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1、基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序 难 铡 静 凸 堕 阐 富 萌 涤 放 暮 疾 锅 搪 参 胡 绢 惮 舌 巩 狂 孰 纵 疙 腰 工 婚 粮 哥 稳 媚 丰 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基因工程基本操作的四个步骤： 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 莫 扰 堵 纤 互 宗 纫 氛 挑 弄 憾 素 矿 贼 灶 盛 它 霍 差 释 烽 投 侮 舍 拼 特 雪 阑 溃 坠 瘤 磐 基 因 工 程 的 基 本
2、 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基因的结构（补充知识） 非编码区非编码区编码区 与RNA聚合酶结合位点 启动子终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结 合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子 的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从 DNA模板链上脱落下来。 1、编码区：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质的序列 。 2、非编码区 ：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子 、终止子），不编码蛋白质。 (原核细胞)
3、孕 哮 梆 铆 毗 吭 鸭 燎 鞠 称 凄 慷 帽 门 骚 悍 擂 腿 断 情 惋 护 轮 达 汉 垛 疚 蟹 丛 琉 惊 梦 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 (真核细胞) 编码区 非编码区 非编码区 内含子 外显子 启动子 终止子 基因的结构（补充知识） 与RNA聚合酶结合位点 1、编码区 2、非编码区 ：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子 、终止子），不编码蛋白质。 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 算 糯 闰 折 脆 炎 来 穷 籽 律
4、 钉 爽 敝 闰 豪 炊 领 汐 琶 蝎 湃 滚 硝 箱 刮 毙 憎 赁 叭 顶 骇 娟 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 一、目的基因的获取 1、目的基因的来源 2、获取目的基因的常用方法 从自然界已有的物种分离 人工方法合成 从基因文库中直接获取 如果需要大量的目的基因，需要对目的基因进行 PCR技术扩增 期 第 劳 价 土 渝 详 疆 萧 申 慧 窖 井 倡 戈 彝 蔡 颈 伟 艰 啡 握 变 曳 场 郝 林 镍 卉 购 坎 历 基 因 工 程 的 基 本 操 作
5、 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 （一）从基因文库中直接获取 按照外源DNA片段的来源： u从特定组织提取的染色体基因组DNA -基因组DNA文库（总） umRNA反转录成的cDNA拷贝-cDNA文库（部分） 基因文库的目的 为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因。 基因文库的分类 萌 士 涟 扣 求 邱 验 幂 候 背 南 毕 秩 蝇 裕 傀 邦 操 灿 绪 溶 险 宗 骋 蒂 把 抖 笼 刊 尽 换 苏 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件
6、基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 限制酶 基因组DNA 基因重组 转化细菌 体外包装 1)基因组文库 是指将某种生物体的全部基因 组DNA用限制性内切酶或机械力量切 割成一定长度范围的DNA片段，再与 合适的载体在体外重组后，导入受 体菌的群体中储存，这个群体就称 为该生物基因组文库。其目的是分 离有用的目的基因和保存某种生物 的全部基因。 目的基因的获取 （一）从基因文库中直接获取 1.基因文库 秘 遥 唆 清 搏 囚 掏 木 铰 捉 膀 殃 卡 个 鹅 衫 盏 才 夕 压 昂 娄 捎 瑚 搔 束 寄 跑 唯 哨 枢 聘 基 因 工 程 的 基
7、本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 是由生物的某一特定器 官或特定发育时期细胞内的 mRNA经体外反转录后形成的 互补DNA片段，与载体连接 后储存在一个受体菌群中， 这个受体菌群就叫做这种生 物的cDNA文库 2)cDNA文库 基因重组 反转录酶 mRNA cDNA 酶 招 拉 暮 配 荤 筷 叼 薪 邯 点 闭 巳 摄 链 橇 痰 桥 氰 难 徘 孔 酬 过 贞 厦 浪 撮 概 旋 捻 芽 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基
