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1、J o u rna l o f Me d i c a l F o r u m V o l . 2 7 N o . 2 3 D e c e m b e r 2 0 0 61 1 氯化镐对大鼠子宫内膜细胞的增殖作用 汤晓阳， 付远辉， 吴逸明 ， 陈小玉 河南省医疗器械检验所 郑州市 4 5 0 0 0 3 摘要目的 研究氯化锡对去卵巢大鼠 子宫内 膜细胞的增殖作用。 方法 将成年雌性大鼠去卵巢后， 给 予不同剂量的C d C 1 2 ( 0 . 0 8 m g / k g , 0 . 4 0 m g / k g 和2 . 0 0 m g / k g ) 连续3 d ， 观察子宫内 膜细胞有丝分裂
2、指数和嗜银染 色颗拉数。结果 氯化锡中、 高剂量组有丝分裂指数分别为0 . 8 1 %, 0 . 9 7 %， 均高于阴 性对照组， 差异有显著性 ( 尸 0 . 0 5 ) 。同时氯化锡高剂量组嗜银染色颗粒数为 1 . 3 6 - 1 . 5 3 ， 与阴性对照组相比， 差异有显著性 ( 尸 0 . 0 5 ) 。结论 氯化锡能 加速细胞的分裂和增殖， 因 此， 推断它 在大鼠体内可能具有雌激素样作用。 关键词氯 化 锡; 有 丝 分 裂 指 数; 嗜 银染色 ; 雌 激 素 样 作用 中图分类号: R - 3 3 2文献标识码: A文章编号: 1 6 7 2 - 3 4 2 2 ( 2 0
3、 0 6 ) 2 3 -0 0 1 1 -0 3 P r o l i f e r a t i o n o f E n d o m e t r i u m i n Mi c e E x p o s e d t o Ca d mi u m Ch l o r i d e T A N G X i a o y a n g , F U Y u a n h u i , W U Y i m i n g , e t a l H e n a n P r o v i n c i a l M e d i c a l D e v i c e I n s e p c t i o n I n t i u t t e , Z
4、 h e n g z h o u 4 5 0 0 0 3 ， C h i n a A B S T R A C T O b j e c t i v e T o s t u d y t h e p r o l i f e r a t i v e e f f e c t o f C a d m i u m C h o r i d e o n e n d o m e t r i u m i n r a t s . Me t h o d s T h e o v a r i e c t o m i z e d s e x u a l m a t u r e f e m a l e S D r a t s
5、w e r e a d mi n i s t r a t e d w i t h C a d m i u m C h l o r i d e ( 0 . 0 8 m 梦k g , 0 . 4 0 m 岁k g , 2 . 0 0 m g / k g ) f o r 3 d a y s . T h e p r o l i f e r a t i v e e f f e c ts w e r e e v a l u a t e d b y m i t o t i c in d e x ( M I ) a n d a r g y r o p h i l i c n u c l e o l a r o
6、 r g a n i z e r r e g i o n 一 a s s o c i a t e d p r o t e i n s ( A g 一 N 0 R s ) . R e - s u l t s T h e M I i n t w o g r o u p s ( m i d d l e a n d h i g h d o s e , 0 . 8 1 % a n d 0 . 9 7 %) t r e a t e d w i t h C a d m i u m C h l o - r i d e w e r e h i g h e r t h a n t h a t o f n e g
