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1、实验一 普通光学显微镜的结构和使用,【实验目的】 了解普通光学显微镜的构造及原理，熟练掌握其操作方法； 了解人血与蛙血细胞的形态差异。,【实验原理】 显微镜种类： 显微镜的组成系统：光学、机械、电子。 普通光镜的光学系统：物镜、目镜、聚光器、光阑等。 普通光镜的机械系统：镜筒、镜臂、物镜转换器、调焦螺旋（粗调和细调）、载物台、镜座等,【实验步骤】 A：显微镜的使用 取用显微镜时，右手握镜臂，左手托镜座，避免倾斜； 接通电源，打开光圈，上升聚光器； 标本片置于载物台上，材料对准通光孔； 低倍下调焦； 选择合适区域推到中央，换高倍镜调焦（细调）； 观察绘图； 结束时将显微镜复原到非工作状态。,显微
2、镜使用的注意点： 禁止单手提拿显微镜和随意拆卸零部件； 低倍下调焦时先上升载物台（或下降镜筒），再缓慢下降载物台或上升镜筒，使物镜镜头与玻片距离由小到大调焦。一般直接转换成高倍镜后细调焦距； 观察标本时两眼同时睁开； 调节合适的光圈和电流强度可使成像更清晰； 如果使用100油镜，应在标本上滴一滴香柏油，使镜头底端与该介质接触。观察完后及时用二甲苯擦拭油镜头。注意其它镜头不得接触香柏油。,【实验步骤】 B：操作练习：血细胞涂片的观察 材料：人血和蛙血涂片 观察内容：血细胞的组成；两种红细胞的形态差异等。 附：字母装片，精液涂片。 【作业】 绘图：人血和蛙血细胞形态,实验二 动物细胞的基本形态与显
3、微测量,【实验目的】 掌握光镜下多种细胞的形态和结构特征； 掌握显微测微尺的使用和测量细胞大小的方法。,【实验原理】 动物各种不同组织的细胞具有不同的形态大小等特征,上皮组织： 单层扁平上皮 单层立方上皮 单层柱状上皮 复层扁平上皮 ,结缔组织： 骨 软骨 血液 ,肌组织： 骨骼肌 心肌 平滑肌,神经组织,单层柱状上皮与复层扁平上皮,骨骼肌细胞与心肌细胞,平滑肌细胞,神经元 肝细胞,【实验原理】,显微测微尺由目镜测微尺和镜台测微尺组成，台尺的每小格已知0.01nm，在相应放大倍数的物镜下对目尺加以标定后，即可通过目尺准确测量细胞的大小。,【实验步骤】 A. 分别观察肠上皮细胞、骨骼肌细胞、心肌
4、细胞、神经细胞和肝细胞等切片，注意比较鉴别细胞的形态结构，核形态数量和位置等特征。 B. 蛙血细胞大小的测量 1.蛙血涂片的制备 2.目镜测微尺的标定 3.细胞大小的测量,【作业】 1. 绘图：各种细胞的形态结构 2. 记录5个以上的蛙血细胞的长、短径，得到平均细胞大小,实验三 细胞器的显示与观察,【实验目的】 了解光镜下细胞器的形态和分布 掌握超活染色法制作光镜标本的基本方法,【实验原理】 活体染色是能使活的细胞或组织着色且无毒害的一种染色方法。可用于研究生活状态下的细胞形态结构和生理或病理变化。 活体染料被特异性地固定和堆积在细胞内某种细胞器上而显色。活体染色分为体内活染和体外活染（超活染
5、色）。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。其原理是由于线粒体内细胞色素氧化酶系的作用，使JGB保持氧化状态，呈亮绿色；而周围的细胞质中染料被还原为无色的色基。,【实验步骤】 人口腔上皮细胞线粒体的超活染色与观察 用牙签刮取口腔颊部粘膜的上皮细胞，在洁净的载玻片上与1d JGB染液混匀，染色15min以上。盖上盖玻片，光镜下观察线粒体的形态和分布。 B. 小鼠肝脏细胞线粒体的超活染色与观察 取小鼠肝脏边缘较簿组织，置于含Ringer液平皿中挤压洗涤2-3次，吸去Ringer液，加JGB染液染色30min， Ringer液洗涤1次后转移至载玻片，将组织拉碎，去稍大的组
