输血科交叉配血试验标准操作规程.docx

1、输血科交叉配血试验标准操作规程1、目的：规范实验室工作人员的操作程序，确保实验过程及结果的准确性与可靠性。2、范围：本规程适用于本实验室红细胞意外抗体筛查与鉴定试验操作。3、职责3.1工作人员对进行红细胞意外抗体筛查和鉴定试验技术操作应熟练掌握。4、交叉配血（输血相容性/配合性）试验4.1 基本原理交叉配血主要是检查受血者血清中有无破坏供血者红细胞的抗体，使受血者与供血者的血液间没有可测的不相配合的抗原、抗体成分。交叉配血的要求是选择的技术尽可能多地检测出具有临床意义的抗体（包括不配合的IgM和IgG抗体），在任何步骤均不出现溶血或同种凝集的结果，最大限度地减少抗体的漏检，防止溶血性输血反应的

2、发生，方可将供者的血液成分输给受血者。完整的交叉配血试验应包括：1）复查收到的受血者血样的AB0、Rh血型以及抗体筛查的结果。2）查阅受血者以前的血型检查记录，如与此次结果不符，应及时分析原因。3）选择预先进行血型检查的合格献血者作交叉配血试验。4.2 基本内容交叉配血试验包括下述几项1.1 侧配血：受血者血清与供者红细胞反应，检测受血者体内是否存在针对供者红细胞的抗体。1.2 侧配血：受血者红细胞与供者血清反应，检测供者血液中是否存在针对受血者红细胞的抗体。1.3 身对照：受血者红细胞与自身血清反应，以排除自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红细胞缗钱状假凝集等干扰试验结果判读因素。交叉配血反应

3、体系均应在37。C孵育。使用能检出不完全抗体的配血方法进行交叉配血。除了使用盐水介质法外，还应使用能检出其他血型系统抗体的方法，例如:抗球蛋白试验，酶技术、聚凝胺法、微柱凝胶卡式检测法，白蛋白介质、低离子强度介质或其他合适的促凝等方法。1.4 盐水介质法1.4.1 方法原理盐水介质交叉配血试验（又称立即离心配血试验），是根据IgM抗体在盐水介质中可与红细胞上对应抗原结合产生肉眼可见凝集的特点，将献血者红细胞与受血者血清（或血浆）、献血者血清（或血浆）与受血者红细胞在盐水介质中进行抗原抗体反应，以检测受血者（或献血者）血液中是否存在针对献血者（或受血者）红细胞抗原的IgM抗体，即可以发现临床上最

4、重要的ABO不配合性。此方法可以检测出IgM,不能检测出IgG（完全抗体IgG极其罕见，临床日常操作不用考虑）。1.4.2 仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、阅片灯箱、显微镜、试管架；2）试剂：0.9%生理盐水；3）耗材；硬试管、一次性塑料滴管、载玻片、记号笔等。1.4.3 标本要求1）推荐使用EDTA抗凝静脉血+不抗凝静脉血各一管，静脉血管条件不好或紧急情况下也可以使用动脉血，标本采集量3mL;2）标本标识清晰、准确、完整，能反映受血者当前的免疫学状态；3）标本质量符合要求，无血液稀释、细菌污染，离心后无溶血及明显乳糜；4）标本原则上在检测前不保存，收到标本后应

5、及时进行相关检测。1.4.4 操作步骤1）用0.9%生理盐水将受血者和供血者的抗凝血配成2%-5%的红细胞悬液（推荐生理盐水三洗红细胞，市面上有专门用于三洗红细胞的细胞洗涤离心机，可省去人工操作）；2）按标记主测管加受血者血清2滴和供血者红细胞悬液1滴；“次侧管加供血者血清2滴和受血者红细胞悬液1滴。3）混匀，使用血型血清学专用离心机100Og,离心15s；4）轻轻摇动试管，观察有无凝集或溶血，必要时显微镜下观察，并记录结果。1.4.5 结果判定与解释D结果判定标准阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血；阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。1.4.6 室内质控1）基本原则：每次质控试验应