7、a t i v e c o n t r o l g r o u p ， a n d t h e r e w e r e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e f r o m t h a t o f n e g a t i v e c o n t r o l g r o u p ( P 0 . 0 5 ) a n d t h e m e a n s o f A g 一 N O R s ( 1 . 3 6 一 1 . 5 3 )i n n e g a t i v e c o n t r o l g r o u p a n d h i g h d o s
8、 e g r o u p s ( P 0 . 0 5 ) . C o n c l u s i o n C a d m i u m C h l o r i d e c a n p ro m o t e p ro l i f e r a t i o n o f e n d o m e t r i a l c e l l s i n r a t s ， t h e r e f o r e ， i t i s l i k e l y t o a c t a s a n e s t ro g e n i n v i v o . K E Y WO R D S C a d m i u m C h l o r
9、 i d e ; M i t o t i c i n d e x ; A r g y r o p h i l i c n u c l e o l a r o r g a n i z e r r e g i o n 一 a s - s i o c i a t e d p r o t e i n s ; E s t r o g e n i c i t y 由于福及其化合物具有很特殊的化学性能， 因 此， 其 用 途 极 其 广 泛。申 立 军 用去卵 巢S D 大 鼠子宫增重试验证实: C d C l 2 在高剂量能够诱导去 卵巢S D大鼠子宫增重， 具有雌激素样作用。子宫 增重试验是最早建立的检
10、测雌激素活性的经典方 法， 但因实验动物个体差异等因素影响， 因而实验 结 果 敏 感性不高。 S t o i c 。 等2 亦认为子宫增重试 验所采用的子宫重量变化等指标的敏感性不够。 为此， 本研究选用去卵巢大鼠子宫内膜增殖实验， 进 一步 探讨C d C 1 2 的 雌激素 活 性， 以 推断它 在大鼠 体内是否具有雌激素样作用。 t 郑州大学公共卫生学院劳动卫生教研室 郑州市 4 5 0 0 5 2 1 对象与方法 1 . 1 实验动物成年雌性 S D大鼠， 体重2 1 0 - 2 3 0 g ， 由河南省实验动物中心提供( 医动字第 4 1 0 1 1 7 号) 。饲养环境温度为(
11、2 0 1 2 ) 9 C , 湿度 6 0 %一 7 0 %， 昼夜周期为1 2 / 1 2 h ， 普通饲料饲养， 自由饮水进食。 1 . 2 受试物和主要试剂氯化锡( 分析纯) ， 中国 亭 生 化学试剂厂。阳 性对照物雌二醇( e s tr a d io l , E 2 ) , S i g m a 公司产品。阴性对照物为蒸馏水。戊 巴比妥纳为进口 分装， 硝酸银、 秋水仙素、 青霉素、 乙醇、 二甲苯、 花生油为市场销售。 A g 一 N O R s 银 医药论坛杂志2 0 0 6 年 1 2月第2 7 卷第2 3 期 染工作液的配制: 用体积分数为1 0 %的甲酸配制 体积分数为2
