己烯雌酚对体外培养正常人表皮黑素细胞的作用.pdf

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1、中国美容医学2 0 0 8 年5 月第1 7 卷第5 期C h i n e s eJ o u r n a lo fA e s t h e t i cM e d i c i n e M a y 2 0 0 8 V 0 1 1 7 N o 5 6 2 3 整形美容 乳房假体植入术后乳房下皱襞低的原因分析及处理 曾昂，乔群，张海林，白明，王阳，朱琳，方柏荣 ( 中国医学科学院北京协和医院整形外科北京 1 0 0 0 3 2 ) 论著 摘要 目的：分析乳房假体植入手术后下皱襞低的原因及处理方法。方法：回顾性分析2 0 0 6 年5 月2 0 0 7 年4 月期间1 9 2 例 各种乳房假体植入手术患者

2、，共有5 例因术后出现单侧乳房下皱襞低，其中1 例为乳癌术后再造，2 例为单纯隆乳术，2 例为乳 房聚丙烯酰胺水凝胶取出术后再次隆乳术患者，均施行乳房下皱襞重建手术修整。结果：所有患者术后恢复顺利，两侧乳房基 本对称，随访3 6 月，矫正效果稳定。结论：整形外科医师应当重视乳房整形手术中下皱襞的保护和重建。 关键词 隆乳术；并发症；手术 中图分类号 R 6 2 2【文献标识码 A 文章编号 1 0 0 8 6 4 5 5 ( 2 0 0 8 ) 0 5 0 2 I n f e r i o rm a m m a r yf o l dr e c o n s t r u c t i o ni ni

3、m p l a n tb a s e da u g m e n t a t i o nm a m m o p l a s t y Z E N GA n g ，Q I A OO u n ，Z H A N GH a i - l i n lB A IM i n g | W A N G Y a n g fZ H UL i n fF A N GB a i - r o n g ( D e p a r t m e n to fP l a s t i cS u r g e r y ，P e k i n gU n i o nM e d i c a lC o l l e g eH o s p i t a l ，B

4、 e i j i n g10 0 0 3 2 ，C h i n a ) A b s t r a c t ：O b j e c t i v eT oi n v e s t i g a t et h ec a u s eo f i n f e r i o rm a m m a r yt o l d ( I M F ) d e s c e n d i n ga f t e ri m p l a n tb a s e d a u g m e n t a t i o nm a m m o p l a s t ya n dt op r e s e n tas i m p l eI M Fr e c o n

5、 s t r u c t i v em e t h o d M e t h o d sAr e t r o s p e c t i v ea n a l y s i sw a s p e r f o r m e d F r o mM a y2 0 0 6t oA p r i l 2 0 0 7 at o t a ln u m b e ro f1 9 2c a s e sr e c e i v e di m p l a n tb a s e da u g m e n t a t i o n m a m m o p l a s t yi no u rc e n t e r ，a n d5c a s

6、 e sw e r ef o u n du n i l a t e r a ll o wp o s i t i o n e dI M Fp o s t - o p e r a t i v e l y T h ec a u s e so fl o w p o s i t i o n e dI M Fw e r ec a t e g o r i z e di n t ot h r e e ：t h eO V e r d i s s e c t i o ni nb r e a s ta u g m e n t a t i o n ，t h ef a i l u r eo fp r e s e r v

7、 a t i o no fI M F d u r i n go n c o l o g i c a lo p e r a t i o n ，t h er e s i d u a lg e l - l i k em a t e r i a li nt h ep r o s t h e s i sp o c k e ta f t e rb r e a s tp o l y a c r y l a m i d eh y d r o g e l r e m o v i n go p e r a t i o n s A l lp a t i e n tr e c e i v e dI M Fr e c

8、r e a t i o np r o c e d u r e st h r o u g ha r e o l ai n c i s i o n R e s u l t sT h e I M F r e c O n s t r u c t i O n sw e r es u c c e s s f u Ii nt h e s e5p a t i e n t s A f t e rf o l l o wu pf o r3t O6m o n t h s 。t h e s ep a t i e n t sp r e s e n t e dw i t h s t a b l ea e s t h e t