6、至少选择一个受血者质控品（含有IgM抗体，抗体强度在2+左右），一个抗原阳性献血者质控品和一个抗原阴性献血者质控品。2）频次要求：推荐每批次试验都进行室内质控。至少在每天试验开始前、试验中更换试剂批号后，应重新做质控试验。3）操作要求：受检标本与质控品标本应采用完全相同试验操作步骤。4）可以选择商品化质控品，也可以利用实验室标本资源自制质控品。5）质控结果分析：质控结果与预期靶值相符，结果在控，受检标本检测结果可用；质控结果与预期靶值不相符，结果失控，受检标本检测结果不可用，需查找原因、纠正影响因素后，重复检测。1.4.7 室间质评：不适合单独参加室间质评活动。1.4.8 注意事项：D盐水介质

7、交叉配血试验是临床输血前最基本的相容性试验，能检测IgM类血型抗体，包括一些不具有临床意义的抗体，如冷凝集素抗-I及抗-IH等，一般不能检测出IgG类血型抗体。2）除完全排除献血者、受血者血清IgG类意外抗体存在的情况下，不能单独使用盐水介质进行交叉配血试验，以防止IgG类意外抗体漏检。3）盐水介质交叉配血试验出现不相合时，应重新对献血者、受血者ABO血型进行鉴定，以排除ABO血型鉴定错误。4）注意试验过程中温度、离心力、离心时间、红细胞浓度、抗原抗体比例、试管摇动力度等因素的影响。注意立即离心，及时观察结果。5）注意药物治疗对交叉配血结果的影响，如患者接受右旋糖酎、聚维酮（PVP）等治疗，应

8、对红细胞进行洗涤；如接受肝素治疗，应用鱼精蛋白中和；如怀疑存在血清中补体对实验结果的干扰，可预先进行补体灭活。6）怀疑存在自身抗体、红细胞缗钱状等干扰时，应加做自身对照试验加以鉴别。7）为防止冷凝集素引起的凝集反应，应严格控制试验室温度在20-24C范围内，以免影响结果判断。1.5 聚凝胺法1.5.1 方法原理同红细胞意外抗体筛查试验聚凝胺法。1.5.2 仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、阅片灯箱、显微镜、试管架；2）试剂：低离子介质溶液（LIM）、聚凝胺试剂溶液（PoIybreneReagent）重悬液、生理盐水。3）耗材；硬试管、一次性塑料滴管、载玻片、记号笔

9、等。1.5.3 标本要求同本节盐水介质法要求。1.5.4 操作步骤1）用0.9%生理盐水将受血者和供血者的抗凝血配成2%-5%的红细胞悬液（推荐生理盐水三洗红细胞，市面上有专门用于三洗红细胞的细胞洗涤离心机，可省去人工操作）；2）取洁净试管两支，分别标明主侧和次侧。按标记主测管加受血者血清2滴和供血者红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清2滴和受血者红细胞悬液1滴。3）每管中加入一定量的低离子介质溶液，混匀，使用血型血清学专用离心机1000g,离心15s,弃上清液，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体，轻摇试管，肉眼观察有无凝集，如无凝集必须重做试验。4）确认试管中存在凝集的红细胞扣之后，每管中加

10、入2滴重悬液。轻轻摇动试管，观察有无凝集或溶血，必要时显微镜下观察，并记录结果（特别注意的是滴加重悬液到观察结果须在一分钟内完成）。1.5.5 结果判定与解释D结果判定标准阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血；阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。1.5.6 室内质控1）基本原则：每次质控试验应至少选择两组质控物。一组包括：一个受血者质控品（含有IgM抗体，抗体强度在2+左右），一个阳性供者质控品和一个阴性供者质控品。另一组包括：一个受血者质控品（包括IgG抗体，反应强度在2+左右），一个阳性供者质控品和一个阴性供者质控品。2）频次要求：推荐每批次试验都进行室内质控。至少在每天试验开始前

11、试验中更换试剂批号后，应重新做质控试验。3）操作要求：受检标本与质控品标本应采用完全相同试验操作步骤。4）可以选择商品化质控品，也可以利用实验室标本资源自制质控品。5）质控结果分析：质控结果与预期靶值相符，结果在控，受检标本检测结果可用；质控结果与预期靶值不相符，结果失控，受检标本检测结果不可用，需查找原因、纠正影响因素后，重复检测。1.5.7 室间质评按照要求参加国家级或省级输血相容性检测室间质量评价活动交叉配血项目。出现成绩不合格时，实验室应停止该检测项目，认真分析、查找原因，制定并实施整改、预防措施，在得出满意评估结果后，方可重新开展本检测项目。1.5.8 注意事项1）聚凝胺法对Kel