12、%的明 胶溶液， 再将明胶溶液与体积 分数为5 0 %的硝酸银体积比1 : 2 混合而成。 1 . 3 仪器设备 普通光学显微镜、 切片机、 电子天 平、 手术器械等。 1 . 4 方法 1 . 4 . 1 卵巢切除 性成熟雌性S D大鼠用2 %戊 巴比 妥钠( 给药容积为2 . O m U k g 体重) 麻醉后， 按 改 进的 背 部人 路法 3 切除 双侧卵巢， 术后3 d 内 每 日 腹腔注射庆大霉素1 m l ， 防止动物手术后感染。 卵巢切除次日 始至第5 d内， 每日 早晨进行阴道涂 片观察上皮细胞形态， 出现角化细胞者表示去卵 巢不完全， 弃去不用。 1 . 4 . 2 动物分
13、组与给药将卵巢摘除完全的大 鼠， 于术后第8 d 随机分为5 组， 每组6只， 分别为 阴性对照组( 蒸馏水) ， C d C l : 低、 中、 高剂量组 ( 0 . 8 m g / k g , 0 . 4 0 m g / k g 和2 . O O m g / k g ) ， 阳性对照 组( E 2 0 . 0 8 m g / k g ， 以花生油为溶剂) ， 给药容积为 2 . O m l / k g 体重， 每天腹腔注射一次， 连续3 d o 1 . 4 . 3 取材和制片 最后一次药后2 4 h ， 称重， 颈 椎脱臼处死大鼠， 处死前2 h 每只大鼠腹腔注射秋 水仙素4 m g /
14、k g ， 使细胞分裂停留于有丝分裂中期。 迅速取出子宫， 称重后， 于子宫中段垂直于子宫角 长轴朝子宫体方向切取约l c m子宫组织， 经B o u i n s 液固定， 在2 4 h 内， 用体积分数为7 0 %乙醇洗涤直 至苦味酸的黄色消失( 加人少量氨水以加速褪 色) 。常规石蜡包埋， 一半切片进行常规H E 染色; 野， 每个视野计数4 0 个染色均匀、 背景清晰的细 胞。 A g 一 N O R s 为黑色颗粒， 位于核仁中与细胞核 内( 细胞核背景呈淡黄色) ， 一种在主核仁中呈团 块状， 一种在卫星核仁中呈较小的银染颗粒状。 计数4 0 0 个细胞中A g 一 N O R s
15、颗粒数， 几个颗粒聚 集在一起时计数为 1 个颗粒。计算每个细胞银染 颗粒的平均值。每个样本观察2 张片子， 结果取平 均值。 1 . 6 统计学分析有丝分裂指数方差不齐， 先进 行对数转换， 然后应用S P S S 1 0 . 0 统计软件对资料 进行单因素方差分析， 各组资料以( z 士 、 ) 表示， 取 。二 0 . 0 5 为显著性检验水准。嗜银颗粒数方差不 齐， 进行对数转换后方差仍不齐， 因而采用非参数 检验( M a n 一 W h i t n e y 检验) 。 2 结果 2 . 1 有丝分裂指数C d C l : 对去卵巢S D大鼠子 宫内膜细胞有丝分裂指数的影响见表 t
16、o 由 表1 可见， C d C l : 中、 高剂量组M I 均高于阴 ,t 对照组， 差异有统计学意义( P 0 . 0 5 ) 。 2 . 2 A g 一 N O R s 颗粒数 C d C l 2 对去卵巢S D 大鼠 子宫内 膜细胞A g 一 N O R s 颗粒数的影响见表2 0 由 表2 可见， C d C l : 各剂量组去卵巢大鼠 子宫 内 膜A g 一 N O R s 颗粒数随着染毒剂量的增加而递 增， S p e a r m a n 相关分析表明C d C l 2 各剂量组间具有 相关性( P 0 . 0 5 ) ; 与阴性对照组相比， 仅高剂量 C d C l 2 组去
17、卵巢大鼠子宫内膜A g 一 N O R s 差异均 另一半进行硝酸银染色。 1 . 5 观察指标 1 . 5 . 1 有丝分裂指数( m i - t o t i c i n d e x , M I ) 在油镜 ( x 1 0 0 ) 下， 常规H E 染色的 每个切片随机选取计数1 0 个视野， 每个视野计数4 0 个 子宫内膜腺体细胞。记录 4 0 0 个细胞中处于有丝分裂 的细胞数， 当核膜刚消失时 即认 为 是 有 丝 分 裂 细 胞 一 。 敏 个 样 本 观 察2 张 片子， 结果取平均值。按下 式计算 M I : M I = 有丝分裂细 胞数/ 观察细胞数x 1 0 0 % 1 .
