《蛋白纯化缓冲液配制.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蛋白纯化缓冲液配制.pdf（3页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、0.1M KPB母液 (pH7.4) 定容至1L 配制 1M K2HPO4 1M KH2PO4 80.2 ml19.8 ml 蛋白纯化缓冲液配制 分子量 K2HPO4.3H2OK2HPO4KH2PO4NaClKCl(NH4)2SO4NaOH 228.22174.2136.0958.4474.55132.1440 KPB 1M K2HPO4.3H2O 1M KH2PO4 228.22g 定容 1L 136.1g 定容 1L 离子层析 0.45um膜 2ml/min 每天 KPB 0.01M 2L 流动相 0.5M KCl + 0.01MKPB 1L 1*0.5*74.55= 37.28g KCl
2、 2M NaCl 1L 1*2*58.44 = 116.88g NaCl 1M NaOH 1L 1*1*40 = 40g NaOH Water 2L 20%Eth 1L 疏水层析 0.45um膜 ml/min 每天 1M 硫铵 + 0.01MKPB 1L 流动相 1*1*132.14 = 132.1g 硫铵 KPB 0.01M HPLC流动相 纯水定容0.6L 100倍 KPB4 ml 1L 1M硫铵(可重用) 0.5L（处理样品） 136.09/2= 68g 硫铵 0.5M NaOH 1L 1*0.5*40 = 20g NaOH Water 1L 20%Eth 1L 凝胶过滤层析 0.22u
3、m膜 (分子筛 dex75 3-70kDdex200 10- 600kD) 0.5ml/min 0.2M KCl + 0.01MKPB 1L 流动相 1*0.2*74.55= 14.91g KCl 可用来脱盐 0.5M NaOH 1L 1*0.5*40 = 20g NaOH Water 1L 20%Eth 1L HPLC缓冲液配制 100倍1M KPB pH2.7 0.5L 母 液 KH2PO434.025g H3PO417.1ml 200mM(20.8g/L) 烟腈母液 10ml 0.208g分子 量 色谱纯乙腈200 ml104 440超纯水+ 50ul 200mM的母液 , 反应20mi
4、n +500ul乙腈终止 离心 10mM尼克酰胺标样 10ml 0.0122g分子量122.12 Tris系列缓冲液 *由于凝胶纯化后得过离子柱二次重纯，所以凝胶柱里面不加盐离子 第一次纯化凝胶柱 20mM Tris-HCl pH7.5 Tris 121.142.42 约1ml浓HCl 到pH7.5 定容1L 第二次纯化离子柱Q柱 20mM Tris-HCl pH8.8 Tris 121.142.42 约0.5ml浓HCl 到pH7.5 定容1L 20mM Tris-HCl 1MKCl pH8.8 Tris 121.142.42 1M KCl74.55 约0.5ml浓HCl 到pH7.5 定容1L