12、l血型系统的抗体（例如抗-K）敏感性低，容易发生漏检。2）注意本方法存在的非特异性因素。试验过程中加样不准、反应时间不够、离心力不够及观察结果时振摇过重或观察时间不超过1分钟都会造成假阴性。用力振荡或放置时间过长、可能会导致弱凝集消失。可疑试验结果需在显微镜下观察，增加了结果判断的不确定性。对弱反应容易漏检，但假阳性相对较少。3）某些治疗过程、药物可影响本法交叉配血试验结果。透析、介入、体外循环等治疗后，患者血清（浆）中含大量肝素，可能会干扰试验结果。消化道出血患者使用的酚磺乙胺（止血敏）：酚磺乙胺在水溶液中带负电荷，能使红细胞Zeta电位上升，致可逆凝集反应抑制，多加入聚凝胺溶液也无法排除干

13、扰，遇到此类患者，应在使用酚磺乙胺4-6小时后，重新采集血液标本做交叉配血试验或直接选择其他实验方法。1.6 酶法1.6.1 方法原理由于红细胞表面富含的唾液酸带有大量负电荷，红细胞所处液体环境中的阳离子会被红细胞表面负电荷所吸引，在红细胞周围形成双层离子云，产生Zeta电位，使红细胞表面负电荷减少，Zeta电位降低，红细胞间排斥力减弱、距离缩短，促使IgG型血型抗体分子的两个抗原结合位点均能分别结合具有相应抗原的红细胞，从而使红细胞发生凝集反应。由于酶法会导致某些抗原抗体反应性减弱或消失，如M、N、FyaFyb、Xga、JMH、Ch等抗原，故酶法现已不常规用于交叉配血试验。酶法推荐使用于Rh

14、等血型系统复合抗体的鉴定。1.6.2 仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、37恒温水浴箱、阅片灯箱、显微镜、试管架；2）试剂：0.9%生理盐水、1%菠萝蛋白酶溶液、2%-5%RhD阳性O型红细胞悬液、人源性IgG型抗-D血清、正常人AB型血清。3）耗材；硬试管、一次性塑料滴管、载玻片、记号笔等。1.6.3 标本要求同本节盐水介质法要求。1.6.4 操作步骤以菠萝蛋白酶一步法为例。1）用0.9%生理盐水将受血者和供血者的抗凝血配成2%-5%的红细胞悬液（必要时三洗红细胞）；2）本实验需要在“主侧、次侧的基础上添加阴性、阳性及自身对照。3）按标记主测管加受血者血清2滴和

15、供血者红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清2滴和受血者红细胞悬液1滴。阳性对照管中加入2滴人源性IgG型-D和1滴2%-5%RhD阳性O型红细胞悬液。阴性对照管中加入2滴正常人AB型血清（或血浆）和1滴2%-5%RhD阳性O型红细胞悬液。自身对照管中加入2滴受血者血清（或血浆）和1滴2%-5%受血者红细胞悬液。4）除自身对照管以外，在上述各管中分别加入1滴1%菠萝蛋白酶溶液。5）将上述各管轻轻混匀，置37。C恒温水浴箱内孵育15分钟。孵育完成后从水浴箱取出试管并轻轻混匀，使用血型血清学专用离心机IOoOg,离心15s。6）轻轻摇动试管，观察有无凝集或溶血，必要时显微镜下观察，并记录结果。1.6.

16、5 结果判定与解释D结果判定标准阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血；阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。2）结果解释自身对照、阴性对照管均无溶血和凝集，阳性对照管出现凝集，主、次侧管均无溶血和凝集，表示受血者和供血者血液酶介质交叉配血相合。自身对照、阴性对照管均无溶血和凝集，阳性对照管出现凝集，主侧和（或）次侧管内凝集和（或）溶血，表明受血者和供者血液酶介质交叉配血主侧和（或）次侧不相合。自身对照和（或）阴性对照管出现溶血或凝集，和（或）阳性对照未出现凝集，检测结果无效，需要进一步查找原因，必要时调整试验条件、更换试剂、重复实验。1.6.6 室内质控通过设置阴性对照和阳性对照来实现室

17、内质控。也可以使用商品化交叉配血实验室内质控品，具体参照本节凝聚胺法。1.6.7 室间质评：不适合单独参加室间质评活动。1.6.8 注意事项：1）酶介质交叉配血试验对Rh、Kidd、PIPk、I、Lewis等血型系统较敏感，对Rh血型系统尤为显著。2）红细胞经酶处理后，可以增强某些抗原抗体反应活性，但也会破坏红细胞的一些抗原结构，导致抗原抗体反应性的减弱或消失,如M、N、Fya、FybXga、JMH、Ch等抗原，故不推荐酶法常规用于交叉配血试验。3）红细胞经酶处理后可以改变红细胞悬液的物理性质，在交叉配血试验中可能出现非特异性自身凝集，因此必须进行对照试验。4）酶活性易受温度、保存时间等影响，