9、 i c a ls a t i s f a c t o r yo u t c o m e s C o n c l u s i o nT h ep l a s t i cs u r g e o n ss h o u l dP a ym o r ea t t e n t i o nt oI M F p r e s e r v a t i o ni ni m p l a n tb a s e db r e a s tp l a s t i cs u r g e r y I nc a s eo fc o n s e r v a t i v em e t h o d sf a i l s ，a na r

10、 e o l aa p p r o a c hI M F r e c o n s t r u c t i o nc o u l db ee a s i l ya p p l i e d K e yw o r d s ：a u g m e n t a t i o nm a m m o p l a s t y ；c o m p l i c a t i o n ；o p e r a t i o n 乳房下皱襞是决定女性乳房美学形态的最重要因素之 一。在各种乳房假体植入性手术中，如隆乳术、乳房再造术 等，乳房下皱襞已成为手术过程中重要的引导性标志。下皱 襞不对称必将影响乳房的美学效果。乳房下皱襞高通常

11、是由 于假体腔穴剥离不充分所致，多在门诊局麻即可简单处理。 而下皱襞低则多需重建乳房下皱襞，处理相对复杂。我们对 2 0 0 6 年5 月2 0 0 7 年4 月期间发生乳房假体植入术后下皱 襞低的病例作出回顾性总结，分析其原因，并介绍其处理方法。 1 临床资料 共1 9 2 名患者接受各种乳房假体植入手术，其中5 名 ( 2 6 ) 患者因乳房假体植入术后单侧乳房下皱襞低而需再 次手术。患者平均年龄3 2 岁( 2 6 3 6 岁) ，既往手术原因及手 术方式分别为：1 例为乳癌术后延期假体植入再造术，2 例为 聚丙烯酰胺水凝胶取出术后二期隆乳术，2 例为小乳症隆乳 术。术前观察两侧乳房下皱

12、襞平均差距为2 2 c m ( 1 5 3 5 c ) ( 图1 ) 。 2 手术方法 患者取站立位时，以对侧乳房下皱襞为模板，于患侧乳 房下部皮肤表面标记出对称的乳房下皱襞位置。手术取乳晕 下半环切口，经乳腺浅筋膜层分离至乳腺下极，打开腺体、胸 肌及包膜，将假体取出。将下皱襞标记线均分6 点，分别垂直 刺入7 4 针头，针尖进入假体腔穴内，抵胸壁层。注入少量美 蓝，标记皮肤深层及对应胸壁位置( 图2 ) 。将此6 点连接形成 弧形的下皱襞。此线下方包膜组织予以去除，形成创面。下皱 襞线上方包膜组织厚、硬者施行腺体后包膜去除术，胸壁侧 包膜可予保留；如果包膜柔软、菲薄，可以更多保留。从腔穴 内

13、下皱襞线内侧开始，应用1 - 0 丝线连续缝合2 层，关闭整 个下极腔穴。假体腔穴上极及侧方应适当打开包膜，扩大假 体腔穴。假体植入后，尚需将患者体位调整为半坐位，并反复 观察调整。至满意形态后，放置负压引流，关闭切口。 通讯作者：乔群，中国医学科学院北京协和医院整形外科主任，教授。主任医师，博士研究生导师；研究方向：乳房整形外科、皮瓣外科、美容外科： E l a il ： i a o q u n 9 2 5 h o t m a i1 c o m 万方数据 o nt h ea c t i v a t i o no fr a tm a s tc e l lb ys u b s t a n c e

14、Po ra n t i g e n 【J 】S k i n P h a r m a c o l A p p lS k i n P h y s i o l ，1 9 9 8 ，1 1 ( 2 ) ：1 l l - 1 1 6 5 】C 6z 1 日l l n eL ，G a b o r i a uF ，C h a r v e r o nM 。e ta 1 E f f e c t so ft h eA v 6n o s p r i n gw a t e ro nt h ed y n a m i c so fl i p i d si nt h em e m b r a n e so fc u l t

