1、核酸检测技术课程标准一、课程性质与任务（一）课程性质核酸检测技术是以扩增DNA或RNA为手段，从而筛查特定基因的检测技术。目前，核酸检测技术是生命科学领域中的前沿科学，其理论、技术和方法在生物、食品、微生物、医学诊断等方面发挥着越来越重要的作用，具有广阔的应用前景。核酸检测技术是为医学检验技术专业开设的一门核心专业课，本课程为理实一体课，总64学时。内容以核酸检测岗位检测项目重构和序化项目，涵盖新型冠状病毒核酸检测、结核分枝杆菌核酸检测、地中海贫血症核酸检测、乳腺癌核酸基因检测、CYP2C9基因多态性核酸检测等5个模块的内容。（二）课程任务本课程以生物化学、分子生物学等课程为前期基础的专业性课
2、程，学生需掌握分子生物学的理论知识及相关的实验技术，并需掌握感染性疾病、遗传性疾病及肿瘤个体化治疗相关的分子诊断。本课程根据医学检验专业实际工作知识能力需求，将对课程内容进行合理取舍，重点培养学生严谨的科学态度，注重突出生物大分子物质结构决定生物功能这一规律，指导学生养成对医学检验专业工作的敬畏态度。课程难易程度以适度为原则，突出检验技术的基本原理，以培养具备医学检验工作的职业能力作为确定教学内容的准则，为岗位实习夯实基础。二、课程目标与要求通过本课程的学习，培养学生掌握开展核酸检测的基本知识与技能，了解分子生物学检验检验领域的新设备、新技术、新方法，宏观上掌握核酸检测基本概念，实际应用中对核
3、酸、蛋白质等生物大分子有具体感知，能熟练操作荧光PCR、电泳等分子生物学常用检测技术，熟悉或了解感染性疾病、遗传性疾病及肿瘤个体化治疗相关的分子诊断。核酸检测技术在医学检验专业检验技术中属于较为新颖，应用日益广泛的专业知识，它高通量、快速等优点在新冠肺炎核酸检测中也有体现，所以本课程在着重培养学生具备分子生物学基础理论知识及专业检测技能的同时，也注重学生实事求是、精益求精的工作作风的培养。通过理论和技能培养进一步激发学生在未来工作中爱岗敬业，乐于奉献，吃苦耐劳、精益求精的工匠精神，并时刻牢记职业道德和为人类健康服务的奉献精神。并在此基础上达到以下培养目标。（一）素质目标1 .热爱祖国、敬业奉献
4、具有正确的世界观、人生观、价值观；2 .尊重患者、体恤老弱，具有救死扶伤的职业道德及为人类健康事业奋斗献身的人文精神；3 .严谨求实，精益求精，具有吃苦耐劳、踏实肯干的工匠精神；4 .遵纪守法、守正笃行，自觉遵守法律法规和规章制度；5 .团结协作，宽以待人，具备良好的团队合作意识。（二）知识目标1 .能够熟练说出核酸的结构特点、理化性质和功能特点；2 .能说出核酸提取、PCR扩增、荧光原位杂交的方法种类和基本原理；3 .能够描述乙型肝炎病毒、新型冠状病毒、结核分枝杆菌等临床中常见病原体核酸提取、核酸扩增的方法和步骤；4 .能够简述CYP2C9基因多态性核酸检测的原理及意义；5 .能够简述地中
5、海贫血症的核酸检测的原理及意义；6 .能够复述临床基因扩增（PCR）实验室工作规范要点。（三）能力目标1 .能够正确穿戴生物安全防护装备，做好个人防护；2 .具有正确采集和制备核酸检测标本的能力；3 .能够根据试剂盒说明书正确配置核酸提取、PCR、荧光定位杂交反应体系；4 .能正确使用和维护微量移液器、离心机、振荡仪、全自动核酸提取仪、荧光定量PCR等仪器设备完成实验操作；5 .能够利用熟练使用计算机及相关专业软件；6 .能识别和防范常见生物安全风险，开展实验室消毒和灭菌，规范处理医疗废弃物;7 .具有良好的心理调节能力以及团队合作、协调人际关系的能力。三、课程结构与内容（一）课程结构根据课程