18、试验中酶试剂的量应严格按照实际说明书加入，量过少可致假阴性，量过多可致红细胞自身凝集而产生假阳性。5）本法试验结果受温度、离心力、离心时间、红细胞浓度、抗原抗体比例、试管摇动力度、介质、PH等多种因素的影响，易出现假阴性和假阳性。6）交叉配血试验通常采用一步酶法，虽不如二步酶法敏感，但操作简单。1.7 盐水抗人球蛋白法1.7.1 方法原理在盐水介质中多数IgG血型抗体与红细胞膜上相应血型抗原结合后，只能发生致敏反应而不能出现肉眼可见的凝集反应。当加入抗人球蛋白试剂后，该抗体（二抗）可与多个包被在红细胞膜上的IgG类抗体（一抗）的Fc段结合，通过抗人球蛋白的桥联作用，使致敏红细胞发生肉眼可见的凝

19、集反应。1.7.2 仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、37。C恒温水浴箱、阅片灯箱、显微镜、试管架。2）试剂：0.9%生理盐水、抗人球蛋白试剂。3）耗材；硬试管、一次性塑料滴管、载玻片、记号笔等。1.7.3 标本要求同本节盐水介质法要求。1.7.4 操作步骤1）用0.9%生理盐水将受血者和供血者的抗凝血配成2%-5%的红细胞悬液（推荐生理盐水三洗红细胞，市面上有专门用于三洗红细胞的细胞洗涤离心机，可省去人工操作）；2）取洁净试管两支，分别标明主侧和次侧。按标记主测管加受血者血清2滴和供血者红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清2滴和受血者红细胞悬液1滴。3）混匀，使用

20、血型血清学专用离心机IOoOg,离心15s,轻摇试管，肉眼观察有无凝集和溶血，记录结果。4）确认试管中无凝集无溶血后，将试管置37水浴箱内孵育30-60分钟。5）孵育后从水浴箱中取出试管,经血型血清学专用离心机100Og,离心15s,轻轻摇动试管，观察有无凝集或溶血，并记录结果。6）若无凝集无溶血，继续分别用生理盐水洗涤红细胞3-4次，末次弃尽上清液。7）在各管中分别加入2滴抗人求蛋白试剂，经血型血清学专用离心机100Og,离心15s,轻轻摇动试管，观察有无凝集或溶血，并记录结果。8）若疑为弱凝集反应时，需显微镜镜下观察结果，并记录。1.7.5 结果判定与解释阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血

21、阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。1.7.6 室内质控具体参照本节凝聚胺法。1.7.7 室间质评具体参照本节凝聚胺法。1.7.8 注意事项：1.8 具体参照红细胞意外抗体筛查试验抗人球蛋白法。1.9 1.lSS抗人球蛋白法1.9.1 方法原理在盐水抗人球蛋白法基础上，在反应体系中添加LISS液（或使用LISS液替代生理盐水配制红细胞悬液），可以使红细胞抗原抗体反应孵育时间缩短至IO-15分钟，此方法即为LISS抗人球蛋白法。1.9.2 仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、37恒温水浴箱、阅片灯箱、显微镜、试管架。2）试剂：0.9%生理盐水、低离子盐溶液

22、LlSS）、抗人球蛋白试剂。3）耗材；硬试管、一次性塑料滴管、载玻片、记号笔等。1.9.3 标本要求同本节盐水介质法要求。1.9.4 操作步骤1）用0.9%生理盐水将受血者和供血者的抗凝血配成2%-5%的红细胞悬液（推荐生理盐水三洗红细胞，市面上有专门用于三洗红细胞的细胞洗涤离心机，可省去人工操作）；2）取洁净试管两支，分别标明主侧和次侧。按标记主测管加受血者血清2滴和供血者红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清2滴和受血者红细胞悬液1滴。3）混匀，使用血型血清学专用离心机IOoOg,离心15s,轻摇试管，肉眼观察有无凝集和溶血，记录结果。4）确认试管中无凝集无溶血后，分别滴加LlSS液4滴，将