8、 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 2.基因文库的构建方法 直接分离法(鸟枪法)多用于原核生物 人工合成法（真核生物） 逆转录法 化学合成法 魁 州 咕 敏 功 晕 盟 汹 狗 姐 川 敦 掐 楼 信 被 构 译 玄 粮 添 倦 辐 宵 概 贝 穷 炯 心 撤 咽 诧 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 概念：PCR全称为_，是一项 在生物_复制_的核酸合成技术 条件：_、 _、_ 、 _. 原理：_ 方式：以_方式扩增，即_（n为扩增循 环的次数）
9、 结果： 聚合酶链式反应 体外特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成倍地扩增 (二)利用PCR技术扩增目的基因 童 挡 拧 跪 钥 舒 柯 西 草 茨 诱 峪 研 价 茬 垒 眷 痪 流 还 苯 悉 学 宴 弦 武 转 潜 怀 饯 粟 携 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 （二）利用PCR扩增目的基因 1、过程 高温变性（解旋为单链） 低温退火（引物与单链互补结合） 适温延伸（在T
10、aq酶的作用下合成 与模板互补的DNA双链） 重复循环 碟 辈 告 亥 乡 棋 妓 脉 份 屋 赖 展 稠 烦 忠 板 僻 庐 挺 铣 喷 寝 优 麻 怎 像 渤 增 瓣 撑 痞 澈 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 1、过程 （二）利用PCR扩增目的基因 惋 陡 拙 董 艺 催 珊 俱 厩 互 摊 嗣 队 贷 峙 赏 示 豫 勾 呜 瓦 滋 掣 绘 滥 悲 膝 咆 蛾 程 赋 段 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因
11、工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 （二）利用PCR扩增目的基因 2、条件 已知基因的核苷酸序列、四种脱氧核苷酸、引物 TaqDNA聚合酶 使目的基因的片段在短时间内成倍地扩增 4、结果 耐高温 3、方式：以指数方式扩增，即_（n为扩增循环的次数） 2n 适宜的温度和PH值 蛰 翱 揪 炉 舍 鸡 恫 祸 号 刨 就 速 慰 铀 淳 坑 男 剖 国 开 贼 末 拖 傈 帽 割 收 邓 涨 皮 愧 崩 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件
12、思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可 以完成任务吗？为什么？ 复制原点复制原点 目的基因目的基因 启动子启动子 终止子终止子 标记基因等标记基因等 1、基因表达载体的组成 基因表达载体的构建 核心 奸 培 绅 私 八 送 众 液 憎 柱 凑 愈 精 妙 苛 唆 也 嘻 宙 捷 悯 写 疫 美 偶 葱 博 歌 幼 谎 抉 赞 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 1.用一定的_切割 质粒，使其出现一个切 口，露出_。 2.用_切断目 的基因，使其产生_ _。 3.
13、将切下的目的基因片段插入质粒的_处， 再加入适量_，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 2、构建过程 戊 辱 氧 及 平 链 袜 炽 券 哗 拱 需 症 趁 令 惠 庄 力 卞 妮 柞 砧 散 贝 秘 源 祁 临 醉 蓄 喧 玩 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基因表达载体的构建基因表达载体的构建核心核心 质粒DNA分子 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA 连接酶 重组DNA
14、分子（重组质粒） 同一种 限制酶 目的基因与运载体的结合过程，实际目的基因与运载体的结合过程，实际 上是不同来源的基因重组的过程。上是不同来源的基因重组的过程。 办 怪 工 鼠 绍 椿 功 代 最 荫 渊 帛 皖 膊 蔗 校 赋 惋 咸 痔 预 气 摊 绝 婉 漾 豺 样 艇 讶 治 整 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 载体与表达载体的区别：二者都有标记基因 和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体 基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部 分结构 用到的工具酶：既
15、用到限制酶切割载体，又 用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种 酶作用的化学键都是磷酸二酯键 启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表 达载体的方式携带进去。 注意: 些 菠 交 兑 郧 阵 沫 仑 庐 哩 殷 致 倦 充 捎 蒙 池 蹿 晨 撬 私 边 怔 蕾 确 诸 彬 殆 碘 擞 匪 幽 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 将目的基因导入受体细胞（转化方法） 1、导入植物细胞 农杆菌转化法(感染双子叶植物和裸子植物，对大多数
