1、ICS71.100.70CCSY42SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T14962023代替SN/T14962004进出口化妆品中生育酚及0-生育酚醋酸酯的测定Determiatinftcpherlad-tcpherylacetateincsmeticsfrimprtandexprt2024-07-01实施2023-12-29发布中华人民共和国海关总署发布本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替SN/T1496-2004化妆品中生育酚及-生育酚醋酸酯的检测方法高效液相色谱法与SN/T14962004相比除结构调整和编辑
2、性改动外主要技术变化如下：-增加了第一法液相色谱-串联质谱法（见第4章）；更改了第二法高效液相色谱法的反相色谱分离条件（见5.4212004年版的5.3.1）；更改了第二法高效液相色谱法的反相色谱分离条件；将第二法高效液相色谱法中的邻苯二甲酸二正辛酯内标定量法更改为用外标法定量（见5.4.2.22004年版的5.3.3）；更改了样品前处理方法（见5412004年版的5.1）0请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位：厦门海关技术中心。本文件主要起草人：赖莺、杨泽、骆劲松、林睿、董清木、黄旖珏、黄宗平、杨志
3、鸿。本文件于2004年首次发布本次为第一次修定。进出口化妆品中生育酚及CT生育酚醋酸酯的测定1范围本文件规定了进出口化妆品中生育酚及-生育酚醋酸酯的液相色谱-串联质谱法和高效液相色谱-二极管阵列检测器法。本文件适用于进出口化妆品中生育酚及外生育酚醋酸酯的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文件仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4第一法液相色谱-串联质谱法4. 1原理样品经丙酮或乙睛提
4、取用液相色谱-串联质谱法测定和确证-生育酚采用内标法定量其余目标物采用外标法定量。4.2. 剂和材料除另有规定外所用试剂均为分析纯水为符合GB/T6682规定的一级水。4.2.1 1乙睛:色谱纯。4.2.2 丙酮:色谱纯。4.2.3 甲醇:色谱纯。4.2.4 乙酸:优级纯。4.2.5 -生育酚(-TopherolCAS号10191-41-0):纯度95%。4.2.6 F-生育酚(F-TopherolCAS号148-03-8):纯度95%4.2.7 2.74生育酚(KTOCOPherolCAS号54-28-4):纯度95%。4.2.8 4生育酚B-TocopherolCAS号49-13-1):纯
5、度95%。4.3. 2.9-生育酚醋酸酯(-TocopherylacetateCAS号58-95-7):纯度95%。4.4. 100-生育酚-d6(-TOCoPherOI-d6CAS号113892-08-3):纯度95%。4.5. 110.1%乙酸甲醇溶液：IL甲醇(423)中加入ImL乙酸(424)混匀。4.6. 120.1%乙酸溶液:1L水中加入ImL乙酸(4.2.4)混匀。4.7. 13内标储备液(100OOmgL):准确称取-生育酚-d6(4.2.10)0.10g(精确到0.0001g)置于IOmL容量瓶中用丙酮(422)溶解并定容。一18。C以下保存溶液有效期6个月。4.8. 14内
6、标工作液:移取适量的内标储备液(4.2.13)用乙睛(4.2.1)逐级稀释成IOmg/L的标准内标工作液。一18。C以下保存有效期3周。4.9. 15标准储备液(100OOmg/L):准确称取-生育酚(425)、F-生育酚(426)、K生育酚(427)、-生育酚(428)和-生育酚醋酸酯(429)各0.10g(精确到0.0001g)置于IOmL容量瓶中,用丙酮(4.2.2)溶解并定容。一18。C以下保存溶液有效期6个月。4.10. 16标准中间液:移取适量的标准储备液(4.2.15)用乙睛(421)逐级稀释成Iomg/L的标准中间液。一18。C以下保存有效期3周。4.11. 17标准工作溶液:
7、分别移取适量标准中间液(4.2.16)和内标工作液(4.2.14)，用乙睛(4.2.1)稀释成含50gL内标的10gL20gL50gU100gL200gL500gL的标准工作溶液。临用时配制。4.12. 18有机相滤膜O22m04.13. 和设备4.3.1液相色谱-三重四极杆质谱联用仪:配有APQ离子源。4.3.2电子天平:感量0.0001gO4.3.3旋涡混合器。4.3.4 离心机:转速不低于5000rmino4.3.5 超声波清洗器:超声输入功率800W超声频率40KHz可控温最高温度不低于60。4.4分析步骤4.4. 1提取4.5. 1.1液体油状化妆品称取经混匀后的试样约0.2g(精确
8、到0.00OIg)准确加入50L内标工作液(4.2.14)，置于IomL具塞比色管用丙酮(4.2.2)稀释至刻度。在旋涡混合器上混匀后超声波萃取15min转移至IomL具塞离心管以5000rmin的速度离心8mi11o准确移取上清液ImL氮气吹干准确加入ImL乙睛(4.2.1)溶解一18。C以下冷冻4h,5000rmin冷冻离心5min除油上清液过0.22m滤膜(4218)后进行液相色谱-串联质谱测定。4.6. 1.2固体蜡状化妆品称取经混匀后的试样约0.2g(精确到0.00OIg)准确加入50L内标工作液(4.2.14)，置于IomL具塞比色管用乙睛(4.2.1)稀释至刻度。在旋涡混合器上混
9、匀后(355)OC超声波萃取25min,转移至IOmL具塞离心管以5000rmin的速度离心8min0上清液于一18。C以下冷冻4h,5000rmin冷冻离心5min除油过0.22m有机相滤膜(4.2.18)后进行液相色谱-串联质谱测定。4.7. 1.3其他化妆品(不包含精油)称取经混匀后的试样约0.2g(精确到0.00OIg)准确加入50L内标工作液(4.2.14)，置于IomL具塞比色管用乙睛(4.2.1)稀释至刻度。在旋涡混合器上混匀后超声波萃取15min,转移至IomL具塞离心管以5000rmin的速度离心8min,上清液过0.22m滤膜(4.2.18)后进行液相色谱-串联质谱测定。4
10、8. 2测定4.9. 2.1色谱参考条件由于测试结果取决于所使用的仪器因此不能给出色谱/质谱分析的普遍参数。下列参数已被证明对测试是合适的。a)色谱柱:五氟苯基柱10OmmX2.1mm(内径)U.9m或相当者；b)柱温:20T；c)进样量:2ML；d)流动相沿-0.1%乙酸溶液(4.2.12)上-0.1%乙酸甲醇溶液(4.2.11);e)梯度洗脱条件见表1；f)流速:0.3mL/min。表1液相色谱梯度洗脱条件时间min流动相B体积分数/%流动相A体积分数/%087131871349010610007.510007.687134.4.2.2质谱参考条件由于测试结果取决于所使用的仪器因此不能给
11、出色谱/质谱分析的普遍参数。下列参数已被证明对测试是合适的。APQ离子源参数见表2监测离子对、碰撞能量等见表3。表2大气压下化学电离(APCI)离子源参数参数设定值干燥气温度/325气化室温度/C350干燥气流量/(Lmin)10雾化气压力psi40毛细管电压/V2000(+)电晕电流A10表3待测物质的监测离子对和碰撞能量物质名称母离子m碰撞诱导解离电压V子离子m碰撞能量CEV电离方式CT-生育酚431.4131165a22APCI(+)136.940APCI(+)S-生育酚417.4124150.9a18APCI()6940APCI(+)V-生育酚417.4124150.9a18APCI(
12、)6940APCI(+)5-生育酚403.2108137a18APCI(+)80.856APCI(+)-生育酚乙酸酯473.3135207.2a16APCI()164.840APCI(+)a定量离子。4.4.2.3 定性测定按照上述条件测定试样和标准工作溶液如果试样的质量色谱峰保留时间与标准品一致允许偏差小于2.5%；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致相对丰度允许偏差不超过表4规定的范围则可判断样品中存在相应的被测物。表4定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度%5020-5010-201O最大允许偏差%202530504.4.2.4 定量测定-生育酚采用内标法
