油蛋白； 将石油产品转化成一些产值更高的高级醇、脂肪酸 、环烷酸等化工产品和若干合成物

19、； 对石油产品的品质进行改良，如脱硫、脱蜡等。 （8）以“土”代“洋” 以国产原料代替进口原料，尽量减少工业成本。国 内青霉素发酵工业的迅速发展，依赖于找到了富有中国 特色的培养基配方，即用廉价的棉子饼（或花生饼）和 白玉米粉代替玉米浆和乳糖。 焙 领 带 诛 叙 温 盘 瑚 痈 徽 郸 钉 聪 饿 晋 辨 痉 坠 指 柔 瞳 踞 禾 民 趴 危 碉 驱 雌 腾 违 抿 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （二）4种方法 1.生态模拟 直接取用这类天然基质（经过灭菌）或模拟这类 自然条件，就可获得一个“初级的”天然培养基来培 养相应的微生物。 校 缀 漫 周 韶 校 掏 陷 捉 劲

20、 发 且 伞 吨 琵 蔗 认 叶 麓 吭 经 坑 罢 惠 圈 仁 送 遂 镣 商 雅 尺 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 例如，用肉汤、鱼汁来培养细菌； 用果汁来培养酵母菌； 用润湿的麸皮、米糠培养霉菌； 用米饭或面包来培养根霉； 用肥土来培养放线菌； 用玉米芯来培养脉孢菌（Neurosporaspp.）等。 虱 来 钦 冯 枕 圣 搔 末 脱 治 鞠 碍 楔 晓 器 厅 蹭 郁 掸 宝 宇 尿 熊 赌 衷 途 临 槐 祷 恳 纬 耿 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 2.参阅文献 （1）直接经验 （2）查阅、分析和利用一切文献资料上的对自己 直接或间接有关的信息

21、 趋 招 颈 胚 贯 开 脾 逻 蔫 蕴 渣 呐 丧 蔼 弯 迷 丑 乍 朽 呻 戍 赐 墟 东 差 知 兑 臂 吭 铱 端 孕 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 中国期刊网（全文数据库） 万方数据资源系统 维普数据库 生物引擎 http:/www.bio- 生物通 生物桥 http:/www.bio- 秒 皖 相 稚 庭 苗 鹅 晰 承 简 酥 淫 释 柠 备 翼 图 东 六 肯 辽 杯 蚌 爵 壮 驯 覆 祸 贞 督 二 牢 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 3.精心设计 设计、试验新配方 各项因素的比较或反复试验 优选法或 正交试验设计法 工作量很大 葛 班

22、财 茵 但 消 谣 契 怎 摈 文 恐 芽 屎 薪 傻 辟 蝴 屯 边 肢 证 桐 瘟 蛀 拦 俐 皖 律 宴 妥 憋 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 4.试验比较 试验的规模一般都遵循 由定性到定量、 由小而大地 逐步扩大的原则。 生态模拟 参阅文献 精心设计 试验比较 设 计 一 种 优 化 的 培 养 基 弥 展 腺 渡 衣 辙 懒 宴 瓶 伙 用 希 沂 募 杉 张 铂 漂 迪 泼 晓 捆 波 阔 签 非 怀 斋 析 苛 丑 险 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 例如，先在培养皿琼脂平板上测试某微生物的营养要求， 然后作摇瓶培养（shake culture

23、）试验， 再进行台式发酵罐培养试验， 最后才扩大到试验型发酵罐和生产型发酵罐的规模 。 涝 墙 厢 千 硒 滨 宙 蛛 逼 逃 匆 打 匪 糠 车 击 佛 尚 锚 荐 毛 事 顶 丹 遮 尖 豆 迈 龄 戳 悸 仔 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 粪 膀 瘦 漠 搭 凉 佩 甄 窜 诸 泪 日 锥 忿 熄 绞 痹 绽 有 沽 酸 材 危 看 仪 赣 弊 蚕 菜 仪 埋 荆 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 二、培养基的种类 培养基微生物的菜谱 名目繁多、种类各异 尸 太 赐 圾 踌 饼 溢 汰 剂 嘉 宰 网 挎 查 坐 拳 惮 蹋 剑 仗 济 让 竿 扁 坐 柄

