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1、实验五总糖的测定一一意酮比色法一、目的：1 .掌握意酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。2 .学习植物可溶性糖的一种提取方法。二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后， 与慈酮 (CmHwO)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在 620 nm处有最大吸 收，在150国/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30回左右就能进行测定，所以可做为 微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。三、仪器、试剂和材料1 .仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2 .试齐J:(1)葡萄糖标准液：
2、100囚/ml(2)浓硫酸(3)慈酮试剂：0.2 g慈酮溶于100 ml浓H2SO中。当日配制使用。3 .材料：甜糜秸秆四、操作步骤1 .葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号1234567葡锢糖标准液(ml)00.10.20.30.40.60.8蒸储水(ml)10.90.80.70.60.40.2葡锢糖含量(闻)0102030406080在每支试管中立即加入慈酮试剂 4.0m1,迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸10 min取出，用冰浴冷却至室温，在 620 nm波长下以第一管为空白，迅速
3、测其余各管 吸光值。以标准葡萄糖含量(闻)为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。2 . 植物样品中可溶性糖的提取：将样品剪碎至2 mmt下，105 oC烘干至恒重，精确称取15 g,置于50 ml 三角瓶中，加沸水25 ml,加盖，超声提取10 min,冷却后过滤（抽滤），残渣 用沸蒸储水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50 ml容量瓶中，定容至刻度， 得提取液。3 .稀释：吸取提取液2 ml,置于另一 50 ml容量瓶中，以蒸储水稀释定容，摇匀。4 . 测定吸取 1 ml 已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml 蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸储水取代提取液。以下操作同标准曲线制作
4、。根据乐0平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（闻）o5、 结果处理C X V总 X D样品含糖量（） = 100W X V 测 X 106其中：C在标准曲线上查出的糖含量（闻），V 总 提取液总体积（ml），V 测 测定时取用体积（ml），D一一稀释倍数，W-样品重量（g）,106样品重量单位由 g换算成 闻的倍数6、 注意事项 ：该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等 （因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。7、 思考题 ：1. 用水提取的糖类有哪些？2. 制作标准曲线时应注意哪些问题？