痰标本检验.ppt

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1、痰标本的检验,肠杆菌科细菌的分离与鉴定,一.分布 9版伯杰鉴定细菌手册分为24个属， 108个种 现增加到31个属,常见的14个属 1.占临床分离菌总数50% 2.占G-杆菌总数80% 3.占败血症50% 4.占尿路感染70 %,二.临床意义,有些菌属对人类有明显的致病作用 1、鼠疫耶耳森菌-引起烈性传染病 2、 埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、 耶耳森菌属可导致腹泻、食物中毒. 有些菌属与医院感染有关 1、肺炎 2、脑膜炎 3、菌血症 4、各种部位的感染 多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌,与人类感染有关的肠杆菌科细菌有31个菌属，其中临床标本中常见的菌属有14种 克雷伯菌属 爱德华菌属

2、多源菌属 变形杆菌属 普罗威登斯菌属 沙门菌属 耶尔森菌属 志贺菌属 沙雷菌属 肠杆菌属 埃希菌属 哈夫尼亚菌属 枸橼酸杆菌属 摩根菌属,三.微生物特性,1.G-杆菌 ， 多数有鞭毛、菌毛 2.发酵葡萄糖（O/F结果：F) 3. 氧化酶阴性 4.还原硝酸盐为亚硝酸盐 5.营养条件不高，,涂片：G-杆,氧化酶试验,非发酵菌、弧菌,+,肠杆菌科细菌、不动、嗜麦芽菌,双糖试验,F,O,不动、嗜麦芽,肠杆菌科细菌,苯丙,葡盐, 枸, 硝, 赖, 鸟, 氨山, 肌, 吲哚,硝酸盐还原,+,嗜麦芽,不动,四、鉴定流程图,种属鉴定,科的特征,硝酸盐还原,葡萄糖发酵,氧化酶 ,属间鉴定特征,属内种间鉴定特征,

3、血清学分型,报告细菌种名,报告细菌血清型,概述,分子生物学鉴定,五、肠杆菌科的初步分群,可用苯丙氨酸和葡萄糖酸盐试验将肠杆菌科分为四大组,菌 属 名 苯丙氨酸 葡萄糖酸盐 变形杆菌属 + 普鲁维登斯菌属 + 摩根氏菌属 + 塔特姆菌属 + 克雷伯菌属 + 肠杆菌属 + 多源菌属 + 沙雷菌属 + 西地西菌属 + 哈夫尼亚菌 + 埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 枸橼酸杆菌属 爱德华菌属 耶尔森菌属 克卢瓦菌属 兰恩氏菌属 + +,六.苯丙氨酸阳性组的各属鉴别,试 验 变形杆菌属 普鲁维登菌属 摩根氏菌属 塔特姆属 H2S + - - - 枸橼酸盐 +/- + - - 靛基质 +/- + + -,1

4、.变形杆菌属内各种的鉴别,试 验 普通变形杆菌 奇异变形杆菌 潘氏变形杆菌 产粘液变形杆菌 靛基质 + - - - 鸟基酸 - + - - 木糖 + + + -,2.普鲁维登菌属各种的鉴别,试 验 产碱 斯图 雷极 普鲁维登斯菌 普鲁维登斯菌 普鲁维登斯菌 侧金盏花醇 + - + 甘露醇 + - -,生化反应 雷氏 斯氏 产碱 拉氏 海氏 吲哚产生 + + + + - 肌醇 + + - - V 海藻糖 - + - - - 戊五醇 + - + - +,3.摩根菌属种的鉴定,试验 摩根摩根菌 摩根菌(生物1群) 赖氨酸 - + 动力 + -,4.塔特姆菌属的鉴定,苯丙氨酸 H2S 枸橼酸盐 鸟氨酸

5、 靛基质 + - - - -,.苯丙氨酸阳性组菌属鉴别索引图,5,七.葡萄糖酸盐阳性组各属鉴别,原克雷伯菌属（klebsiella）有5个种，2个亚种 肺炎克雷伯菌（K. pneumoniae） 产酸克雷伯菌（K. oxytoca） 解鸟氨酸克雷伯菌（K. ornithinolytica） 植生克雷伯菌（K. planticola） 土生克雷伯菌（K. terrigena）,分 类,克雷伯菌属,臭鼻亚种 鼻硬结亚种,解鸟氨酸柔特勒菌（R. ornithinolytica） 植生柔特勒菌（R. planticola） 土生柔特勒菌（R. terrigena）,柔特勒菌属 (Raoultella)

6、,This proposal is base on 16S rDNA and rpoB gene sequencing and carbon assimilation studies.,培养特征,血琼脂上菌落较大，呈黏液状，以接种环挑取时易拉成丝 在肠道培养基上呈发酵乳糖大菌落 在液体培养基内生长混浊、浓厚、可见菌膜，管底有粘性沉淀物,K. pneumoniae 菌落（血平板）,克雷伯菌属,1.克雷伯菌属各种的鉴别,克雷伯菌和柔特勒菌种间鉴定表,克雷伯菌属,S. marcescens菌落特征（普通营养平板）,沙雷菌属,S. marcescens菌落特征（普通营养平板）,沙雷菌属,2.沙雷菌属各

