《实验二细菌革兰氏染色-PPT文档资料.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验二细菌革兰氏染色-PPT文档资料.ppt（13页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、一、实验目的,学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态,C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。,二、实验原理,革兰氏染色,1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染,2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。,3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。,4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性
2、细菌继续保持深紫色,三、实验材料 1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等,涂片风干固定初染水洗媒染水洗脱色水洗复染水洗干燥镜检,四、实验方法,Smear preparation,Heat fixing,crystal violet stain wash with water,Staining,Counterstain with Safranin,注意事项：,（1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 （2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色 时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革 兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 （3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 （4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。,五、思考题,1、讲述革兰氏染色的原理并指出E.C和B.S分别属于革兰氏阳性或阴性？ 2、观察细菌为什么要染色？为什么细菌染色多采用碱性染料？ 3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？革兰氏染色成败的关键一步是什么？ 4、当对未知菌进行革兰氏染色时，怎样能证明你的染色技术和结果的正确性？,