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1、静丙生产1、 于1949年oncley发表了cohn9法。经典的分离免疫球蛋白的方法。2、 关于离子强度、pH、乙醇浓度对igG纯度的影响：在离子强度0.01-0.05范围内，高离子强度时对igG纯度好但产量低；在pH5.0-5,2范围内，高pH时igG纯度好，但产量低；即使在17%乙醇时，pH相差0.2个单位，也可能导致igG纯度差异在20%（74-95%）；在13-17%乙醇浓度时，较高乙醇浓度，igG纯度较好，但产量较低。基于上述结果，最适合的分离免疫球蛋白的条件是17%乙醇，pH5.1，离子强度0.01。应注意，免疫球蛋白的溶解性不仅取决于离子浓度，更主要的是取决于混合物中的离子类型。
2、Oncley发现，在相等的离子浓度时，醋酸钠比氯化钠更显著的溶解免疫球蛋白。同时也发现：单独的醋酸钠不能有效的去除所有的igM、igA和2-M，而单独的氯化钠也不可能定量去除PKA，及时醋酸钠和氯化钠两种联合使用，在最终免疫球蛋白内仍有微量的igA。最终结论是：在去除组分杂质时，首先单独改变乙醇浓度是不适宜的，其次变化是离子强度，必须是离子强度高于0.01，才能有效去除溶纤维蛋白原，PKA及其他杂质。因此显示出：选择性的溶解免疫球蛋白不仅取决于离子浓度，而且更重要的是混合物中存在的离子类型。3、 制备静丙的发展历程 静丙是从大量的混合血浆中分离、纯化的，含有广泛的特异性免疫球蛋白抗体（即多克隆
3、抗体），大约有107种抗体，利用重组技术难以制备。20世纪40年代，工业化分离免疫球蛋白低温乙醇工艺问世。最初分离的免疫球蛋白，因产生的严重副反应而不能静脉注射，到70年代才清楚这种副反应主要与制品中存在着与igG聚合体相关的抗体活性。上世纪80年代，先后形成了静丙的几代产品。第一代产品：酶联法。第二代产品：化学修饰法。第三代产品：天然完整的静丙，pH4并用微量胃蛋白酶及pH4.25。因此，为制备新一代静丙其发展趋势要从以下几个方面考虑。a、生产工艺：低温乙醇法分离的组分2+3溶解液通过辛酸、PEG或其他沉淀法，不经乙醇法去除非igG成分（组分3）而避免igG随组分3共沉，避免igG损失。而进
4、一步结合离子交换层析法去除igA等，经多步深层过滤、纳米膜过滤及用甘氨酸透析与浓缩，增强了终品静丙稳定性，有助于长期保存。b、终品浓度：10%。C、稳定性与赋形剂：甘氨酸或脯氨酸或其他疏水性氨基酸，调溶液的等渗度要更接近生理范围280-296mOsmol/kg。d、剂型与规格：1g/10ml，2.5g/25ml，5g/50ml，20g/200ml，3g/300ml，4g/400ml.e、病毒安全性：两种或两种以上不同机制的病毒去除或病毒灭活工艺，其中第二或第三种方法都经纳米膜过滤，去除了非脂包膜病毒。f、PH：国外大品牌静丙Privigeen pH4.8；Fleboganma pH5-6；Ga
5、mmagard pH4.6-5.1g、致血栓性：新一代静丙在生产过程中的一些步骤和终品中，加入一项凝血酶生成试验（TGA）来做为一个标准，监控静丙中FXIa的含量，有助于降低致血性。新10%静丙生产工艺将低温乙醇与下游的igG纯化工艺（阳离子和阴离子交换层析）结合起来。众所周知，从组分2+3中去除组分3时，大约有25%igG因共沉而丢失。新的生产工艺用深层过滤法代替了组分3沉淀。类似组分2中间品igG收率大约75%，不纯物主要为igA和igM。使用组分2+3为起始原料，至最后装瓶，igG回收率大约65%，至少比cohn方法多25%。三个方面冲击免疫球蛋白分子的稳定性：聚合、裂解、氧化。其原因是
6、： 最终静丙的浓度、PH、温度、光暴露和液体搅动，包括混合过程、储存、运输，致静丙聚合和裂解。氧化使终品静丙肉眼可见的颜色变化。一些糖如山梨醇、麦芽糖和蔗糖，加入是防止聚合体形成，pH也影响到稳定性，在pH4.0-4.5igG分子有最大的单体。如何实施GMP：从提高人员素质入手，强化培训，做到人才优化；从厂房设计或厂房改造入手，做到环境优化；从设备选型和技术改造入手，做到技术优化；从生产质量管理文件入手，做到管理优化；从质量管理入手，做到产品优化。实施GMP的要点：树立良好的职业道德观，培养和建立GMP意识、法规意识、质量意识、规范操作意识、质量保证意识、和持续改进意识。养成良好的习惯：职业习
7、惯、卫生习惯、学习习惯。实施GMP的关键：1、人员素质： 人产品质量过程质量工作质量人员素质，回到人，形成闭环。2、物料管理预防污染混淆和差错；确保储存条件，保证产品质量；防止不合格物料投入使用；控制物料和成品的：追溯性、数量、状态、效期；物料管理的对象：物料、产品。3、生产管理参数控制：蛋白含量、离子强度、pH、温度、乙醇浓度以及病毒灭活条件等。物料平衡计算。制药用水管理：水质持续监测、监测数据统计分析。空调系统管理：控制温度、湿度、压差、定期监测洁净度，选择适宜有效的消毒剂。无菌保证：设备在线清洗、在线灭菌，工艺过程密闭化、除菌过滤、无菌灌装及培养基模拟无菌灌装。清场管理：操作完毕后的清场
8、，人员的交接班等，防止污染、混淆、差错事故。原料血浆病毒安全性血液病毒种类甲型肝炎病毒HAV乙型肝炎病毒HBV丙型肝炎病毒HCV丁型肝炎病毒HDV艾滋病病毒HIV戊型肝炎病毒HEV人类细小病毒HPV巨细胞病毒CMV其他可通过血液传播的病毒朊病毒CJDV血液制品与病毒传播病毒名称大小nm病毒包膜核酸传播介质全血血液制品乙型肝炎病毒HBV42+DNA+丙型肝炎病毒HCV30-60+RNA+艾滋病病毒HIV100+RNA+人嗜T淋巴细胞病毒HTLV90-140+RNA+巨细胞病毒CMV200+DNA+-EB病毒EBV150-180+DNA+-甲型肝炎病毒HAV27-32-RNA+-丁型肝炎病毒HDV28-39+RNA+人类细小病毒HPV18-26-DNA+克-雅氏病CJD蛋白质源性传染因子（阮蛋白-Prion Protein）埃博拉病毒、西尼罗病毒、SARS病毒、发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒、禽流感病毒、戊型肝炎病毒-理论上凡是经血液传播的病毒也是可以经血液制品传播的。戊型肝炎病毒HEV生物学戊型肝炎病毒属；形态学：无包膜、正二十面体，直径27-34nm的小RNA病毒；基因组：正单链RNA，核苷酸全长约7.2kb，1-4个基因型。戊型肝炎病毒HEV特点：耐酸、耐弱碱；56、1小时仍有感染性；4、22肝细胞悬液可稳定保存2个月；在血浆采集、运输过程中，仍可保持感染力。3发现运用+