18、 5 . 2 A g 一 N O R s 颗粒数 在油镜( x 1 0 0 ) 下， 每个 切片随机选取计数1 0 个视 表1 C d C l ， 对去卵 巢S D 大鼠 子宫内 膜细胞有丝分裂指数的 影响 受试物 剂量 ( m g / k g ) 样本数 观察细胞数 有丝分裂数 范围x士、 ) 有丝分裂指数 ( %) 4550598197 nU2000 U了0了0了0乙U 0008084000 ，000， 蒸馏水 E 2 C d C l z 2 4 0 0 2 4 0 0 2 4 0 0 20 0 0 2 4 0 0 1 . 1 0- 2 . 7 0 5 . 6 0一1 3 . 7 0 1
19、. 3 0一 4 . 1 0 1 . 4 0一 4 . 8 0 1 . 1 0一5 . 9 0 1 . 8 0 1 0 . 1 6 1 0 . 0 0士0 . 8 4. 2 . 3 5 1 0 . 2 5 3 . 2 3 1 0 . 3 3 * 3 . 8 9 1 0 . 4 6* 注: 申 表示与阴性对照组比 较， 差异具有统计学意义， P 0 . 0 5 表2 C d C 1 2 对去卵巢S D 大鼠 子宫内 膜A g 一 N O R s 颗粒数的影响 受试物 剂量 ( - g / k g ) 样本数观察细胞数 A g 一 N O R s 颗 粒数 范围中位数 蒸馏水 E 2 C d C
20、1 2 6 2 1 . 1 5一1 2 . 2 6一 2 . 1 . 0 4一1 . 1 . 2 11 . 1 . 3 61 . 3 2 1 . 2 7 7 3 2 . 5 5* 4 6 1 . 3 1 3 9 1 . 3 2 5 3 1 . 4 9* 400400400000400 ，一 U6 n曰只OOnCU nU0040 ; ，八U00，山 注: M a n n 一 W h i t n e y 检验， 巾 表示与阴 性对照组比 较， 差异具有统计学意义， P 0 . 0 5 o r ， 二 0 . 7 3 4 , 尸 0 . 0 5 J o u r n a l o f Me d i c
21、a l F o r u m V o l . 2 7 N o . 2 3 D e c e mb e r 2 0 0 6 具有统计学意义( P 0 . 0 5 ) 。 3 讨论 有丝分裂指数是反映细胞分裂的重要指标， 常根据M I 的变化来判断一样细胞的增殖速率、 细 胞 周 期和 有 丝 分 裂时间 。 本实 验表明， C d C 1 2 各 剂量组M I 随着染毒剂量的增加而递增; 与阴性对 照 组相比， C d C 1 2 中、 高剂量组差异均有统计学意 义( P 0 . 0 5 ) 。此实验结果除佐证了C d C l : 具有 雌激素活性， 还进一步说明了C d C l : 的雌激素活性
22、与暴露剂量有关。 核仁组成区( N O R s ) 是细胞一定时期细胞中 出现的环型卷曲的D N A ， 主要由核糖体 R N A基因 ( r D N A ) 组成， 在R N A聚 合酶I 作用下转录核糖体 R N A ( r R N A ) ， 它具有嗜 银性， 因 此可以 用胶体银染 色技术加以检测。核仁组成区相关嗜银蛋白( a r g - y r o p h i l i c n u c l e o l a r o r g a n i z e r r e g i o n一a s s o c i a t e d p r o - t e i n s , A g 一 N O R s ) 是被硝
23、酸银染色的N O R s 区， 由 某些 染色 体上聚集的 蛋白 质组成 即 具有转录 活性的r 一 D N A区域周围的酸性非组蛋白( B 2 3 蛋 白和C 2 3 蛋白) ， 主要生物学功能为参与调控核 糖体前R N A的转录、 加工和装配或调节R N A聚合 酶I 亚单位， 起维持R N A 链伸展的作用， 可以 反映 核仁结构与功能的变化， 还可以作为细胞r 一 D N A 转录 活性的 标志物a - s ， 是反映细 胞增殖的良 好指 标， A g 一 N O R s 的 含量可以反应r 一 D N A转录活性 的高低。 本研究通过A g 一 N o R s 这个敏感指标， 观 察
24、C d C 1 2 的雌激素活性。结果表明， C d C 1 2 各剂量 组A g 一 N O R s 随 着染毒剂量的 增加而递增， 且呈剂 量一 效应关系; 与阴性对照组相比， 同样表现为高 剂量C d C l : 组A g 一 N O R s 差异均有统计学意义( P 0 . 0 5 ) 。 亦 佐证了C d C 1 2 在 高 剂时 具有 雌 激素活 性。 本实验同时也表明用子宫上皮细胞 M I 和 A g 一 N O R s 作为反映细 胞增殖的 敏 感指 标检测化学 物的雌激素活性， 比用子宫增重等器官和组织学 水平的指标更为敏感。因此， 可以将M l 作为检测 环境化学物雌激素活