6、目标，确定课程结构与学时安排。课程内容的选取围绕核酸检测岗位技术技能要求，融入临床基因扩增检验技术人员上岗证考核内容，包含新型冠状病毒核酸检测、结核分枝杆菌核酸检测、地中海贫血症核酸检测、乳腺癌核酸基因检测、CYP2C9基因多态性核酸检测等5个模块的内容。（二）课程内容与学时安排本课程总计64学时，建议模块一16课时，模块二12课时，模块三16课时，模块四12课时，模块五8课时。具体结构与内容及学时安排见表1。表1核酸检测技术课程结构与内容模块项目任务内容要求参考学时模块一新型冠状病毒核酸检测（16学时）任务一标本采集及运送1 .熟练进行三级防护设备的穿脱；2 .能完整复述穿脱防护设备的注意事
7、项；3 .强化生物安全意识，树立职业规范意识；4 .说出鼻咽拭子标本采集部位及注意事项；5 .熟练准确的进行鼻咽拭子标本的采集；6 .强化生物安全意识，树立国家生物安全观；7 .培养学生的爱国意识和职业责任感。4任务二核酸提取L掌握RNA理化性质及功能；2 .熟悉RNA的磁珠法提取步骤；3 .能正确使用微量移液器加样；4 .能说出PCR实验室分区及相关操作要求；5 .会使用自动化核酸提取仪。4任务三核酸扩增及结果分析1 .熟悉新冠病毒基因组特征；2 .掌握RT-PCR原理；3 .会使用自动化核酸扩增仪；4 .会进行核酸扩增参数设置；5 .能够对结果进行判读及分析。4任务四综合实训1 .说出新冠
8、病毒核酸检测RT-PCR检测原理；2 .归纳出新冠病毒核酸检测结果解读原则；3 .熟练的进行RT-PCR的上机操作；4 .正确的对检测结果进行判读；5 .强化生物安全意识，培养学生细心、耐心的职业素养。4模块二任务一L说出痰标本采集的注意事项，强化生物安全意识；2模块项目任务内容要求参考学时结核分枝杆菌核酸检测（12学时）结核分枝杆菌样本采集及核酸提取2 .熟练准确的进行痰标本采集及前处理；3 .熟悉柱提法提取DNA操作步骤；4 .培养学生严谨的工作态度。任务二RFLP法检测1 .掌握PCR及RFLP原理;2 .能够熟练配置PCR体系；3 .能够说出PCR基本步骤，掌握各步骤参数设置；4 .熟
9、悉核酸酶性质及工作条件。2任务三结果分析：琼脂糖凝胶电泳及成像解读1 .说出限制性酶切片段多态性的检测原理；2 .熟练掌握琼脂糖凝胶电泳的操作；3 .能够归纳结核分枝杆菌DNA检测结果解读原则，正确对检测结果进行判读；4 .强化生物安全意识，树立正确职业规范意识；5 .培养学生细心、耐心的职业素养。4任务四综合实训1 .说出结核分枝杆菌DNA的检测原理；2 .归纳出新冠病毒核酸检测结果解读的原则；3 .熟练的进行PCR及酶切的上机操作；4 .正确的对检测结果进行判读；5 .强化生物安全意识；6 .培养学生细心、耐心的职业素养。4模块三地中海贫血症核酸检测（珠蛋白生成障碍性贫血）（16学时）任务
10、一实验准备及标本采集与前处理1 .说出外周静脉全血标本采集的注意事项；2 .熟练准确的进行外周静脉全血标本采集；3 .学会标本前处理；4 .熟悉相应仪器设备的使用和维护。4任务二全血基因组DNA提取1 .描述外周静脉全血DNA核酸提取方法原理；2 .说出硅胶膜柱提取法的注意事项；3 .熟练掌握硅胶膜柱提取法的操作；4 .会使用自动化核酸提取仪。4任务三L了解CI珠蛋白生成障碍性贫血发病机制；4模块项目任务内容要求参考学时PCR一杂交法检测2 .能根据说明书完成PCR体系配置；3 .掌握分子杂交原理；4 .能正确输入PCR各参数。5 .强化生物安全意识，树立正确职业规范意识；任务四综合实训1 .