15、 u r e d f i b r o b l a s t s J S k i nP h a r m a c o l ，1 9 9 3 ，6 ( 3 ) ：2 3 1 - 2 4 0 【6 P o r t a l 6sP ，蛳6sM F 。L i c uD ，e ta 1 I r m n u n o m o d u l a t i o ni n d u c e db y A v 6r i o s p r i n gw a t e ro n1 1 1 l a n dT h 2 - d e p e n d e n tc y t o k i n e p r o d u c t i o ni nh e

16、a l t h ys u b j e c t sa n da t o p i cd e r m a t i t i sp a t i e n t s J S k i n P h a r m a c o lA p p lS k i nP h y s i o l ，2 0 0 1 ，1 4 ( 4 ) ：2 3 4 - 2 4 2 【7 J a i nA S a n g a lL B a s a l E ，e ta 1 A n t i - i n f l a m m a t o r ye f f e c t so f e r y t h r o m y c i na n dt e t r a c

17、y c l i n eo nP r o p i o n i b a c t c r i u ma g n e si n d u c e d p r o d u c t i o no fe h e m o t a c t i cf a c t o r sa n dr e a c t i v eo x y g e ns p e c i e sb y h u m a nn e u t r o p h i l s J D e r m a t o lO n l i n eJ ，2 0 0 2 ，8 ( 2 ) ：2 8 H a r t hW ，C a f f i c rP P ，M a y e l z

18、a d e hB ，e ta 1 T o p i c a lt a c r o l i m u st r e a t m e n t f o rc h r o n i cd e r m a t i t i so ft h ee a r 叨E u rJD c r m a t o l ，2 0 0 7 ，1 7 ( 5 ) ： 4 0 5 _ 4 1 1 【收稿日期 2 0 0 8 0 3 - 2 6 修回日期 2 0 0 8 - 0 5 0 8 编辑李阳利 己烯雌酚对体外培养正常人表皮黑素细胞的作用 龚石1 ，张晴2 ，赵志国2 ，刘巧1 ，陈勇军1 ，王爱民1 ，杨先旭1 ，陈抗 ( 1 海南

19、省皮肤病医院皮肤科海南海口5 7 0 2 0 6 ；2 贵阳医学院药理教研室) 论著 摘要 目的：观察不同浓度外源性雌激素己烯雌酚( D l a e t h y ls t i l b e s t r o D E S ) 对体外培养人正常黑素细胞的细胞增殖及酪氨 酸酶活性的影响方法：采用M T T 法测定黑素细胞增殖情况参考N a k a j i m aM 方法测定酪氨酸酶活性。结果：不同浓度已烯雌 酚对体外培养人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性均有促进作用。结论：己烯雌酚能促进人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性。对相关 皮肤色素性疾病可能有一定的治疗作用。 关键词 己烯雌酚；黑素细胞；酪氨酸酶 中图分类号

20、】R 3 2 9 2 5 文献标识码 AC 文章编号 1 0 0 8 - 6 4 5 5 ( 2 0 0 8 ) 0 5 - 0 3 E f f e c t so fD i o e t h y l s t i l b e s t r o ( D E S ) 0 1 1c u l t u r e dh u m a nm e l a n o c y t e s1 1 1v i t r o G O N GS h i l ，Z H A N GO i n 9 2 ，Z H A OZ h i - G u 0 2 , 1 1 UO i a o1 ，C H E N GV o n g - j u n l ，W

21、A N GA I - m i n l , Y A N GX i a n - x l u l C H E N K a n 9 1 ( 1 D e p a r t m e n to fD e r m a t o l o g y ，H a in a nP r o v i n c i a lS k i nD i s e a s eH o s p i t a l H a i k o u 5 7 0 2 0 6H a i n a n ，C h i n a ；2 ，D e p a r t m e n to f P h a r m a c o l o g y ，G u i y a n gM e d i c a