13、定量以其峰面积与内标物峰面积之比为纵坐标质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线。其余目标化合物采用外标法定量以各物质的峰面积为纵坐标质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线。标准工作溶液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内如果含量超过标准曲线范围应用乙睛(421)稀释到适当质量浓度后分析。在上述色谱条件下标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图见附录A中图A.lo4.4.2.5 空白试验除不加试样外均按上述操作步骤进行。4.4.2.6 平行试验按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。4.5结果计算按公式(1)计算试样中待测物质的含量。Xi=f(1)zuXIQOO式中：X试样中待测物质的含量单位为毫克每千
14、克(mgkg);P样液中待测物质的质量浓度单位为微克每升(gL);B空白试验待测物质的质量浓度单位为微克每升(gL);Y样液最终定容体积单位为毫升(mL);m-试样质量单位为克(g)；f稀释因子。计算结果保留三位有效数字。化妆品中生育酚总含量为-生育酚、-生育酚、片生育酚、5-生育酚含量之和。4.6定量限本方法对生育酚的定量限为1.25mgkg对-生育酚醋酸酯的定量限为0.25mgkgo4.7精密度4.7.1重复性同一操作者用同一仪器在恒定的实验条件下对同一个测定物质按正常和正确的实验方法操作获得的两个连续测定结果之间的差不大于这两个测定值的算术平均值的10%O4.7.2再现性在不同实验室由同
15、一人员使用相同设备按相同的测试方法对同一被测对象两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%O5第二法高效液相色谱-二极管阵列检测器法5. 1原理样品经丙酮或乙睛提取用带二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定根据其保留时间和紫外吸收光谱定性外标法定量。5.2 试剂和材料除以下列出的试剂和材料其余同4.2o标准工作溶液:移取适量标准储备液(4.2.15)用乙睛(421)逐级稀释成0.5mgL100mgL的标准工作溶液。一18。C以下保存有效期2周3周。5.3 仪器和设备5.3.1高效液相色谱仪:配有二极管阵列检测器。5.3.2电子天平:感量0.0001g05.3.3旋涡混合器。
16、5.3.4 离心机:转速不低于5000rmino5.3.5 超声波清洗器:超声输入功率800W超声频率40KHz可控温最高温度不低于60。5.4分析步骤5.4. 1提取5.5. 1.1液体油状化妆品称取经混匀后的试样约0.5g（精确到0.0001g）置于IOmL具塞比色管用丙酮（422）稀释至刻度。在旋涡混合器上混匀后超声波萃取15min转移至IomL具塞离心管以5000rmin的速度离心8mino准确移取上清液ImL氮气吹干准确加入ImL乙睛（421）溶解-18以下冷冻4h5000rmin冷冻离心5min除油上清液过0.22m滤膜（4.2.18）后进行液相色谱测定。5.6. 1.2固体蜡状化
17、妆品称取经混匀后的试样约0.5g（精确到0.0001g）置于IOmL具塞比色管用乙睛（4.2.1）稀释至刻度。在旋涡混合器上混匀后（355）超声波萃取25min转移至IomL具塞离心管以5000rmin的速度离心8min0上清液于一18。C以下冷冻4h,5000rmin冷冻离心5min除油过0.22m有机相滤膜（4.2.18）后进行液相色谱测定。5.7. 1.3其他化妆品（不包含精油）称取经混匀后的试样约0.5g（精确到0.0001g）置于IOmL具塞比色管用乙睛（421）稀释至刻度。在旋涡混合器上混匀后超声波萃取15min,转移至IomL具塞离心管以5000rmin的速度离心8min上清液过
18、0.22m有机相滤膜（4.2.18）后进行液相色谱测定。5.8. 2测定5.9. 2.1色谱参考条件由于测试结果取决于所使用的仪器因此不能给出色谱分析的普遍参数。下列参数已被证明对测试是合适的。a）色谱柱:五氟苯基柱25OmmX4.6mm（内径）5m或相当者；b）柱温:室温；c）进样量:20ML；d）流动相及梯度洗脱条件:见表5；e）流速:ImLmin;f）检测器扫描范围：190nm-600nm;g）测定波长:生育酚292nm生育酚乙酸酯285nm0表5液相色谱流动相及梯度洗脱条件时间min甲醇体积分数/%水体积分数/%0752517525169010表5液相色谱流动相及梯度洗脱条件(续)时间