11、熟练准确的进行外周静脉全血标本采集；2 .熟练掌握荧光杂交仪使用方法；3 .能够正确判读PCR一荧光杂交结果；4 .培养学生严谨的工作态度及生物安全意识。4模块四乳腺癌核酸基因检测（HER2基因检测FISH）（12学时）任务一实验准备及标本采集与前处理1 .掌握癌基因及原癌基因概念，细胞癌变发生机制；2 .熟练组织标本固定步骤；3 .熟悉相应仪器设备的使用和维护；4 .熟悉石蜡标本脱蜡操作。2任务二原位荧光杂交法1 .能够说出HER2基因检测检测原理；2 .掌握原位杂交检测原理；3 .能够按照试剂盒完成原位杂交步骤；4 .强化生物安全意识。2任务三扩增HER2基因荧光结果分析1 .掌握乳腺癌h
12、er2基因扩增原理；2 .能够熟练操作荧光显微镜；3 .能够对结果进行正确判读；4 .根据结果对病例病情进行分析。4任务四综合实训1 .石蜡标本脱蜡操作；2 .完成原位杂交；3 .能够说出PCR基本步骤，掌握各步骤参数设置；4 .结果判读。4模块五华法林用药个体化核酸检测任务一全血基因组提取及PCR体系配置L说出珠蛋白生成障碍性贫血核酸检测原理；2 .能根据说明书完成PCR体系配置；3 .描述外周静脉全血DNA核酸提取方法原理；4 .说出硅胶膜柱提取法的注意事项；4模块项目任务内容要求参考学时（CYP2C9基因多态性核酸检测一测序法）（8学时）5 .熟练掌握硅胶膜柱提取法的操作；6 .会使用自
13、动化核酸提取仪。任务二PCR及sanger测序法虚拟仿真1 .能理解sanger测序的原理；2 .能正确按照实际和说明书加样；3 .能复述sanger测序测序反应步骤；4 .学会通过测序峰图进行结果判读。4（）教学活动设计参考专项实训课采用任务驱动教学法，综合实训课采用项目探究教学法，以工作任务为主线基于真实情景典型任务开展教学。专项实训课以模块一一新型冠状病毒核酸检测一一任务1标本采集为例，教学活动设计参考见表2；综合实训课以模块一一任务4综合实训为例，教学活动设计参考见表3。表2专项实训课课型1教学活动设计参考教学实施过程教学环节教学内容教师活动学生活动设计意图分组实操强化技能（25min
14、鼻咽拭子、口咽拭子标本采集实训1、考核。1 .各个小组相互采集练习，讨论提升；2 .组内考核，在学习平台填写考核表（见附件）。1 .指导各小组使用新冠病毒核酸检测试剂盒进行上机操作；2 .指导每一组同学对检测结果进行分析，发布检验报告。L在反思、完善的基础上，利用标准化试剂盒分小组进行练习，充分掌握该技能；2.分小组讨论检验结果，发布检验报告。1 .熟练操作规范，提升流畅程度；2 .小组讨论和发布检验报告提升学生的探究能力和合作能力。表3综合实训课教学活动设计参考教学实施过程教学环节教学内容教师活动学生活动设计意图展示案例创设情景1.核酸检测工作所需要的职1.展示案例各小组展示制作的L观看视
15、频，感受抗疫英雄的1.通过真实案例将学生迅速引入教学实施过程教学环节教学内容教师活动学生活动设计意图(20min)业素养：细心、耐心、责任心和奉贤精神；2.针对不同的场景，应制定相应的检测方案。身边的抗疫英雄采访视频；2.引入项目展示核酸检测任务书，明确各组的项目任务。家国情怀、社会责任感和职业精神；2.根据任务书明确小组的项目任务。教学情境，增强岗位责任心和使命感，提升学习动力；2.通过明确任务，导入之后的综合实训。双师指导项目探究（15min）1 .鼻咽拭子和口咽拭子的适用范围；2 .新冠病毒核酸检测的流程。1 .组织各小组汇报自己制定的检测方案；2 .联合各组企业导师指导学生对各组的检测
16、方案进行讨论、优化。1 .各小组汇报自己的检测方案；2 .分析讨论，在企业导师和校内教师的指导下，根据项目情境，优化采样和核酸检测方案。1 .小组讨论，提升学生们自主解决问题的能力、交流沟通能力和团结协作能力；2 .行业教师和校内教师共同指导，结合学生认知现状和案例场景制定工作方案。四、学生考核与评价（一）总体评价实施教师评价、学生评价、社会评价相结合的多元主体评价。积极开展学生自评和互评，帮助学生养成自主评价习惯，评价内容包括学生出勤、课堂表现、在线测验、实操考评、反思报告、企业实践等。通过信息化手段，创设即时反馈评价手段，注重即时评价、形成性评价和总结性评价相结合的方式，专项评定学生形成最
