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1、课时39：DNA的粗提取和鉴定、微生物的利用.考纲要求：微生物的分离和培养 B级；某种微生物数量的测定 B级； 微生物的应用 B级。学习重点： 微生物的分离和培养。学习难点： 某种微生物数量的测定；微生物的应用教学步骤：一、 课前自主学习1DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的 中溶解度不同，利用这个特点，选择适当的盐浓度就能使 充分溶解，而使杂质沉淀，DNA在0.14mol/L的NaCI溶液中的溶解度最 。此外，DNA不溶于 溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这个原理，能够将DNA与蛋白质进一步的分离。蛋白酶能水解 ，但是对 没有影响。绝大部分蛋白质不能忍受6080oC的高温，而DN
2、A在 以上才会变性。洗涤剂能够瓦解 ，但对DNA没有影响。2DNA鉴定的原理：在 条件下，DNA遇 会被染成 色，所以二苯胺能够作为鉴定DNA的试剂。3.培养基中一般含有 等基本成分，在液体培养基中加入凝固剂 后可制成固体培养基。牛肉膏可提供的主要营养成分有 。4.实验常用的无菌技术有 和 ，其中培养基常用 方式灭菌。5.制备培养基时，倒平板的目的是防止 。6.接种微生物常用的方法有 和 ；用平板划线法时，每次划线前都要灼烧接种环的目的是 。7.统计菌落数目可用的方法有 和 ；用后一种方法计数时，需选择菌落数在 的平板实行计数；每克样品中的菌株数= 。8.分离土壤中分解尿素的细菌时，需将样品培
3、养在以 为唯一氮源的培养中，在培养基中加入 指示剂，如培养基中存有该菌，则指示剂变红；该培养基属于 培养基；分离分解纤维素的微生物时，需将样品培养在以 为唯一碳源的培养中；在培养基中加入刚果红，如存有该菌，则培养基中会出现以纤维素分解菌为中的 。二、课内互动学习（一）合作探究1.图1、2分别为“DNA的粗提取与鉴定”实验中部分操作示意图，下列相关叙述准确的是（ ） A图1、2中加入蒸馏水的目的相同B图1、2中完成过滤之后都保留滤液C图2中过滤时的盐溶液浓度约为0014m年l/LD在图1滤液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质2.用平板划线法或稀释涂布平板法都能够纯化大肠杆菌，二者的共同点有 （ ）能
4、够用相同的培养基 都需要使用接种针实行接种都需要在火焰旁实行接种 都能够用来计数活菌A B C D3.三个培养皿中分别加入10ml不同的培养基，然后接种相同的大肠杆菌样液。培养36小时后，计算菌落数，结果如下表。下列选项准确的是（ ）培养皿培养基成分菌落数琼脂、葡萄糖、N源、无机盐35琼脂、葡萄糖、生长因子、N源、无机盐250琼脂、生长因子、N源、无机盐0A该实验能够采用液体培养基培养微生物B该实验不能够采用平板划线法接种C和对照，说明大肠杆菌的生长需要生长因子D和对照，说明在自然界大肠杆菌生长过程中将葡萄糖作为唯一碳源4.图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序
5、列。（1）图中选择培养基应以 为唯一氮源；鉴别培养基还需添加 作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成 色。（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105 的土壤样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是 ，每克土壤样品中的细菌数量为 108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较 。 （3）现有一菌株的脲酶因为基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码（终止密码有UAG、UGA和UAA）。突变基因转录的
6、mRNA中，终止密码为 ，突变基因表达的蛋白质含 个氨基酸。课外巩固练习39 班级 姓名 普及基础题1.在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是 （ ）A用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14mol/L，滤去析出物B调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质C将丝状物溶解在2mol/NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色D用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同2.做“微生物的分离与培养”实验时,下列叙述正确的是 （ ）A高压灭菌加热结束时,立即开启锅盖，拿出培养基和工具待用B倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上C为了防止污染,接种
7、环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D用记号笔标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上3.某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题：（1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 和 。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是 。（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是 。（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于 中培养，培养的温度设定在37 。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种 作为对照进行实验。（4）培养20 h后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落。一般说来，菌
8、落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越 。（5）细菌平板培养常用的接种方法有 和 。巩固提高题4.下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验原理的叙述不正确的是（多选） ( )ADNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl溶液浓度的降低而减小B利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNACDNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂D在沸水中，DNA遇二苯胺会出现紫色反应5.漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是（多选） （ ） A.生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品B.筛选培养
9、基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落C.在涂布平板上长出的菌落，在通过划线进一步纯化D.斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株6.为从土壤中筛选能有效降解有机化合物X的细菌，研究人员用化合物X、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选出能高效降解化合物X的细菌（目的菌）。下图是从土壤中筛选出该细菌的过程示意图，下表是分离纯化的结果。请回答下列问题：（1）培养基中的有机化合物X主要为目的菌提供 等营养要素。从土壤中富集能有效降解有机化合物X的细菌时，应选用 （填“固体”或“液体”）培养基。（2）配制成10-1浓度稀释液时，用无菌移液管从富集液的上清液中吸取1m
10、L，移人盛有_ _mL无菌水的试管中，并依次配制10 -210 -10的梯度稀释液。（3）在分离、纯化过程中，图中、过程接种的方法分别为 、 。在倒平板前，应对玻璃器皿和培养基灭菌，灭菌方法是 。（4）分析菌种的分离纯化结果，应选择为 号菌落进行扩大生产，原因是 。（5）实验过程中还需配制空白培养基作为对照，其目的是_。参考答案：1、 课前自主学习1、NaCL溶液 DNA 低 酒精 蛋白质 80 细胞膜2、沸水浴 二苯氨 蓝3、水分、无机盐、碳源、氮源 琼脂 碳源、磷酸盐和维生素4、消毒 灭菌 高压蒸汽灭菌5、盖上的水珠落入培养基造成污染6、平板划线法 稀释涂布平板法 防止接种环上的微生物污染培养基7、显微镜直接计数法 稀释涂布平板法 30-300 （CV）M8、尿素 酚红 选择 纤维素 透明圈二、合作探究1、D 2、C 3、B 4、（1）尿素 酚红 红 （2）稀释涂布平板法 1.75 少 （3）UGA 115课外巩固练习：1、B 2、D 3、（1）氮源（和碳源） 碳源 无机盐和水（2）高压蒸汽灭菌（3）恒温培养箱 无菌水（4）大（5）平板划线法 稀释涂布平板法4、ACD 5、BC 6、（1）碳源（或碳源、氮源） 液体 （2）9 （3）稀释涂布平板法 平板划线法 高压蒸汽灭菌（4）3 透明圈/菌落越大，降解化合物X能力越强 （5）检验培养基和平板的灭菌是否合格