22、 lC o l l e g e ) A b s t r a c t ：O b j e c t i v eE s t a b l i s h i n gt h ec u l t u r eo fh u m a nn o r m a Im e l a n o c y t e sl nv i t r o 。a n ds t u d y i n gt h ee f f e c t s0 f D i a e t h y l s t i l b e s t r o ( D E S ) o nc u l t u r e dh u m a nm e l a n o o y t e s M e t h o d

23、sV l a b l l i t yo fm e l a n o c y t e sw e r em e a s u r e db yM T T m e t h o d ；t y r o s i n a s ea c t i v i t yw a sm e a s u r e db yu t i l i z a t i o no fL - D o p 8a st h es u b s t r a t a ( N a k a j i m aM ，m 钟h o d ) R e s u l t s D i f f e r e n td o s a g eo fD i a e l h y I s t

24、i I b e s l r 0 ( D E S ) I n d u c e da s t r o n gp r o m o t i o no nm e l a n o c y t i ov i a b i l i t ya n dt y r o s l n a s ea c t i v i t y C o n c l u s i o nD i 8 e t h y l s t i I b e 8 t r o ( D E S ) c a np r o m o t em e l a n o c y t l op r o l l f e r a t I o na n dt y r o a t n a

25、s ea c t i v i t y D i a e l h y I s l | l b e s t r o m i g h th a v es o m et h e r a p e n t i c a le f f e c t so nc a r r e l a t e dp i g m e n t e ds k i r ld i s e a s e s K e yw o r d s ：D l a e t h y l s t l l b e s t r o ( D E S ) ；M o l a n o c y t e s ；T y r o s l n a s e 早期研究观察到外源性雌激素局

26、部和系统使用均能引 起人类皮肤色素沉着。S D = M c L e o d 等 1 】早在1 9 9 4 年就证实内 源性雌激素能促进体外培养入表皮黑素细胞增殖及酪氨酸 酶活性，最近的细胞免疫化学研究也证明了成人包皮来源体 外培养的黑素细胞可表达雌激素受体嘲。多年来，雌激素对人 表皮黑素细胞作用的研究主要是围扰内源性雌激素，且随着 雌激素皮肤受体的精确定位，逐步证实大部分与雌激素受体 结合的配基( 包括外源性雌激素) 有很相似的结合构象。另有 报道称人工合成的己烯雌酚( D 1 8 e t h 3 r l s t i l b e s t r o ，D E S ) 极 易与体内雌激素受体胥白结合

27、，具有比天然雌激素戛强的基 因表达嘲。因此本实验利用体外培养的正常人表皮黑素细胞， 研究了外源性雌激素一己烯雌酚对体外培养人黑素细胞的 增殖及酪氨酸酶活性的影响，拟证实外源性雌激素( D E S ) 的 活性，为进一步理解内、外源性雌激素活性异常所造成的皮 肤病理过程提供参考。 万方数据 主垦羞查堕堂2 吧! 生! 旦蔓j 7 卷第5 期C h i n e s eJ o u r n a lo fA e s t h e t i cM e d i c i n e M a y 2 0 0 8 V 0 1 1 7 N o 5 7 2 9 1 材料和方法 1 1 试剂：己烯雌酚l m l ：2 m g

28、( 针剂规格，上海通用药业股份 有限公司，批号：H 3 1 0 2 1 4 0 3 ) ，黑素细胞培养液( 美国C a s c a d e 公司产品) ，D i s p a s e I I 酶( 瑞士R o c h e 公司产品，购自第三军 医大学) ，左旋多巴( L d o p a ，S i g m a 公司产品) ，噻唑蓝( M T T ) ， 二甲基亚砜( D M S O ) ，T r i t o n X - 1 0 0 ( 购S i g m a 公司) 。 1 2 仪器：O L Y M P U S 倒置显微镜( C K 4 0 ) ，T h e r m o f o r mC 0 2 孵