7、种的鉴别,分类：现有13个种2个生物型,原有7个种2个生物型 产气肠杆菌(E. aerogenes) 阴沟肠杆菌(E. cloacae) 杰高维肠杆菌 坂崎肠杆菌 泰洛肠杆菌 中间肠杆菌 聚团肠杆菌 河生肠杆菌生物群1,河生肠杆菌生物群2 后增加7个菌 阿氏肠杆菌 何氏肠杆菌 溶解肠杆菌 超压肠杆菌 克沃尼肠杆菌 考伯肠杆菌 帕瑞勒肠杆菌,肠杆菌属,3.肠杆菌属各种的鉴别,本菌属的细菌生化反应不典型，常用的商品化鉴定系统 很难达到90以上的鉴定正确率,肠杆菌属种间鉴定表,肠杆菌属,4.哈夫尼亚菌属鉴定,葡萄糖酸盐 枸橼酸盐 棉子 糖 + 5.多源菌属种的鉴定 试验 聚团多源菌 弥散多源菌 赖

8、氨 酸 - - 鸟 氨 酸 - - 水扬苷 + -,5.葡萄糖酸盐阳性菌属鉴别双岐索引图,八.苯丙氨酸葡萄糖酸盐阴性组的各属鉴别,枸橼酸杆菌属,分 类,枸橼酸杆菌属（Citrobacter）包括11个种,弗劳地枸橼酸杆菌 (C. freundii) 差异枸橼酸杆菌（C. diversus） 无丙二酸盐枸橼酸杆菌 (C. amalonaticus) （C. koseri） 布拉吉枸橼酸杆菌 （C. braakii） 雷登枸橼酸杆菌 （C. rodentium） 塞拉克枸橼酸杆菌 （C. sedlakii） 魏克曼枸橼酸杆菌 （C. werkmanii） 扬哥枸橼酸杆菌 （C. youngae）

9、吉乐枸橼酸杆菌 （C. gillenii） 穆利枸橼酸杆菌 （C. murliniae） 法玛丽枸橼酸杆菌 （C. farmeri）,1.枸橼酸杆菌属各种的鉴别,注意：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类资料,枸橼酸杆菌种间鉴定表,枸橼酸杆菌属,2.爱德华菌属各种的鉴别,3.埃希菌属种的鉴别,致泻性E.coli分为5类： 肠毒素型大肠埃希菌 (ETEC) 肠致病性大肠埃希菌 (EPEC) 肠侵袭型大肠埃希菌 (EIEC) 肠出血型大肠埃希菌 (EHEC) 肠凝聚型大肠埃希菌 (EAggEC),埃希菌属,临床意义 (Clinical Significance),E.coli以肠

10、道外感染多见，主要有泌尿系统感染,E.coli中的致病菌株能引起各种类型的腹泻，根据其不同的血清型别、毒力和临床症状,鉴定要点,埃希菌属,大肠埃希菌 在中国兰平板上为蓝色菌落 大肠埃希菌 在伊红美蓝平板上为紫黑色菌落 大肠埃希菌 在麦康凯和SS平板上为红色菌落,培养特征,兼性厌氧菌 营养要求不高 菌落呈中等大小、无色、半透明、光滑 在SS平板上，因产生H2S可形成黑色中心的菌落,伤寒沙门菌菌落形态（SS平板）,四沙门菌属,常用血清：O多价血清（含AF群） O、H、Vi抗原因子血清 方法：从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符合沙门 菌属生物学特性，则 采用A-F多价血清初步确定是否为Salmon

11、ella 1. 如阳性，即用O因子血清分群；再用第一相H因子血清定型，也可用第二相辅助定型 2. 如阴性：应考虑是否有Vi抗原?,血清学分型,加热或传代,去除Vi抗原,凝集：做O多价和单价凝集,不凝集：可能为AF以外,沙门菌属,如是双相菌，进一步用复合血清1、2、5检查第2相抗原。,兼性厌氧菌 营养要求不高 普通平板：中等大小、半透明、光滑 鉴别培养基：乳糖不发酵的菌落,培养特性,菌落形态（麦康凯平板）,志贺菌属,种属鉴定,菌属特征 发酵葡萄糖产酸不产气 赖氨酸（） H2S（） 尿素（） 动力（）,志贺菌属,5.志贺菌属的鉴定,先用志贺多价血清与菌种凝集，如多价血清凝集为志贺菌，多价里不包含鲍

12、氏C16-20再进一步用因子血清凝集而定群。,6.耶尔森菌属各种的鉴别,7、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性组菌属鉴别 双歧索引图,肠杆菌鉴定选用多少生化反应管为好： 苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、赖氨酸、鸟氨酸、氨基酸对照、枸橼酸盐、硝酸盐、侧金盏花醇、山梨醇、甘露醇、ONPG、靛基质、双糖（H2S）,九、兰恩氏菌属的鉴定,十.西地西菌属各种的鉴别,十一.克卢瓦菌属各种的鉴别,十二.API鉴定系统(20E),菌液制成0.5麦氏浊度,加入20E板条,火一样的热情 浪一样的冲劲,十三肠杆菌科某些菌株的特殊性质,1.变形杆菌菌落呈迁延性生长,2.克雷伯菌自身菌落可拉出丝来,3.多源聚团菌在M-H平板上产生黄色,4

