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1、HPLC法测定大黄提取物中5种蒽醌的含量【摘要】目的：采取HPLC 法测量评定中药材大黄中5 种蒽醌（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的含量。方法：采用依利特ODS2 C18、柱(200mmx4.6mm,5μm)，流动相为无水甲醇- 浓度0.1% 磷酸(75:25,V/V），流速为1ml/min，检测波长为255nm，柱温26。结果：芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸的回归方程如下：Y=1.97X-0.35， 相关系数R=0.99993;Y=0.98X-0.21， 相关系数R=0.99996;Y=1.26X-0.16， 相关系数R=0.99994;Y= 2.3
2、5X +0.17，相关系数R=0.99992;Y=1.93X+0.08，相关系数R=0.99992;5 种蒽醌的回收率如下：99.49%,97.37%,99.21%,98.84% 和98.74%。结论：用HPLC 法测定大黄提取物中5 种蒽醌的含量不仅简单快捷，而且具有准确性高、重现性好的特点，可以用于推广。【关键词】HPLC 法；芦荟大黄素；大黄素甲醚；大黄酚；大黄素；大黄酸目前对大黄的研究已较为深入，然而以HPLC 法对大黄蒽醌含量的测定仍然欠缺研究，因此开展本研究，希望提供参考。1 研究材料大黄样品采用自成都市大黄中药材培植基地所产的掌叶大黄。实验仪器为Ultimate3000 高效液相
3、色谱仪、赛多利斯BT125D 电子天平及KQ-250D 型超声波清洗器。主要试剂方面，芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸5 中对照品及磷酸、分析甲醇、色谱甲醇等均来自市场购买，去离子水由研究者自制。2 研究方法2.1 色谱条件255nm 的检测波长；1ml/min 的流速；柱温26；色谱柱采用依利特ODS2C18、柱(200 mm x4.6 mm,5μm)。2.2 自制溶液对照品取适量大黄对照品，应用无水甲醇，分别配置5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的对照品溶液，采用浓度20、10、20、20、和20μg/ml 。2.3 自制供试品精确称
4、量取用大黄中药材0.500g，放置在25ml 的容量瓶内，分别添加无水甲醇20ml 和超声波提取35min，待溶液冷却至接近室内温度，加入无水甲醇，定容到刻度，使震荡溶解，用0.20μm 滤膜过滤。2.4 方法学考察2.4.1 线性关系考察依据前文所述色谱条件，取用对照品溶液，精密吸取2、5、10、20、40μL，并分别进行进样测定，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行回归分析，得到5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的线性回归方程。2.4.2 精密度考察依据前文所述色谱条件，吸取对照品的混合溶液，5 次连续进样，计算5 种蒽醌成分（芦荟大黄
5、素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）峰面积下的RSD。2.4.3 稳定性考察各吸供试品溶液，间隔2h 进行一次测定，得到供试品溶液中5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）峰面积下的RSD。2.4.4 重复性考察取大黄样品精密称取5 份，按照供试品的制备方法，制作溶液用于方法测定，依结果计算5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的保留时间以及峰面积下的RSD。2.4.5 回收率考察大黄样品已知含量，精密称取0.500g，共取三份，每一份中加入相同含量的对照品，按照供试品制备方法处理，得出平均回收率及RSD。2.5 大黄含量测定按照供试品制备
6、方法，制得大黄样品溶液后进样20μl，在255nm 处，检测样品各成分所对应峰面积，根据所计算的线性回归方程，得出5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）含量。3 结果3.1 方法学考察结果（1）线性关系考察。计算得出大黄样品中5 种蒽醌成分（芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄素和大黄酸）的线性回归方程，发现5 种蒽醌成分均呈良好线性关系。具体结果见表1。（2）精密度考察。计算得出大黄样品中5 种蒽醌成分精密度良好，RSD 分别是0.55%、1.25%、1.87%、1.08% 和1.61%；（3）稳定性考察。计算得出大黄样品中5种蒽醌成分稳定性良好，在12 个小
7、时内保持稳定。RSD 分别是1.91%、1.30%、1.42%、1.54%、1.51%（n=7）；（4）重复性考察。计算得出大黄样品中5 种蒽醌成分重复性较好，在保留时间上的RSD 分别是0.72%、2.04%、1.09%、1.74%、1.63%，在峰面积上的RSD 分别是1.44%、1.82%、1.91%、0.74%、1.06%；（5）回收率考察。计算得出大黄样品中5 种蒽醌成分回收率分别是99. 49% ,97. 37% ,99. 21% ,98. 84%、98.74%，其RSD 分别是0.41%、1.47%、0.55%、1.32%、0.84%；方法学考察结果说明，用HPLC 法测定大黄提
8、取物中5 种蒽醌的含量不仅简单快捷，而且准确性高、重现性好。3.2 含量测定结果成都产掌叶大黄的5 种蒽醌成分分别如下：芦荟大黄素0.076%；大黄素甲醚0.145%；大黄酚0.823%；大黄素0.187%；大黄酸0.113%。4 结论本研究通过使用HPLC 法，对大黄药材中5 种游离蒽醌含量进行测定，确定了这种方法简单快速、准确性高、重现性好，可用于大黄药材质量评定。参考文献【1】 颜永刚, 尹立敏, 王红艳等.HPLC法同时测定大黄炮制品中10 种化学成分的含量. 中国药房,2016,27(27):3839-3842.【2】 毛春芳, 施忠, 罗琳等.HPLC 法同时测定大黄中芦荟大黄素等11 种成分的量. 中草药,2014,45(16):2400-2403.