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1、课题 3 血红蛋白的提取和分离 一、选择题 1、凝胶色谱分离法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是( ) A、改变蛋白质分子通过凝胶时的路径 B、吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度 C、将酶或纽胞固定在凝胶中 D、与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度 2、下列各项中，一般不影响凝胶色谱法分离蛋白质中的分离度的是( ) 来 A、层析柱高B、层析柱的直径 C、缓冲溶液D、样品的分布 3、SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是( ) A、蛋白质分子所带的电荷 B、蛋白质分子的形状 来C、蛋白质分子的相对分子质量 D、缓 冲溶液的pH 4、为
2、了提取血红蛋白，从学校附近的屠宰场索取新鲜的猪血，对猪血处理的正确操作是 A、要在采血容器中预先加人抗凝血剂柠檬酸钠 B、取血回来后，马上进行高速长时问离心 C、将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌 D、重复洗涤直到上清液呈红色为止 5、下面说法不正确的是( ) A、在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH 基本不变 B、缓冲溶液通常由12 种缓冲剂溶解于水中配制而成 C、电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 D、透析袋能使大分子自由进出，而将小分子保留在袋内 6、蛋白质的提取和分离分为哪几步( ) A、样品处理、凝胶色谱操作、SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳 B、
3、样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C、样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D、样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 7、洗涤红细胞时，离心所采用的方法是 A、低速长时间离心B、低速短时间离心 C、高速长时间离心D、高速短时间离心 8、凝胶色谱法分离蛋白质中使用的凝胶是交联葡聚糖凝胶(Sephadex G 一 75)，其中 G、 75 的含义为( ) A、G 表示凝胶的使用量，75 表示加 25 g 水 B、G 表示凝胶的交联程度，75 表示需加热到75 C、G 表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围，75 表示每克凝胶膨胀时吸水7、5g D、G 表示凝胶的膨胀体积,75 表示每克凝胶膨胀时体积可达75c
4、m 3 二、非选择题 9、下面是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品的加入(图 I)和洗脱 (图 )示 意图，请据图回答下列问题。 (1)在加样示意图中，正确的加样顺序是。 (2)用吸管加样时，应注意正确操作，分别是。贴着管 壁加样、。 (3)等样品。时，才加入缓冲 液。 待接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每mL 收集一管，连续收集。 10、PCR技术可扩增DNA 分子，电泳技术是将待测样品放在光滑的凝胶薄膜上，并加上直 流电场， 可利用分子带电荷不同分离和分析氨基酸和多核苷酸片段等有机物。这两项技术综 合应用于现代刑侦，可以获得最可靠的证据。如图是一次寻找嫌犯的测试结果：图申是把遗 迹中含有21
5、 个氨基酸的多肽进行水解，将氨基酸混合物进行电泳的结果；图乙是通过提取 罪犯 B 遗迹 DNA 和四位嫌犯的DNA 进行扩增， 并采用特定限制酶处理后进行电泳所得到的 一组 DNA 指纹图谱。 (1)在同一电场下，由于蛋白质或DNA 的以及、 不同而产生不同的迁移方向或速度，从而实现样品的分离。(2)在电泳 过程中，带电分子会向着的电极移动。 (3)由图甲得知，多肽由种氨基酸组成；由图乙可知B最可能 的对象是。 11、(能力拔高题 )测定蛋白质的相对分子质量是研究蛋白质的一项重 要技术， 常用凝胶 (由多孔性网状物质构成的颗粒，其孔能让小分子物 质进出 )过滤法测定， 即在一根垂直的玻璃柱中装
6、满凝胶，然后在其上 端加入蛋白质混合液并用缓冲液进行洗脱。根据各种蛋白质洗脱的先后顺序可以比较它们的 相对分子质量大小。利用下列材料,鉴定样品液 (含有A、 B 两种相对分子质量大小不同的蛋 白质 )中蛋白质相对分子质量的大小。 材料用具 :支架台、符合要求的凝胶柱、吸管、缓冲液洗脱瓶、带有开关的玻璃导管、橡胶 软管、夹子、试管若干、足量的缓冲液等。 (1)实验步骤： 加样前先。 加 样：。 洗脱：。 收集并检测它们洗脱的先后顺序。 (2)实验结果及结论：。 (3) 请用坐标图表示出不同蛋白质相对分子质量大小与洗脱液体积的关系： 12、(2008山东高考 )科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白质具有极强的 抗菌能力，受到研究者重视。 (1)分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的、大小及形状不同，在 电场中的不同而实现分离。 (2)可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛肉膏和 蛋白胨主要为细菌生长提供和。 (3)分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种 培养基中菌落的，确定该蛋白质的抗菌效果。 (4)细菌培养常用的接种方法有和。实验结 束后，对使用过的培养基应进 行处理。