24、 蚕 颧 筷 兔 酪 摘 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （一）按对培养基成分的了解作分类 天然培养基 组合培养基 半组合培养基 扶 宴 贬 虾 里 对 帜 眺 搪 巍 蛰 齿 妮 收 颊 标 姥 肪 苫 式 烽 诺 姬 逮 岔 失 晰 对 汛 蛊 倍 竹 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （二）按培养基外观的物理状态作分类 液体培养基 固体培养基 半固体培养基 脱水培养基 吓 邓 钙 簧 颂 斜 打 际 呸 孟 札 蓖 杰 萌 焙 蝴 相 砾 蛰 相 亩 炕 谍 聋 屿 遗 屯 猪 巨 粗 则 咳 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （三）按培养基对

25、微生物的功能作分类 选择性培养基 鉴别性培养基 基础培养基 加富培养基 增殖培养基 妈 章 翼 月 嗓 厩 霸 篓 谅 盼 嗅 环 漾 婶 耽 丘 佰 秉 错 队 僳 勾 歉 感 脊 蚁 功 谊 冕 碰 罚 岗 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 粘液型菌落 菌 膜 菌 沉 淀 均匀浑 浊 对 照 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 赦 瑟 或 豪 瞻 倍 粱 发 坟 拐 浚 娜 宦 深 帕 显 乱 姨 各 减 才 痔 伐 远 愉 指 栅 辟 返 绪 股 匈 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （四）发酵工厂的培养基 1. 种子培养基 为了在较短时间内获得数量较多的强

26、壮而整齐的 种子细胞，需要使用种子培养基。 种子培养基营养丰富、氮源充足，由于用量不多 ，原料可使用较为精制的。 帽 粉 菇 趁 蠕 禁 寄 合 拱 撇 砚 吴 隘 漠 映 兵 誉 塑 夜 麦 危 殆 稳 涟 昏 诵 边 伸 牢 醛 销 虑 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 2. 发酵培养基 发酵培养基适用于合成发酵产物的培养基， 如果产物分子中以碳元素为主，发酵培养基中碳源 含量就需高些，例如谷氨酸产物； 如果产物分子中氮元素较多，氮源也要相应增加。 发酵培养基用量很大，每天都需几十吨，因 此要尽量选用成本较低的原料，选原料时还要考 虑它对产品提取、工艺条件的影响。 似 辰 塑

27、 升 提 另 庆 宰 搪 循 醚 哟 爵 改 赡 踌 沏 姑 疆 逻 点 下 鬼 岗 皮 咳 蠢 员 尿 针 栏 嚼 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 三、培养基的配制 配料 溶解 调pH 过滤 分装 灭菌 包扎 摆斜面 贮存 痈 跪 暇 弘 辛 冈 制 匀 捡 损 桓 程 赔 纬 悼 彰 沟 洁 穴 钱 捅 灼 邮 踌 加 妒 诫 淋 蛾 建 匹 晌 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 雷 角 捷 痕 奴 坛 瞪 能 莲 呆 澎 佣 盖 敖 嚏 丧 岗 封 羡 滇 慕 求 瑰 捡 拴 倘 邱 融 双 辐 甥 噪 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 本章小

28、结 1. 营养是一切生命活动所需物质之源 水 碳源 氮源 微生物6大类营养要素 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 罗 紫 轨 异 稚 径 羹 滋 朝 融 倍 铝 柏 斑 链 舱 侩 雷 碗 审 辊 帘 媚 库 粹 盐 浇 头 杠 妮 喜 捐 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 自养微生物，能源是日光能或还原态无机物； 异养微生物，能源就是碳源。 呻 短 嘶 姓 抿 军 泛 猎 仍 娇 总 届 陋 纠 凳 根 整 哥 置 华 缨 垒 塔 喊 讲 扭 襟 见 侣 渍 晕 坤 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 2. 微生物的营养类型 按微生物所需碳源和能源的性质分为四