17、终成绩。（二）课次评价包括课前、课中、课后三部分，课前成绩由智慧职教学习记录、虚拟仿真平台成绩,占比10%；课中记录学生出勤及课堂参与情况，占比10%,评价系统考核成绩，占比70%；课后，记录学生反思报告成绩，占比10%。（）期中期末专项评价采用情境典型个案设置穿脱防护服及核酸采样、核酸提取、体系配置及上机检测等4个任务专项考评学生，要求学生先制定实验计划（10%）,再连续实施4个工作任务（80队客观测量评价+主观评价），最后撰写实验报告及结果分析（10%）,3名老师（至少1人来自企业）为学生评分，分别形成学生的期中、期末专项考评成绩。（四）社会实践评价以第二课堂的形式，每个模块学习任务结束后
18、要求学生到企业进行志愿服务实践,结合实践时长，企业老师和老人对学生的满意度评价评分，进行综合评定，占比10%。五、教学实施与保障（一）教材选用本课程教材选编的原则是突出职业教育特点，落实课程思政和三教改革指导思想，以工作过程为主线，突出项目导向，任务驱动，选择典型的工作任务，融入必须的理论知识，让学生在完成任务的过程中逐步提高职业能力。课程内容突出重点且表述清晰，与基础知识、相关专业知识、专业知识、专业实践能力接轨，同时突出实用性、前瞻性，将本专业的发展趋势及新知识、新方法及时体现在教材内容中。专业核心课主选国家规划教材，与行业合作编写的实训教材。本课程依据课程标准，参考新冠病毒样本采集和检
19、测技术指南（第八版）编写活页教材。本课程选用的参考教材如下：1 .分子生物学与检验技术，人民卫生出版社，2015年出版，胡颂恩主编，ISBN9787117202671；2 .新型冠状病毒感染临床检测技术，科学出版社，2021年1月出版，李金明主编，ISBN9787030671165；3 .临床分子生物学检验，人民卫生出版社，2015年出版，吕建新主编，ISBN9787117152945/R.15295；4 .新冠肺炎实验室检测技术指南（第八版），2021年5月发布，国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制综合组。（二）教学方法与手段本课程专项实训课采用任务驱动教学法。以项目为模块，以工作过程
20、为主线开展教学,引导学生逐步完成工作任务。以在线学习平台为依托，开展线上线下混合教学；充分运用职教云、动画、微课、虚拟仿真系统等设施等信息化手段开展教学，以增强教学效果，提升教学效益。及时紧密结合核酸检测新知识、新技术、新设备的发展趋势，为学生提供职业生涯发展的空间，努力提升学生服务岗位的职业能力，培养学生的精益求精的职业精神。（三）课程资源的开发与利用1.实训基地学校拥有医学检验模块化实训室，约800余平方米，同时可容纳80名学生开展实训操作操作实践。本专业拥有医学检验模块化综合实训室、配备有全自动生化分析仪、全自动血细胞分析仪、荧光显微镜、细菌鉴定仪、尿化学分析仪、全自动微生物分析仪、PC
21、R扩增仪等。与上海市20余家二、三级医院、18家优秀企业签署实习、见习协议。专业配备有虚拟仿真实训平台，与企业联合开发了血液细胞分析仪虚拟仿真系统、全自动生化分析仪虚拟仿真实训系统，琼脂糖凝胶电泳、人乳头瘤病毒反向斑点杂交法虚拟仿真系统、感染性疾病虚拟仿真实训系统，荧光定量PCR虚拟仿真实训系统、RNA提取与浓度检测虚拟仿真实训系统。与XXXXXX等10余家第三方检验公司签订合作协议。学校企业联合组成课程开发小组，参照行业标准，依托企业实训场地开展实训教学，缩短学生岗位适应时间，为企业量身打造高素质技能型核酸检测技术人才。配置情况见表4。表4实训室设备配置及实训项目一览表序号名称实验（实训）项
22、目1临检实训I室主要包括光学显微镜（10X100倍）80台、三分类或五分类血细胞分析仪、尿液干化学自动分析仪、自动血沉仪、分光光度计、电冰箱、电动离心机、电热恒温干燥箱、电热恒温水浴箱、血细胞计数板等、凝血分析仪，尿有形成分分析仪1 .临床血液学检验：血液标本的采集与处理，血液的一般检验、血型血清学检验、血栓与止血检验等；2 .临床体液检验：体液标本的收集与处理，尿液检验、粪便检验、脑脊液检验、浆膜腔积液检验、精液检验、前列腺液检验、阴道分泌物检验等。2生化检验实训室主要包括全自动或半自动生化分析仪、电解质分析仪、电子天平、分光光度计、精密酸度计、电热恒温水浴箱、冰箱、电泳仪及电泳槽、电泳扫描