29、 箱，E p p e n d o r f 一5 8 1 0 R 低温离心机，美国B i o t c k 酶标仪 ( E L X 8 0 0 ) 等。 1 3 药物制备“ 司：将己烯雌酚注射液在无菌条件下用黑素 细胞基础培养基倍比稀释成以下浓度：1 0 - M ，1 0 嘲，1 0 哪， 1 0 铷，1 0 一O M ，1 0 。1 1 M 。其中，l O 。9 1 0 1 1 M 为人体内源性雌激素 生理浓度，M = m o l L ，4 避光保存备用。 1 4 正常人黑素细胞的培养及传代时】：取3 2 0 岁正常人包 皮环切标本，生理盐水反复多次冲洗，去除皮下组织，切成 3 m m X 5

30、m m 的小条，D i s p a s e I I 酶4 “ C 消化1 5 h 后，仔细分离表 皮和真皮。取表皮剪碎，0 2 5 胰酶3 7 消化2 0 m i n ，终止消 化后吹打成单细胞悬液，筛嘲过滤后离心，以5 1 0 6 m l 接种 于含黑素细胞培养液的培养瓶中。置入C O ：孵箱中3 7 。C 培 养，2 4 h 后首次换液以去除未贴壁细胞，然后按情况进行换 液。原代接近融合时，胰酶消化传代，实验选用2 4 代细胞。 1 5 黑素细胞鉴定( 州：收集第二代细胞进行H E 染色和脱色 素H E 染色及多巴，S - 1 0 0 免疫组化染色( 一抗为小鼠抗人 S - 1 0 0 蛋

31、白抗体) 鉴定。 1 6M T T 法测定不同浓度外源性雌激素对黑素细胞增殖的影 响：M T T 法实验操作用四甲基偶氮唑蓝比色( M T T ) 法。选择对 数生长期M C 。胰酶消化后，调整细胞浓度为5X1 0 4 m l 接种 于9 6 孔培养板，常规孵育，细胞贴壁后1 2 h 弃上清一分别加 入不同浓度己烯雌酚液2 0 u L 孔，培养液1 8 0u L 孔，继续 M C 细胞培养。该项实验以无药培养液换液做对照( 2 0 0 u L 孔) ，每一浓度设4 个重复孔一观察7 2 h 分别加入M T T 2 0 u l 孔，继续孵育4 h 后弃上清，加二甲基亚砜( D M S O ) 2

32、 0 0 u L 孔，振荡l O m i n ，置酶标仪上测定吸光度值，激发波长 为5 7 0 n m 处，参考波长为6 3 0 n m 测0 D 值。计算M c 增长率( ) = ( A 各浓度A 正常- 1 ) X 1 0 0 。 1 7 酪氨酸酶活性测定：细胞接种方法同上，药物作用3 图1 传代培养的第2 代正常人黑素细胞 ( X 2 0 0 ) 图2H E 染色：黑素细胞 有2 5 个树突，核蓝色， 胞浆呈粉红色( 3 0 0 ) 天后，弃去上清液，0 O l m o l L 的P B S 洗2 次，每孔加9 0 t t l l O m l L 的T r i t o n X 一1 0

33、0 ，震荡5 m i n 以溶解细胞，每孔再加 1 0 p A 质量分数为0 1 的左旋多巴溶液，3 7 。C 孵育3 0 m i n ， 振摇后在高通量多功能微板测试系统4 9 0 n m 波长处比色。酪 氨酸酶活性增殖率= 卜( 各浓度平均吸光度值一空白孔平 均吸光度值) ( 对照组平均吸光度值一空白孔平均吸光度 值) X 1 0 0 。 1 8 统计学处理：采用S P S S 软件进行单因素方差分析，氏 0 0 5 为有显著性意义。 2 结果 2 1 形态学结果：体外培养的正常人黑素细胞为树突状细胞， 有较多树突，胞体内可见黑素颗粒，细胞增殖良好，连接成 网。细胞铺满培养瓶后进行传代培养