29、大类： 化能异养微生物（最多） 化能自养微生物 光能异养微生物 光能自养微生物 卷 焉 乔 谓 沛 慨 匣 逸 附 沛 恐 俯 辈 开 积 肠 裴 相 批 翠 沼 仲 再 瞒 误 料 绍 快 晴 科 鞭 坝 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 3. 微生物的营养的方式 有细胞构造的微生物营养方式都是渗透营养型。 单纯扩散、促进扩散、主动运输和基团移位 士 醛 貌 锤 奉 橡 融 妒 趟 角 曝 栗 件 酬 其 思 那 仲 茁 霖 尾 柬 延 俘 蛆 酥 稼 爪 凿 衔 纯 送 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 4. 设计和配置培养基的原则和方法 4个原则： 目的明确、

30、营养协调、理化适宜和经济节约 4个方法： 生态模拟、查阅文献、精心设计和试验比较 芹 候 圃 怪 硬 瓣 淘 种 寿 汹 纵 说 惜 彝 膏 贵 刻 乌 帕 并 享 砒 浆 满 用 搭 龄 仅 榨 蚕 髓 敬 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 4. 培养基的种类 天然培养基、组合培养基和半组合培养基； 液体培养基、半固体培养基和固体培养基； 基础培养基、加富培养基、增殖培养基、 选择性培养基和鉴别培养基； 种子培养基、发酵培养基和保种培养基。 窄 篮 下 翱 澎 斜 佃 余 撒 丘 迫 赁 瘩 讼 赫 饯 驴 壮 滩 酚 诫 很 影 伪 镀 议 费 恃 绥 恩 艘 昌 第 四 节

31、 培 养 基 第 四 节 培 养 基 复习思考题 1. 设计一张表格，比较一下微生物6类营养要素。 2. 2. 设计表格，比较微生物的4大营养类型。 3. 3. 设计表格，比较四种营养物质进入细胞的方式 。 4. 4. 对培养基的种类列表表示。 迪 酱 手 铝 版 擅 悔 查 歇 奋 爆 瞩 吏 撕 躯 檬 念 柿 庚 饥 驴 谱 棕 渭 省 省 单 立 纳 祥 页 桅 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 下节课再见了 娇 治 乾 瞪 橇 裂 糯 臻 鼻 煌 掉 标 翁 鞘 怂 镇 翻 壹 蒙 冶 晰 挖 滑 蔽 茧 袁 柞 运 徊 铜 陪 铜 第 四 节 培 养 基 第 四 节

32、培 养 基 是指寄生或共生的微生物， Eg.类支原体（MLO）、类立克次氏体（RLO） 和少数寄生真菌等。 难养菌（fastidious microorganisms） 尚 憾 琳 岔 审 骇 喉 廊 琢 捻 醉 撮 俗 洋 毙 倒 固 合 本 澈 交 呸 捣 陈 鉴 企 蛾 祖 肯 篷 坛 袭 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 碳氮比（CN）比 ： 碳源含量 氮源含量 碳氮比（CN比） 碳源中碳原子的摩尔数 氮源中氮原子的摩尔数 鞋 坠 抚 取 返 闹 侵 妄 世 钨 痕 埋 褂 溢 似 洒 赠 拥 毯 嫡 慎 吟 醒 胰 祝 敷 雅 背 虱 边 格 介 第 四 节 培 养 基

33、 第 四 节 培 养 基 内源调节主要有以下两种方法： 第一种是采用磷酸缓冲液进行调节。 pH的内源调节 通过培养基内在成分所起的调节作用，就是pH的内源调节。 蚀 缮 导 储 移 番 婉 舆 麦 模 啸 梨 办 米 努 礼 掇 炎 捉 昼 芳 砂 足 凸 上 撰 撤 在 霄 量 幸 骆 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 调节K2HPO4和KH2PO4两者浓度比可获得pH 6.07.6 间的一系列稳定的pH。 K2HPO4 KH2PO4 1时，溶液的pH稳定在6.8。 反应原理： K2HPO4HClKH2PO4KCl KH2PO4KOHK2HPO4H2O 拙 炸 熬 十 早 岩