23、仪、1 .血糖测定、葡萄糖耐量试验；2 .血脂测定;3 .血清酶测定；4 .电解质测定；5 .血气分析；序号名称设备配置实验（实训）项目离心机、电热恒温干燥箱、微量加样器、加液器等。6 .肝功能、肾功能、心功能试验；7 .血清蛋白电泳测定、部分肿瘤标志物测定等。3微生物实训室光学显微镜（IOXlOo倍）80台、净化工作台、生物安全柜10个、高压蒸汽灭菌器、电冰箱、电热恒温干燥器、电热恒温培养箱、离心机、普通天平等；同时应贮备一定数量寄生虫（卵）、细菌等形态学实验教学标本等L培养基的制备；2 .细菌常用染色方法和形态学检查；3 .微生物标本采集、运送、保存和处理；4 .一般细菌分离纯化及鉴定；5
24、 .抗菌药物敏感试验；6 .细菌常用染色方法和形态学检查；7 .微生物标本采集、运送、保存和处理；8 .一般细菌分离纯化及鉴定；9 .抗菌药物敏感试验；10 .形态学检查实验实训；IL显微镜维护与使用。4免疫学实验室主要包括酶标测定仪、洗板机、荧光显微镜、离心机、电泳仪及电泳槽、电热恒温水浴箱、电热恒温培养箱、各种规格微量加样器等1 .免疫血清的制备；2 .凝集试验；3 .沉淀试验；4 .酶标法测乙肝病毒两对半实验；5 .细胞免疫功能检测；6 .人血液单个核细胞分离实验。5核酸检测实验室主要包括PCR仪5台、全自动核酸提取仪5台、微量离心机10台、高速冷冻离心机5台、电泳仪及电泳槽5台、各种规
25、格微量加样器等1 .标本的采集；2 .核酸提取与纯化；3 .核酸纯度浓度的检测；4 .PCR；5 .蓝白斑实验；6 .琼脂糖电泳；7 .病毒核酸检测（虚拟仿真）；8 .缺失性。地中海贫血基因检测（虚拟仿序号名称设备配置实验（实训）项目真）。血液细胞分析仪虚拟仿真系统、全自动生化分析仪虚拟仿真实训系统，琼脂糖凝胶电泳、人乳头瘤病毒反向斑点杂交法虚拟仿真系统、感染性疾病虚拟仿真实训系统，荧光定量PCR虚拟仿真实训系统、RNA提取与浓度检测虚拟仿真实训系统。6化学实验主要包括酸度计、紫外可见分光光度计、高效液相色谱仪、超级恒温槽、烘箱、电子天平、旋转蒸发仪、其他常用玻璃仪器等，并有危化品的规范化管理
26、制度1 .常用溶液的配制；2 .水溶液中的解离平衡；3 .氧化还原反应；4 .摩尔气体常数的测定。2.开发利用网络资源利用职业教育云平台、智慧职教、腾讯课堂、虚拟仿真实训基地，结合实训场景，将理论教学、照护实践、虚拟仿真充分融合，实现“教学过程任务化、学生学习自主化、评价主体多元化”，形成符合教学规律的“理实一体，线上线下混合”的教学模式。积极开发和利用网络课程资源，充分利用电子书籍、电子期刊、数字图书馆、教育网站和学习论坛等网络信息资源。表5专业教学资源一览表资源名称资源类型项目来源（网站）项目状态核酸检测技术资源库专业教学资源库在用核酸检测技术在线课程职教云在用医学检验虚拟仿真实训平台虚拟
27、仿真在用六、医学检验技术专业2020级授课进程与安排表表6医学检验技术专业2020级授课进程与安排表周次日期课内（计划内）学时分配主要内容讲授校内实训校外实践讨论小计周次日期课内（计划内）学时分配主要内容讲授校内实训校外实践讨论小计12.24/周四5一8节1-1样本采集及运送4423.3/周四58节1-2核酸提取4433.10/周四5一8节1-3核酸扩增及结果分析4443.17/周四5一8节14综合实训4453.24/周四5一8节21结核分枝杆菌样本采集及核酸提取2222RFLP法检测2263.31/周四5一8节2-3结果分析：琼脂糖凝胶电泳及成像解读4474.7/周四5一8节24综合实训4484.14/周四5一8节3-1实验准备及标本采集与前处理4494.21/周四5一8节32全血基因组DNA提取44104.28/周四5一8节33PCR-杂交法检测44115.5/周四5一8节34综合实训44125.12/周四5一8节4-1实验准备及标本采集与前处理44135.19/周四5一8节4-2原位荧光杂交法2243扩增HER2基因荧光结果分析22145.26/周四5一8节44综合实训44156.2/周四58节51全血基因组提取及PCR体系配置44166.9/周四5一8节52PCR及sanger测序44周次日期课内（计划内）学时分配主要内容讲授校内实训校外实践讨论小计法虚拟仿真
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