13、.沙雷菌M-H 平板上产生铁锈红色,6.菌落溶血的大肠杆菌,7.能产生H2S的菌株,变形杆菌 爱德华菌 伤寒沙门菌 费劳地枸橼酸杆菌 大肠杆菌,8.如是大肠杆菌,就应该是 赖氨酸阳性 枸橼酸阴性 靛基质阳性 侧金花醇阴性,9.如是二类菌,95%枸橼酸试验阳性 靛基质阴性,10.超广谱-内酰胺酶（ESBLS） 1983年世界首例报道，最初在肺炎克雷伯菌中检出。 长期大量使用第三代头孢菌素后产生此酶， 由-内酰胺酶突变（CTM，SHV）而来。 可通过质粒传导，主要由大肠杆菌和克雷伯菌属产生,ESBL的筛选与确证试验,、,邻单胞菌属(Plesiomonas)只有一个菌种，即类志贺邻单胞菌(P. sh

14、igelloides) 该菌属以前归属于弧菌科，后根据基因特征认为与肠杆菌科细菌有更密切的关系，而归属于肠杆菌科,邻单胞菌属,分 类,与气单胞菌属、弧菌属鉴别,邻单胞菌属,十四.大肠杆菌的特点,1. 侵袭力 K抗原 菌毛 2.肠毒素 LT 引起腹泻 ST,大肠杆菌的特点,引起腹泻的五类菌: 肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)-旅行者腹泻,水样便 肠致病性大肠埃希菌(EPEC)-婴儿腹泻,水泻粘液便 肠侵袭性型大肠埃希菌 (EIEC)-类似菌痢,脓血粘液便 肠出血型大肠埃希菌 (EHEC)-水源食源性污染,血便,典型的是O157:H7,引起溶血性尿毒综合症 肠凝聚型大肠埃希菌(EaggEC )-慢性

15、腹泻,水样便,无LT和ST,大肠杆菌的特点,对多种糖产酸产气,吲哚、甲基红、VP 、枸橼酸盐(IMVC)+ + - - 五种致病性大肠杆菌要用特异性血清凝集加以鉴别,十五.沙门菌属的特点,所有动物可分离到沙门菌,有2000多血清 可引起人类胃肠炎、败血症、伤寒,沙门菌属的特点,伤寒菌 口 小肠 淋巴结 血液 (肝脾骨髓) 胆囊 肠腔Ag+Ab) 排出体外,S-R变异:菌落光滑-粗糙 H-O变异:失去鞭毛 位相变异:H抗原双相-一相 V-W变异:失去Vi 抗原,沙门菌属的特点,沙门菌属的特点,伊红美兰(EMB)平板菌落无色不透明 麦康凯(MAC)平板-菌落无色透明 SS平板-菌落无色不透明 孔雀

16、绿平板-强选择培养基,沙门菌属的特点,肥达反应,十六.志贺菌属的特点,急性菌痢-发烧,腹痛,脓血便,痢疾志贺菌引起的菌痢死亡率高达20% 慢性菌痢-反复发作二个月,志贺菌属与大肠埃希菌区别:动力阴性,赖氨酸阴性,分解葡萄糖不分解乳糖 志贺菌属与伤寒沙门菌区别:动力阴性H2S阴性,能于志贺菌因子血清凝集,志贺菌属的特点,本章重点,1.超广谱-内酰胺酶（ESBLs） 2. 能产生硫化氢的菌有哪些 3.常引起人类腹泻的菌有哪些 4.疑为沙门菌,但其与OAF多价血清不凝如何处理 5.肠杆菌科致病力最强的是哪株菌 6.在致腹泻性肠道杆菌中，死亡率最高的是哪种菌 7.伤寒为什么在初愈时会出现肠穿孔大出血

17、8.G-B、OX-、苯丙、葡盐、侧盏金花醇、赖氨酸、鸟氨 酸、山梨醇、靛基质、药敏试验结果为：亚胺培南敏感、庆大霉素敏感、头孢唑啉耐药、氨曲南耐药、头孢他啶耐药、头孢他啶/帮酸敏感。请鉴定此菌。,THANK YOU !,常用血清：O多价血清（含AF群） O、H、Vi抗原因子血清 方法：从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符合沙门 菌属生物学特性，则 采用A-F多价血清初步确定是否为Salmonella 1. 如阳性，即用O因子血清分群；再用第一相H因子血清定型，也可用第二相辅助定型 2. 如阴性：应考虑是否有Vi抗原?,血清学分型,加热或传代,去除Vi抗原,凝集：做O多价和单价凝集,不凝集：可能为AF以外,沙门菌属,