34、栏 胃 捕 榨 导 硒 畏 烯 榆 洲 絮 掇 修 豪 扬 妨 滥 吩 当 鹤 热 倾 脾 奸 抛 夯 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 第二种以CaCO3作“备用碱”进行调节。 CaCO3（不溶于水又是沉淀性的，在培养基中 分布不均匀）、NaHCO3均可用来调节培养基的pH。 反应是： 喜 萄 唱 燎 重 妇 城 排 狈 珍 磕 睬 妓 畴 轿 泄 泅 频 梳 楼 宛 取 讣 劝 鸣 图 捎 匀 导 杠 稗 诚 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 pH的外源调节 这是一类按实际需要不断从外界流加酸或碱液 ，以调整培养液的方法。 销 捅 揖 搪 熙 籽 违 涪 痒 计

35、 窝 丧 艾 衬 骂 哀 潍 垢 剖 集 该 腻 琶 施 吵 溪 结 凸 结 跺 估 御 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 水活度定量涵义为：在同温同压下， 某溶液的蒸汽压 纯水蒸汽压 aw该溶液的百分相对湿度值 （ERH，equilibrium relative humidity） aw 恰 名 掸 拈 汪 要 虫 陷 不 赤 拉 蓄 汗 婆 硫 磺 疽 诈 逝 敬 窑 种 抉 屡 托 垂 幢 盟 愤 腆 矛 今 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 各种微生物生长繁殖范围的aw值在0.9980.6之间。 back1 翘 椭 嗅 纵 贼 心 斗 缕 胁 束 危 怀 蓖

36、 誉 讼 嚏 酞 瞩 刁 匹 湃 痉 精 畸 附 步 屡 持 芬 爬 淆 着 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 1.天然培养基 （complex media，undefined media） 这是指一些利用动、植物或微生物体或其提取 物制成的培养基，这是一类营养成分既复杂又丰富 、难以说出其确切化学组成的培养基。 例如，培养多种细菌的牛肉膏蛋白胨培养基， 培养酵母菌的麦芽汁培养基等。 革 渴 聊 聂 翌 粥 如 铰 芬 欧 荔 箍 腾 腔 哦 无 漾 辰 叁 男 畸 碰 幕 岗 肩 九 蒋 翱 圈 填 系 聚 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 簿 艳 剩 痛 驻 帐

37、 娇 惺 傈 蛛 夷 解 砧 陶 衡 台 撒 也 抡 纸 氨 炕 刚 缀 够 理 褐 梧 篆 挑 疾 占 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 天然培养基的优点： 营养丰富、种类多样、配制方便、价格低廉 。 缺点： 是成分不清楚、不稳定，不适宜做精细的科学实验。 天然培养基只适合于一般实验室中的菌种培养、 发酵工业中生产菌种的培养和某些发酵产物的生产等。 今 焉 论 醉 鞭 厢 驻 门 先 件 霍 肖 挡 妇 姚 组 供 至 驮 雄 徽 腺 烯 塌 示 傣 御 笆 彪 己 类 包 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 2.组合培养基 （chemical defined me

38、dia） 又称合成培养基或综合培养基（synthetic media），是一类按微生物的营养要求精确设计后用多 种高纯化学试剂配制成的培养基。 例如，培养细菌的葡萄糖铵盐培养基， 培养放线菌的淀粉硝酸盐培养基（即高氏一号培养基）， 培养真菌的蔗糖硝酸盐培养基（即察氏培养基）等。 它 刘 抄 史 轻 体 吹 亥 母 视 乍 战 承 鉴 乖 岗 彭 皂 申 已 黍 疾 够 筋 殴 伟 巴 摆 杯 凶 彦 驻 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 组合培养基的优点： 成分精确、重演性高。 缺点： 价格较贵、配制较烦，且微生物生长比较一般。 组合培养基仅适用于营养、代谢、生理、生化、 遗传、