6、织块，盖上盖玻片，镜检。 C. 高尔基复合体标本的观察 兔脊神经节切片 D. 动物细胞中心体标本观察,【作业】 绘图：人口腔上皮细胞（显示线粒体） 小鼠肝细胞（显示线粒体） 兔脊神经节细胞（显示高尔基体）,实验四 细胞膜的通透性,【实验目的】 掌握细胞膜的选择通透性和细胞内外水分子交换的原理。,【实验原理】 细胞与周围环境之间可进行选择性物质交换。水分子通常以简单扩散的方式通过细胞膜，如果细胞内外存在渗透压差时，水分子表现从渗透压低的一侧向高的一侧扩散。将红细胞置于低渗溶液中，溶剂很快进入细胞内，发生溶血，释放出血红蛋白，重新封闭的红细胞膜构成血影。而在高渗溶液中，动物细胞发生脱水皱缩。 将红
7、细胞置于数种等渗溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，有的不能通过，能通过的溶质通过的速度也有差异。随着溶质的进入，红细胞内渗透压提高，带动水分的摄入，最终引起溶血。通过溶血时间的测定可估计红细胞膜对各种溶质通透性的大小。,【实验步骤】 1、 制备10兔红细胞悬液：兔心脏抽血，加肝素抗凝，加等渗氯化钠稀释10成不透明的悬液。 2、在1支试管加5ml蒸馏水，再加0.5ml 10红细胞悬液，观察溶血现象的发生。 3、10支试管分别加5ml不同的等渗溶液，再加0.5ml 10红细胞悬液，观察溶血现象是否发生，记录溶血发生时间。 4、显微镜下观察红细胞血影。,【作业】,植物细胞骨架的光学显微镜观
8、察,实验五,【实验目的】 掌握考马斯亮蓝法检测细胞骨架的方法,【实验原理】 A. 细胞化学染色与DNA和RNA的定位 核酸分为DNA和RNA，呈酸性可与碱性染料反应而显色和定位。由于两类核酸分子聚合程度不同，对不同的碱性染料亲和力不同，甲基绿-哌洛宁染料的两种组分分别对DNA和RNA有高亲和力，并分别将二者染成蓝绿色和红色。,【实验原理】 B. 细胞计数 血细胞计数板包括2个计数室，每个计数室有9个大格，每大格的体积为0.1mm3，计数4大格内（4个角）的细胞数，根据每大格的体积和细胞悬液的稀释倍数即可算出细胞密度。,【实验步骤】 A. DNA和RNA的定位 制备蛙血涂片1张，晾干。 固定：7
9、0乙醇固定5min。 染色：滴1d甲基绿-哌洛宁染液染色5-10min，水冲洗后在纯丙酮中分化处理2-3s。 观察绘图,【实验步骤】 B. 血细胞计数 制备蛙血细胞悬液，稀释400-600 熟悉血细胞计数板，找到计数室和计数区域 盖玻片盖在计数板槽上，吸取1d血细胞悬液滴在盖玻片外侧边缘，使其渗入计数室 10物镜下计数（四角的4大格） 细胞密度换算： 细胞数/ml=4大格细胞数/4 10000稀释倍数,【作业】 绘图：核酸的细胞内定位 细胞计数结果和密度换算,实验五 细胞的有丝分裂和减数分裂,【实验目的】 掌握细胞有丝分裂的过程和各时期特征； 熟悉植物细胞染色体压片标本的制作方法； 了解生殖细
10、胞减数分裂过程和特征。,【实验原理】 体细胞有丝分裂,【实验步骤】 A 大蒜根尖有丝分裂压片的制备和观察 1 大蒜根尖用0.5%秋水仙素处理24h 2 洗去Col后，切下根尖置于小瓶中，加1:1无水乙醇和浓盐酸固定、离析，10min 3 吸去固定液后，水洗2次5min 4 材料置于载玻片上，切去根冠和伸长区，保留分生区，加品红染色30min 5 45醋酸分色后，盖上盖玻片，压片 6 显微镜观察：统计分裂指数，分辩各时相特征。 B 有丝分裂切片的观察 观察马蛔虫受精卵有丝分裂切片,洋葱根尖细胞的有丝分裂（40）,C 蝗虫精巢切片的观察 蝗虫精巢是由多条棒状的精巢小管组成，从游离端到附着端依次分布了不同发育阶段的生精细胞。低倍镜下选择一纵切的棒状精巢小管，换高倍后仔细辨别各类型生精细胞及减数分裂各时相特征。,【作业】 绘图：大蒜根尖有丝分裂各时相,实验六 细胞膜的通透性,