23、试管置37水浴箱内孵育15分钟。5）孵育后从水浴箱中取出试管,经血型血清学专用离心机100Og,离心15s,轻轻摇动试管，观察有无凝集或溶血，并记录结果。6）若无凝集无溶血，继续分别用生理盐水洗涤红细胞3-4次，末次弃尽上清液。7）在各管中分别加入2滴抗人求蛋白试剂，经血型血清学专用离心机100Og,离心15s,轻轻摇动试管，观察有无凝集或溶血，并记录结果。8）若疑为弱凝集反应时，需显微镜镜下观察结果，并记录。1.9.5 结果判定与解释阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血；阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。1.9.6 室内质控具体参照本节凝聚胺法。1.9.7 室间质评具体参照本节凝聚

24、胺法。1.9.8 注意事项：具体参照红细胞意外抗体筛查试验抗人球蛋白法。1.10 PEG抗人球蛋白法1.10.1 方法原理聚乙二醇（PoIy-ethyleneglycol,PEG）可以降低抗体分子与水分子之间的空间排斥力，增加红细胞与抗体间的分子结合机会，使抗原和抗体紧密接触，促进抗原抗体的结合反应。PEG能够提高有临床意义抗体的检出能力，在盐水抗人球蛋白法的基础上联合使用PEG,即PEG抗人球蛋白法。1.10.2 仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、37恒温水浴箱、阅片灯箱、显微镜、试管架。2）试剂：0.9%生理盐水、20%聚乙二醇溶液（PEG）、抗人球蛋白试剂。

25、3）耗材；硬试管、一次性塑料滴管、载玻片、记号笔等。1.10.3 标本要求同本节盐水介质法要求。1.10.4 操作步骤1）用0.9%生理盐水将受血者和供血者的抗凝血配成2%-5%的红细胞悬液（推荐生理盐水三洗红细胞，市面上有专门用于三洗红细胞的细胞洗涤离心机，可省去人工操作）；2）取洁净试管两支，分别标明主侧和次侧。按标记主测管加受血者血清2滴和供血者红细胞悬液1滴；次侧管加供血者血清2滴和受血者红细胞悬液1滴。3）混匀，使用血型血清学专用离心机100og,离心15s,轻摇试管，肉眼观察有无凝集和溶血，记录结果。4）确认试管中无凝集无溶血后，分别滴加PEG溶液4滴，将试管置37。C水浴箱内孵育

26、15分钟。5）孵育后从水浴箱中取出试管，不要离心。观察有无溶血和凝集，再分别用生理盐水洗涤红细胞3-4次，末次弃尽上清液（千万不能孵育后离心看结果，会导致假阳性结果）。6）在各管中分别加入2滴抗人求蛋白试剂，经血型血清学专用离心机100Og,离心15s,轻轻摇动试管，观察有无凝集或溶血，并记录结果。8）若疑为弱凝集反应时，需显微镜镜下观察结果，并记录。1.10.5 结果判定与解释阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血；阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。1.10.6 室内质控具体参照本节凝聚胺法。1.10.7 室间质评具体参照本节凝聚胺法。1.10.8 注意事项1）加入不同分子量、不同浓

27、度PEG试剂，试验孵育时间有所不同，应参照试剂使用说明书的推荐条件。孵育完成后要立即洗涤，避免离心，因为由PEG引起的红细胞非特异性凝集不易散开。2） PEG可提高温自身抗体的反应性，因此有利于血清中弱的自身抗体的检出。但是，在检测同种抗体时，如果被检测物中存在自身抗体，则会对试验产生不良的影响。此时，可以采用低离子或盐水间接抗人球蛋白试验，以消除自身抗体对同种抗体的影响。3）当被检物中血清球蛋白异常升高时，加入PEG后，可能会引起血清蛋白的沉淀。因此，红细胞至少洗涤4次，以避免血清蛋白的沉淀影响之后的抗人球蛋白试验。4）注意实验过程中温度、离心力与离心时间、红细胞浓度与抗原抗体比例、试管摇动

28、力度等因素对试验结果的影响。1.11 微柱凝集抗人球蛋白法1.11.1 方法原理详见红细胞以外抗体筛查试验章节微柱凝集抗人球蛋白法。492仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、微柱凝集卡专用离心机、微柱凝集卡专用孵育器、微量移液器、阅片灯箱、显微镜、试管架、全自动血型检测设备（条件具备时）。2）试剂：微柱凝集抗人球蛋白卡、稀释液。3）耗材；硬试管、一次性塑料滴管、微量移液器吸头、记号笔等。4.9.3 标本要求同本节盐水介质法要求。494操作步骤D手工操作：严格按照微柱凝集抗人球蛋白卡使用说明书的要求进行操作。2）全自动检测：严格按照全自动检测设备使用说明书的要求进行操作。4.9.5 结果判