25、性的体内试验方法， 以弥补 子宫增重试验的不足。 参考文献 申 立军， 周袁芬， 金泰庚. 锅雌激素样作用的实验研究 仁 J . 劳动医学， 2 0 0 1 , 1 8 ( 2 ) : 6 7 - 6 9 S t o i c a A, K a t z e n e l l e n b o g e n B S , M a rt i n M B . A c t i v a t i o n o f e s t r o g e n r e c e p t o r 一 a l p h a b y t h e h e a v y m e t a l c a d m i u m 仁 J . M o l E n
26、 d o c r i n o l , 2 0 0 0 ， 1 4 ( 4 ) : 5 4 5 - 5 5 3 G u e v e l R L , P e t i t F G , G o f f P L , e t a l . I n h i b i t i o n o f r a i n b o w t r o u t ( O n c o r h y n c h u s m y k i s s ) e s t r o g e n r e c e p t o r a c t i v i t y b y c a d m i u m 仁 J . B i o l R e p r o d , 2 0 0
27、 0 , 6 3 : 2 5 9 - 2 6 6 李煌元， 张文昌， 闻平， 等. 锡对大鼠子宫雌激素受体影 响的体外研究仁 J . 中 华劳动卫生职业病杂志， 2 0 0 5 , 2 3 ( 1 ) : 1 6 - 1 9 2 0 0 6 -0 8 -0 9收稿 ( 接1 0页) 了患者对痛苦经历的记忆 4 。在 5 m i n 时A组的镇静效果非常明显， 与咪哩安定起 效时间相一致; 在6 0 m i n 时B组镇静评分优于A 组， 这可能与咪哇安定作用时间较短有关。对于 术中牵拉反应， 两组均有效， 但A组的良 好率明显 高于B 组， 具有更强的抗盆腔牵拉反应作用， 与 M i l l
28、e r 等 研 究发现布托啡诺可能更多地作用于 女性患者的K 受体靶位， 起到良好的镇痛作用， 同 时又没有林 受体激动后产生的诸多不良 反应是否 有关还需进一步验证。另外， 有不少报道， 一些患 者在使用咪哇安定后可发生烦躁现象且与其使用 剂量密切相关 5 。 本实验未有躁动出现， 可能与 用量较小及配伍了镇痛药有关。目 前， 布托啡诺 还不属于限制类麻醉精神药物， 无需专人管理， 使 用更便捷。 综上所述， 咪噢安定联合布托啡诺作为硬膜 外麻醉的辅助用药， 效果满意， 不良反应少， 使用 方便。 但仍存在轻度的呼吸循环抑制， 因此静脉 注射时要缓J漫， 并严密观察生命体征指标， 建议用 药
29、前进行适当的扩容治疗， 常规吸氧， 同时配备有 急救措施。只要加强术中管理， 仍不失为一种较 理想的硬膜外辅助用药， 完全可以替代传统的杜 非合剂。 参考文献 肖 少华. 小剂量咪达哩化用于围术期镇静 J . 医学综 述， 2 0 0 5 , 1 1 ( 6 ) : 5 3 6 - 5 3 7 张象麟 药物临床信息参考 M . 2 0 0 5 版 四川: 四川科 学技术出版社， 2 0 0 5 : 1 1 9 8 刘存明， 张国楼， 王忠云， 等. 咪哇安定辅助区域麻醉和 镇静深度及用量的探讨 J . 临床麻醉学杂志， 2 0 0 5 , 2 1 ( 1 ) : 2 0 - 2 2 黄宇光，
30、罗爱伦. 麻醉科分册【 M . 北京: 中国协和医科 大学出版社， 2 0 0 0 : 6 8 - 7 2 M i ll e r P L , E r n s t A A . S e x d i ff e r e n c e s i n a n a l g e s i a ; a r a n - d o m i z e d t r i a l o f m u v e r s u s k a p p a o p i o i d a g o n i s t s J J . S o u t h M e d J , 2 0 0 4 , 9 7 ( 1 ) ; 3 5 - 4 1 2 0 0 6 - 1 0 - 1 0 收稿