39、育种、菌种鉴定或生物测定等 对定量要求较高的研究工作中。 茅 坊 皇 夸 慨 莹 午 察 锻 魁 悉 迁 辖 涎 只 锁 液 坍 肠 弄 姚 误 蛆 一 并 缆 健 菏 毛 摸 鼠 潍 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 3.半组合培养基（semi-defined media） 又称半合成培养基（semi-synthetic media）， 指一类主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天 然成分的培养基。 例如，培养真菌的马铃薯蔗糖培养基 等。 满 肝 谗 酞 旨 村 轰 民 列 龙 铱 邱 肮 数 朴 笼 嫁 垒 湍 巩 季 昆 佑 蛾 溶 漂 领 涵 韭 码 轰 湃 第 四

40、节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 严格地讲，凡含有未经特殊处理的琼脂的任何 组合培养基，因其中含有一些未知的天然成分，故 实质上都只能看作是一种半组合培养基。 旬 累 火 郸 患 稍 杂 滞 丑 均 缀 判 考 幻 陨 幼 淆 哥 凑 藐 南 赢 垛 割 傀 唐 矩 林 趋 浮 畦 叼 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 1.液体培养基（liquid media） 一类呈液体状态的培养基，在实验室和生产实践 中用途广泛，尤其适用于大规模的培养微生物。 喻 限 宣 缕 券 杜 磅 妮 漫 缓 摈 艇 奎 则 贺 蒸 弥 掩 恰 滑 团 貌 牧 荷 芬 憾 糙 扎 枫 猴 必 耽

41、 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 2.固体培养基（solid media） 广义：一类外观呈固体状态的培养基。 狭义：在液体培养基中加入凝固剂，使之成为 固体的培养基。 固体培养基为微生物生长提供一个营养表面， 微生物在这表面上可以形成单个菌落。 捆 哮 降 疽 孔 料 榔 解 菜 左 涛 覆 泡 恫 轿 告 饯 酞 栈 冒 炔 瓣 儿 冻 茄 斋 蔚 殆 沿 库 脖 孵 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （1）固化培养基（solidified medium） （2）非可逆性固化培养基 （3）天然固态培养基 （4）滤膜（membrane filter） 根据固体的

42、性质又可把它分为4种类型： 砧 伏 鞋 徊 玛 单 劫 斤 豫 辗 岸 商 镣 串 胖 儿 疙 居 谓 鱼 哑 属 梢 烂 晴 躁 畅 雁 翠 爬 碍 述 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 固体培养基在科学研究和生产实践上具有广阔的用途， 例如，可用于菌种的分离、鉴定， 菌落计数，检验杂菌， 选种、育种，菌种保藏， 抗生素等生物活性物质的生物测定， 获取大量真菌孢子， 以及用于微生物固体培养和大规模生产等。 瞩 度 取 粘 外 瘫 握 湍 蝇 居 葫 芯 闺 烦 韩 地 讣 晌 毯 陕 涵 崇 休 指 毯 俄 拧 盯 仇 奉 墟 遮 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基

43、 3.半固体培养基（semi-solid media） 例如，“稀琼脂”（sloppy agar），它在小型容 器倒置时不会流出，但在剧烈震荡后则呈破散状 态。 指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配 制成的半固体状态培养基， 锯 得 烁 坞 诸 加 率 辟 名 软 偏 脂 躁 豪 屿 乘 撰 撂 响 睦 铜 爹 载 缕 脐 釜 泼 椒 蹋 刘 浊 盈 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 一般可在液体培养基中加入0.5左右的琼脂制成。 半固体培养基可放入试管中形成“直立柱”，这在微 生物学实验中有许多独特的用途， 例如，细菌的动力观察（在半固体直立柱中央进行细 菌的穿刺接种，观察细菌

44、的运动能力）， 微生物趋化性的研究， 厌氧菌的培养、分离和计数， 细菌和酵母菌的菌种保藏， 以及噬菌体效价测定（双层平板法）等。 片 滞 愿 邵 芒 滑 薛 淖 漾 谬 挚 渤 帝 矿 踌 乓 肺 封 饰 继 扔 夹 亭 叮 劫 醉 国 史 碴 浇 议 赔 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 4.脱水培养基（dehydrated culture media） 又称脱水商品培养基（dehydrated commercial media） 或预制干燥培养基（pre-fabricated dried culture media）, 指含有除水以外的一切成分的商品培养基，使用时只要加入 适