34、，约7 1 0 天传一代( 见 图1 ) 。 2 2 黑素细胞鉴定：H E 染色，黑素细胞旱梭形，有2 3 个树 突，核蓝紫色，胞浆呈粉红色( 见图3 ) ；脱黑素H E 染色，胞浆 呈蓝色，树突呈淡蓝色，细胞内色素颗粒全部脱去( 见图4 ) ； D o p a 染色，可见细胞浆内阳性着色( 黑色或灰色) ( 见图5 ) ； S - 1 0 0 蛋白染色阳性，细胞浆呈棕黄色染色，从而可以鉴定为 黑素细胞( 见图6 ) 2 3 不同浓度外源性雌激素( D E S ) 对人正常皮肤黑素细胞增 殖率( ) 的影响：由表1 可见，1 0 1 1 0 。1 1 m o l L 的己烯雌酚 ( D E S

35、 ) 均对人正常皮肤黑素细胞具有不同程度的促增殖作 用，其中1 0 n o l L 浓度的D E S 对黑素细胞促增殖活性最明 表1 不同浓度外源性雌激素对人皮肤黑素细胞( M T T ) 增殖率的影响s ) 注：n = 4 ，与空白对照组相比p ( 0 0 1 ，代0 0 5 ，p 0 0 5 图3 脱黑素H E 染色： 胞核呈蓝色，树突呈淡 蓝色，细胞内色素颗粒 全部脱去( 3 0 0 ) 图4L - D o p a 染色可见 细胞浆内阳性着色( 黑色 或灰色颗粒) ( 2 0 0 ) 图5s 一1 0 0 蛋白染色 阳性，胞浆呈棕黄色 ( 2 0 0 ) 万方数据 显( 增殖率为8 8

36、9 ) ；从1 0 o l L 浓度到1 0 1 1 m o l i 。浓度， 增殖率开始依次下降。不同浓度外源性D E S 孵育的黑素细胞 于7 2 h 经方差分析表明：各浓度组与空白对照组相比较， 1 0 - 钿o l L 浓度组，1 0 “m o l L 浓度组和1 0 。1 l m o l L 浓度组差 异无显著性( ，0 0 5 ) ；1 0 。m o l L 浓度组和1 0 1 o l L 浓度 组与空白对照组相比较，差异有显著性( 必0 0 5 ) ；1 0 8 m o l L 表2 不同浓度外源性雌激素对黑素细胞酪氦酸酶活性的影响G + s ) 注：n = 4 ，与空白对照组相

37、比J D ( 0 0 1 ，“J P ( O 0 5 ，尸 0 0 5 浓度组与空白对照组相比较，差异亦有显著性( 尸 0 0 5 ) ；1 0 。o m o l L 浓度组和 1 0 4 - m o l L 浓度组与空白对照组相比较，差异有显著性( 尸 0 0 5 ) ：1 0 书m o l L 浓度组与空白对照组相比较，差异也有显 著性G o 0 0 1 ) ，证实1 0 - S m o l L 浓度组、1 0 。9 m o l L 浓度组和 1 0 - o m o l L 浓度组均可增强黑素细胞酪氨酸酶活性。 3 讨论 早期的研究已经观察到雌激素能引起人类皮肤色素沉 着，如：服用含雌激素

38、u 服避孕药后，部分女性面部可能会出 现色素沉着，且局部应用含雌激素的软膏也会引起局部色素 沉着。这些是比较常见的外源性雌激素引起的色素沉着，它 极大的影响人们的美观【l ”。 雌激素对皮肤不f i d 类型细胞，诸如表皮角质形成细胞， 真皮成纤维细胞以及黑素细胞，都有着显著效应。它也关系 到毛囊、皮脂腺、顶泌汗腺等附属器官的调节功能，对皮肤老 化、色素形成、毛发生长、皮脂分泌乃至皮肤肿瘤都有显著调 节作用“。外源性雌激素在结构或功能上与内源性雌激素很 相似，可模拟或干扰内源性雌激素功能，与人体各脏器雌激 素受体结合后发挥广泛作用。己烯雌酚是人工合成雌激素， 与天然雌二醇结构相似，它目前仍是临