29、定与解读详见红细胞以外抗体筛查试验章节微柱凝集抗人球蛋白法。4.9.6 室内质控具体参照本节凝聚胺法。4.9.7 室间质评具体参照本节凝聚胺法。4.9.8 注意事项D该方法具有操作标准化、标本用量少、重复性好、敏感度高、结果判读客观且可长期保存、自动化程度高等优点，但孵育、离心时间较长，通常不适用于急诊条件下的交叉配血试验。2）试验前，应检查介质卡封口是否完整、介质卡液面是否干涸、介质中是否有气泡，如存在此类情况则不能使用，使用前必须离心。3)标本血清中未完全去除纤维蛋白或存在补体的干扰、标本抗凝不完全，或被细菌污染，标本保存时间过长或出现红细胞破碎等均可能出现假阳性结果。4)交叉配血试验主侧

30、不相合，可能是由于受血者血清(浆)中含有意外抗体或供者红细胞DAT阳性；次侧不相合，可能是由于供者血浆中含有意外抗体或受血者红细胞DAT阳性。出现不相合结果时，应加做自身对照试验，以判断是否存在自身抗体。5)建议离心后立即判读结果，不要将卡水平放置。6)此法在37。C条件下M能会漏检某些低效价的IgM抗体，当怀疑有此类抗体影响交叉配血时，应增加盐水介质交叉配血。5、交叉配血试验结果解释及处理方案5.1 抗体筛查阴性，交叉配血相容：绝大部分标本抗体筛查阴性，交叉配血也是相容的。但抗体筛查试验阴性也不能保证血清中就不含有临床意义的抗体。5.2 抗体筛查阴性，主侧交叉配合试验阳性(1)复查血型：受血

31、者或供血者的ABO、Rh定型试验不正确。(2)主侧凝集类B抗原：通过复查血型以及唾液血型物质鉴定出其正确血型，再选择合适的血液再次进行交叉配合试验。(3)血清中可能含有一种ABO抗体，必要时可以做ABO亚型鉴定。(4)受血者血清中含有同种抗体，但筛查红细胞上无此抗原存在。可将受血者的血样标本与多个供血者的血样标本进行配合试验,直到找到无相应抗原的供者血液。5.3 抗体筛查试验阳性，主侧交叉配合试验阳性(1)自身对照试验阴性：受血者体内有同种不规则抗体，可采取下列办法：对受血者血清做抗体特异性鉴定，对供血者血液标本做抗原鉴定，选择抗原阴性的血液重新做交叉配合试验；如果抗体特异性无法确定，应选择交

32、叉配血试验阴性的血液发出。(2)自身对照试验阳性：受血者血清内可能有自身抗体或同时存在不规则抗体。自身抗体导致的配血不合是比较复杂的，受血者血清中有非特异性的自身抗体,红细胞也常被抗体或补体成分致敏，导致主、次侧均不合。(三)交叉配血试验的影响因素在交叉配血试验中，可能会出现某些问题，特举例如下。(1)缗钱状形成:被检血清在室温和37。(:中,使红细胞出现了缗钱状假凝集,造成配血结果误判。常见于巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、霍奇金病,以及其他表现为血沉加速的一些病例。(2)在室温条件下，配血结果阳性，说明受血者血液中可能存在自身抗体或IgM类同种抗体。(3)出现抗体筛查试验阴性和交叉配血结果阳性的现象，提示受血者血清中可能存在未检明的抗体。(4)直接抗球蛋白试验阳性，显示受血者或供血者有自身抗体。(5)蒸储水中某些离子干扰，造成不正确的结果。(6)孵育温度不准确，造成错误结果。(7)在交叉配血试验操作过程中，应用离心力不当，造成了假阴性和假阳性。(8)在被检血清中如含有溶血性抗体，则具有相应抗原的红细胞被溶解而不是凝集，此种情况下交叉配血结果应为阳性。如果血清中存在补体而导致溶血反应，血清应灭活后再做试验。(9)红细胞不正确的洗涤和悬浮，使抗球蛋白试验出现假阴性。