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1、食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验,1,行业精制,金黄色葡萄球菌的生物学特性 金黄色葡萄球菌的抗原构造及分型简介 金黄色葡萄球菌的致病性 金黄色葡萄球菌的流行病学 金黄色葡萄球菌的检验方法 金黄色葡萄球菌肠毒素的检测 金黄色葡萄球菌的快速检测方法 金黄色葡萄球菌污染的控制,2,行业精制,一、金黄色葡萄球菌的生物学特性,1、形态与染色：(staphylococcus aureus) 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm左右，显微镜下排列成葡萄串状。 革兰氏染色阳性。 附： 金黄色葡萄球菌的显微照片 金黄色葡萄球菌的染色照片 金黄色葡萄球菌的
2、扫描电镜照片 金黄色葡萄球菌的透射电镜照片,3,行业精制,金黄色葡萄球菌的显微照片 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm左右，显微镜下排列成葡萄串状。,4,行业精制,金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。 革兰氏染色阳性。,5,行业精制,金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片 Staphylococcus aureus Enhanced sem w: 7.9 micron,6,行业精制,金黄色葡萄球菌的透射电镜照片 Tem x12000 digitized Staphylococcus aureus,7,行业精制,2、培养特性： 金黄色葡萄球菌营养要求不高，
3、在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37，最适生长pH 7.4。 平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，边缘整齐、表面光滑、湿润，直径一般为12 mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.515%NaCl肉汤中生长。,8,行业精制,9,行业精制,3、生化特性： 可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。 许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。,10,行业精制,金黄色葡萄球菌的抗原构造和分型 对分型进行简单的了解。
4、 、血清学分型： 金黄色葡萄球菌水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 蛋白抗原主要为葡萄球菌A蛋白（SPA)，是一种表面抗原，90%以上金黄色葡萄球菌有此抗原，无特异性。 多糖抗原为半抗原，有型特异性。 、噬菌体分型。 、根据肠毒素分型。 、根据血浆凝固酶分型。,11,行业精制,金黄色葡萄球菌的致病性 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓 感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血
5、和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F六种血清型。,12,行业精制,当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经过810小时即可产生相当数量的肠毒素，肠毒素可耐受100煮沸30分
6、钟而不被破坏。人摄食该菌污染的食物23小时后可引起中毒症状，它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。 此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。,13,行业精制,金黄色葡萄球菌的流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。,14,行业精制,金黄色葡萄球菌的流行病学 近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。,15,行业精制,金黄色葡萄球菌的流行病学
7、特点 季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。 上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。,16,行业精制,金黄色葡萄球菌的流行病学 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品： 食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。,17,行业精制,*金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒
8、素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件： 存放温度，在37内，温度越高，产毒时间越短； 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素； 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。,18,行业精制,金黄色葡萄球菌的检验 1、样品制备 按无菌操作取检样25 g（mL），加入225 mL灭菌生理盐水，固体样品研磨或置均质器中制成1:10样品混悬液。 供计数检验时，可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。,19,行业精制,金黄色葡萄球菌的检验 2、增菌及分离培养 吸取5 mL混悬液，接种于7.
9、5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50 mL培养基内，361培养24 h，转种血平板和Baird-Parker平板， 361培养24 h，挑取血平板上金黄色（有时为白色）菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。,20,行业精制,血平板上金黄色葡萄球菌 菌落形态 金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血平板上呈金黄色，有时也为白色，大而突出、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。,21,行业精制,22,行业精制,金黄色葡萄球菌 在BP平板上的菌落形态 在Baird-Parker琼脂平板上菌落呈圆形，表面光滑、凸起、湿 润，直径23 mm。灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明圈 （沉淀
10、），其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株，除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同。从长期贮存的冷冻或脱 水食品中分离的菌落，其黑色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙，质地较干燥。,23,行业精制,24,行业精制,金黄色葡萄球菌 在甘露醇盐平板上的菌落 Staphylococcus aureus on mannitol salts agar,25,行业精制,3、血浆凝固酶试验： 吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5 mL，振荡摇匀， 置 361温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察
11、6 h，如呈现凝固,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。,26,行业精制,27,行业精制,金黄色葡萄球菌肠毒素的检测 一、动物学试验主要用幼猫和猴。 二、血清学试验肠毒素作为抗原，可以和特异性抗体发生结合性反应，产生可见沉淀。 用血清学反应检验金黄色葡萄球菌肠毒素，方法主要有： 免疫琼脂扩散法 反向间接血凝试验 免疫荧光法 酶联免疫吸附法,28,行业精制,金黄色葡萄球菌快速检测方法 目前，随着研究的深入，一些快速和采用现代技术的检测方法不断出现，这些新的快速方法，一般都缩短了传统检测方法的时间，能够较快地得到检测结果，并且操作相对简
12、单。 比如：法国梅里埃公司生产的RPF培养基、API检测系统等。梅里埃公司生产的mini VIDAS利用荧光免疫的方法检测葡萄球菌 肠毒素，在仪器上45 min可以得到结果。,29,行业精制,法国梅里埃公司生产的RPF培养基,凝固酶阳性葡萄球菌 : 菌落周围形成沉淀圈 (例) 金黄色葡萄球菌,-,+,将兔血浆包括在培养基中作为直接确认菌落的手段,30,行业精制,金黄色葡萄球菌污染的控制 防止食品污染 防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。,31,行业精制,金黄色葡萄球菌污染的控制 防止食品污染 防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要迅速冷至-10以下，以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料，注意低温保存。 对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。,32,行业精制,防止金黄色葡萄球菌肠毒素生成 应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成； 在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。,33,行业精制,谢谢！,34,行业精制,