39、床常用药物。本研究 以人体生理雌二醇浓度为参考，设计不同浓度组的外源性己 烯雌酚，利用M T T 比色方法和B o y dM R 等的方法分别检测不 同浓度外源性D E S 对体外培养人正常黑素细胞增殖及酪氨 酸酶活性的影响。结果显示：不同浓度外源性D E S 对黑素细 胞增殖均有活性，其中，l O - o l L 浓度和高效剂量组作用最 强；同时，对黑素细胞酪氨酸酶活性影响特点如下：外源性 D E S 在1 0 。1 0 o l L 浓度，作用逐渐增高，其中，1 0 m o l L 作用最强；但1 0 。1 0 m o l L 时，作用微弱( 2 1 7 ) ，1 0 1 1 m o l L

40、 则无明显影响。这一结果与内源性雌激素对体外培养 黑素细胞增殖作用的现有研究报道基本吻合。由于M C 增殖 和其活性增强对临床皮肤脱色后复色起决定作用，研究结果 表明一定的临床药物剂量调整，可能会避免或减少色素沉着的 发生。 总之，通过本实验，使内、外源性雌激素对人体皮肤色素 形成的作用研究进一步扩大，也增加了它的皮肤临床应用前景。 参考文献 【1 M c I , e o dS D ，R a n s o nM ，M a s o nR S E f f e c t so fe s t r o g e n so nh u m a n m e l a n o c y t e si nv i t r o

41、 J JS t e r o i dB i o c h e mM o lB i o l ，1 9 9 4 ，4 9 ( 1 ) ：9 1 4 2 J i mS ，L e eE S ，K i mW D o n o rs p e c i f i cr e s p o n s e o fe s t r o g e na n d p r o g e s t e r o n eo nc u l t u r e dh u m a nm e l a n o c y t e s 叨JK o m a nM e dS c i ， 2 0 0 2 ，1 7 ：5 8 6 4 【3 T h o r n t o nM J

42、 T h eb i o l o g i 【c a la c t i o n so fe s t r o g e n so ns k i n 阴E x p D e r m a t o l ，2 0 0 2 ，l l ：4 8 7 5 0 2 【4 】刘建文药理实验方法学一新技术与新方法 M 】J B 京：化学工业出 版社2 0 0 4 ：2 5 8 2 6 7 5 】陈奇中药药理研究方法学咖北京：人民卫生出版社，2 0 0 0 ： 4 7 l - 4 7 3 6 t 大光，朱文元淫羊藿苷抑制正常黑素细胞黑素合成的研究 J 】 临床皮肤科杂志，2 0 0 4 ，3 3 ( 8 ) ：4 6 0 -

43、 4 6 2 7 】杨壮群，王正辉芦荟苫素对体外培养的黑素细胞影响的实验研究 J 】中国美容医学，2 0 0 3 ，t 2 【5 ) ：4 6 4 - 4 6 6 【8 t 伯云，李玉松病理学技术 M 】北京：人民卫生出版社，2 0 0 0 ：4 2 3 9 】赵辨，黄秋玲人正常黑素细胞体外纯培养及其细胞生物学鉴定 【J 】临床皮肤科杂志，1 9 9 1 ，1 9 ( 5 ) ：2 2 6 2 2 8 1 0 B o y dM R , B a c o nT H ，S u t t o nD A n t i h e r p e s v i m sa c t i v i t yo f9 - ( 4

44、一H y d r o x y - 3 一H y d r o x y m e l n y l b u t - 1 - y 1 ) g u a n i n e ( a R E3 9 1 2 3 ) i n a n i m a l s J 】A n t i m i c r oA g e n t sC h e m o t h e r ，1 9 8 8 ，3 2 ：3 5 8 3 6 3 【ll 】李健，下新燕女性黄褐斑患者血清性激素水平检测及疗效观察 J 】临床皮肤科杂志，2 0 0 4 ，3 3 ( 1 2 ) ：7 3 8 7 3 9 1 2 李晓凤，范卫新雌激素对皮肤和毛发生物学作用的研究进展阴 国外医学皮肤性病学分册, 2 0 0 5 ( 3 1 ) 3 ：1 8 0 1 8 2 收稿日期】2 0 0 8 0 3 11 【修回日期 2 0 0 8 0 5 0 5 编辑李阳利 万方数据