19、/min甲醇体积分数/%水体积分数/%20100023100023.175255.4.2.2 定量测定以目标化合物的峰面积为纵坐标质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线外标法定量。标准工作溶液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内如果含量超过标准曲线范围应用乙睛(4.2.1)稀释到适当质量浓度后分析。在上述色谱条件下标准溶液的高效液相色谱图见附录B中图B.1o5.4.2.3 定性确认进行样品测定时如果检出的目标化合物的保留时间与标准物质一致并且在扣除背景后的样品色谱图中该物质的紫外吸收光谱与标准物质的紫外吸收光谱相一致则可初步确认样品中存在该目标化合物。必要时阳性样品需要第一法液相色谱-串联
20、质谱法进行确认。在上述色谱条件下标准溶液的在线紫外吸收光谱见图B.2o5.4.2.4 空白试验除不加试样外均按上述操作步骤进行。5.4.2.5 平行试验按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。5.5 结果计算按公式(2)计算试样中待测物质的含量。Xi=-XVf(2)式中：X试样中待测物质的含量单位为毫克每千克(mgkg);P样液中待测物质的质量浓度单位为毫克每升(mgL);P空白试验待测物质的质量浓度单位为毫克每升(mgL);V样液最终定容体积单位为毫升(mL);m-试样质量单位为克(g);f稀释因子。计算结果保留三位有效数字。化妆品中生育酚总含量为-生育酚、-生育酚、片生育酚、万生育酚含量之和
21、5.6 定量限本方法对水、孚L、膏霜、粉状化妆品中生育酚和a-生育酚醋酸酯的定量限分别为10mgkg和30mgkg，对液体油状和固体蜡状化妆品中生育酚和-生育酚醋酸酯的定量限分别为20mg/kg和60mgkgo5.7 精密度5.8 .1重复性同一操作者用同一仪器在恒定的实验条件下对同一个测定物质按正常和正确的实验方法操作获得的两个连续测定结果之间的差不大于这两个测定值的算术平均值的10%O5.9 .2再现性在不同实验室由同一人员使用相同设备按相同的测试方法对同一被测对象两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%O附录A（资料性）标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图Lmm
22、U,SWfK二OesWnOUJzio。-cn-o00当HK.)标引序号说明：1生育酚;2S-生育酚和K生育酚；3-生育酚；4-生育酚-d6；5-生育酚乙酸酯；6总兽子流。图A.1标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图附录B（资料性）标准溶液的高效液相色谱图和紫外吸收光谱图标准溶液的高效液相色谱图、紫外吸收光谱图分别见图BJ和图B.2o0.02400220010.01000140.012口0010VQOOe00000000020000-0002-Dj004-0006-Oooe3004005006007008jC0*001000HOO12001300M001500ISoO170018816002000210022002324002S00MOo2700r.min标引序号说明：16生育酚；2B生育酚；3%生育酚；4一-生育酚；5-生育酚乙酸酯。图B.1标准溶液的高效液相色谱图22,535-生育的乙廉曲0.30-f0.20-0.10-284.60.00:T二.一.二】220.00240.00260.00280.00300.00320.00340.00360.00MaOOitn)标引序号说明：15-生育酚；2小生育酚；3H生育酚；4a-生育酚；5-生育酚乙酸酯。图B.2生育酚异构体和-生育酚乙酸酯的在线紫外可见吸收光谱图
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