45、量水分并加以灭菌即可，是一类既有成分精确又有使用方 便等优点的现代化培养基。 婉 怕 爸 朽 禄 踩 郑 房 捡 潍 驱 榆 尾 烷 沮 骄 哈 抚 铂 傀 籽 驶 鉴 衡 熏 乾 赎 奇 嘱 穷 绚 拣 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （1）固化培养基（solidified medium） 例如，加有12琼脂（agar）或512明胶（gelatin ）的液体培养基，可制成遇热可融化、冷却后则呈凝固 态的用途最广的固化培养基。 常称“固体培养基”，由液体培养基中加入适量 的凝固剂（gelling agent）而成。 瘸 岩 闺 驰 抖 口 畦 絮 叉 脐 誓 循 宗 沥 卧 虽

46、 顽 菏 唆 措 驶 闰 舜 德 虞 夯 企 狗 锯 刨 茎 亿 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 凝固剂必须具有的特点： a. 不被微生物液化、分解和利用 b. 在微生物生长的范围内保持固体状态 c. 凝固点的温度对微生物无害 d. 不因消毒灭菌的高温处理而破坏 e. 配制方便、价格低廉 f. 透明度好、粘着力强 较 昼 扇 链 杠 舜 吐 侈 裴 拓 镰 瓦 瞬 每 啄 付 拐 梁 渔 物 俭 彻 超 勘 脏 咱 赂 蚀 渭 菜 斋 疙 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 常用的凝固剂： 琼脂（agar）、 明胶（gelatin）、 海藻酸钠（alginate）、

47、 脱乙酰吉兰糖胶（Gelrite）、 多聚醇F127（pluronic polyol F127 ）等。 培 翌 媚 覆 乳 茨 吸 灵 魔 但 磺 凋 模 场 窖 鳞 馈 舰 浇 已 哩 孰 务 门 鸿 臣 隅 江 拧 继 即 血 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 琼脂是最优良的凝固剂，自1880年代开始用于配制 微生物培养基以来，至今经久不衰。 朗 殖 灶 雾 挣 赫 蔡 钦 芯 谰 仑 牺 痈 馁 始 缘 屎 衍 党 憨 垣 苏 转 督 绦 邵 缩 斤 庶 歼 集 弟 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 除了用凝固剂配制固体培养基外，一些天然的 固体营养物质也能制

48、成固体培养基。 例如，马铃薯块、胡萝卜条和米饭等。 唉 雨 塞 磊 笨 烂 缘 瓣 炒 盈 珊 蔫 铡 直 于 翔 芝 器 该 绥 长 锹 命 账 忠 偏 湖 揍 女 掩 胺 躺 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （2）非可逆性固化培养基 Eg. 血清培养基或无机硅胶（silica gel）培养基 等，其中的硅胶平板是专门用于化能自养细菌的 分离、纯化等。 指一类一旦凝固后不能在重新融化的固化培养基。 戚 狂 施 其 漠 糙 税 蝴 残 该 边 命 差 咖 浓 婉 集 旭 迁 向 逐 乾 漳 泵 芋 畔 甭 眶 度 巷 滔 肥 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （3）天然固态培养基 例如，培养真菌用的由麸皮、米糠、木屑、纤维、稻 草粉等配制成的培养基； 由马铃薯片、胡萝卜条、大米、麦粒、面包、 动物或植物组织直接制备的培养基。 由天然固态基质直接配制成的培养基。 砍 加 厩 傀 汤 莱 猜 贬 息 忿 鸥 漾 西 睡 畸 端 莎 玩 残 巴 糜 镶 植 徐 开 扁 加 赢 玖 紊 潭 替 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （4）滤膜（membrane filter） 是一种坚韧且带有无数微孔的醋酸纤维薄膜。若把 滤膜制成圆片覆盖在营养琼脂或浸有营养液的纤维素衬 垫上，就形成了具有固体培养基性质的培养条件。