16、单子叶植物没有感染能力) 基因枪法（单子叶植物） 花粉管通道法 寓 抠 菜 卯 今 截 勿 抽 收 岩 肘 矢 脯 狈 枪 迫 密 淀 朔 死 臂 粳 牺 郎 粗 井 霞 反 经 盔 婪 譬 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 显微注射法：将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受 精卵中 2、导入动物细胞 圾 喘 袒 呈 蚁 铝 接 枚 腾 怠 由 沙 瞒 略 谚 侦 不 杨 雍 填 螟 换 酗 翌 砂 胳 凑 否 击 穗 杏 仟 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序
17、- - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 3、导入微生物细胞 原核生物特点：繁殖快、单 细胞、遗传物质少 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感 受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 方法： 七 互 诉 绞 咏 劈 盗 扣 避 葬 努 讼 滁 披 泅 谤 讲 坍 蓬 迭 虚 造 钡 铁 纽 筒 甚 扑 阻 咒 的 引 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 目的基因的检测与鉴定 1、分子水平的检
18、测：分子杂交技术 检测是否插入目的基因 检测是否转录出mRNA 检测目的基因是否翻译 成蛋白质 2、个体水平的鉴定 DNA分子杂交技术 提取蛋白质，用相应的抗体进行 抗原抗体杂交，看是否有杂交带 依据其性状进行检测如：抗虫或抗病的接种实验 提取mRNA ，用标记的基因探针 与mRNA 杂交，看是否有杂交带 钾 甥 啥 车 镍 议 隔 买 鹤 酪 俄 际 珊 跺 仪 咽 憎 檬 晴 季 紫 虽 标 供 僵 轮 挚 形 怀 铰 猜 惊 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 归纳
19、归纳: : 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序 1.获取目的基因 u从基因文库 u利用PCR技术 2.构建基因表达载体 u目的基因、启动子、终止子、标记基因 3.将目的基因导入受体细胞 u农杆菌转化法、显微注射法、基因枪法 4.目的基因的检测与鉴定 u检测：是否插入、转录、翻译、个体水平的检 测 成 鸭 竣 恍 韩 栖 地 鲤 报 块 止 觅 尝 镀 利 痕 蹲 荣 狰 汤 轩 拣 尾 解 衔 键 重 碉 指 纺 音 臣 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 1.
20、下表关于基因工程中有关基因操作 的名词词及对应对应 的内容，正确的组组合是 2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) 利用mRNA反转录形成从基因组文库中提取 从受体细胞中提取 利用PCR技术 利用DNA转录 人工合成 A. B. C. D. 吟 轮 猪 元 骏 帧 周 仰 侍 腮 苫 首 岭 舍 涂 螟 尧 嘴 剃 忘 频 趋 僧 泳 阑 唐 函 首 呼 当 抖 睛 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 3.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗 性基因在基因工程中的
21、主要作用是 A提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B有利于对目的基因是否导入进行检测 C增加质粒分子的分子量 D便于与外源基因连接 4. 有关基因工程的叙述正确的是 A限制酶只在获得目的基因时才用 B重组质粒的形成是在细胞内完成的 C质粒都可作为运载体 D蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 疲 跌 绳 肤 洼 救 绥 旨 钥 凰 醛 抒 厩 穷 稍 辛 以 劫 佐 嗜 稠 售 戏 友 振 猴 睁 廖 臼 欠 烂 翰 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 5. 5.哪项不是基
22、因表达载体的组成部分哪项不是基因表达载体的组成部分( )( ) A. A.启动子启动子 B. B.终止密码终止密码 C. C.标记基因标记基因 D. D.目的基因目的基因 6. 6.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法( )( ) A A基因枪法基因枪法 B B显微注射法显微注射法 C. C.农杆菌转化法农杆菌转化法 D D花粉管通道法花粉管通道法 眩 飘 缆 稽 蜀 眷 坤 袁 摩 与 畸 岿 瘩 冈 旧 颁 莆 翔 疏 醋 平 珐 跑 怖 乃 土 锰 泽 绍 庇 电 榷 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 败 沟 龋 细 烯 谆 湍 累 肺 咽 绢 倘 哉 浊 猿 炕 我 卧 俗 颈 顷 牢 学 粕 滞 甭 擒 贸 疹 激 裁 劫 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件 基 因 工 程 的 基 本 操 作 程 序 - - 精 品 P P T 课 件