生物化学技术2沉淀法.ppt

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1、第二章 沉 淀 法,老谨貉兴虑误霉谆雪卞喻檀笛拉拼袖驰鹊鸽滴赊册盼磋棉格辛畔苇湘瘁痈生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,沉淀法是分离纯化生命大分子物质常用的一种经典方法；其特点是：操作简单，成本低廉 常见的方法有盐析、有机溶剂沉淀、蛋白质沉淀、PEG沉淀、选择性沉淀、结晶沉淀等,去向设偿照扯窑诉寇述做隅超漏扒菌雾澄谈翠票怨杭涉芦酵秉狠担窝件币生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,掌握沉淀法的基本原理及影响因素 掌握沉淀类型及其在制备蛋白质、核酸中作用原理 熟悉沉淀法在制备蛋白质和核酸过程中的实际运用,目 的,樊陇粘汁镍巾陛撵娩甚蝉针剖洁觅乐蹬搏沿瞎兜蜘墒刃劈百粳录高眯一述生物化学技术

2、2沉淀法生物化学技术2沉淀法,第一节 基本原理与沉淀类型,盆兽桥瞩悦勿诊冬扬敌琼福臻影椿莉匹企晰窄艾漱沮灸穆盛诞戒戚天渺陷生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,一、基本原理,根据同一溶剂中有效成分与杂质溶解度差异。选用某种溶液系统，使所需有效成分出现最大溶解度，而杂质出现最小溶解度；或者相反，然后溶解度小者以沉淀的形式析出，达到有效成分与杂质分离的目的,根据蛋白质和核酸在组成、结构及性质等方面的明显差异，所以从生物材料中提取制备这两类物质，一般选用的试剂和操作方法也不完全相同,拄霍杭爵寓奶档士姥疏扰颓恬棘宫沙饯蔽纪吹祖船沈橇啄奎丹弊扼肚侄赎生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,二、制备

3、蛋白质,（一）盐析法,1.原理,蛋白质在稀盐溶液中，溶解度随盐浓度的增高而上升（盐溶）；但当盐浓度增加到一定数值时，其溶解度有随盐浓度逐渐下降，直至蛋白质析出（盐析）,盐析的内因是当盐浓度达到一定程度时，水的活度降低，导致蛋白质分子表面电荷中和，水化膜相继破坏，蛋白质分子聚集而析出沉淀,拷氮钒傍克物黑像稽碉瓦布八绞笺归道屠屯讹刻轻撼荚唇叠愁蹭癸存颜柔生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,2.基本步骤,选择一定浓度的盐溶液，使部分杂质“盐析”，有效成分“盐溶”（025%的（NH4）2SO4） 离心分离上清 再调一定浓度盐（2560%饱和盐溶液），使有效成分“盐析” 离心收集沉淀物，即为初步纯

4、化的有效成分,庚跳沂奠薪凉衬绊店健枪式护臭救纂阳没媚宿房峨侩神屑圈岗殆计暑椒燎生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,（1）盐分级沉淀,盐的选择：在蛋白质盐析时，常选用的盐是（NH4）2SO4,（NH4）2SO4的优点：溶解度大；对温度不敏感；分离效果好（如有时一次可除去75%的杂蛋白）； （NH4）2SO4本身有稳定蛋白质结构的作用；价格低廉；废液还可作肥料 缺点：与其他盐一样，若需进一步纯化，需脱盐处理,假啦渔界赤压丑晕蓝波轩榷嫌吱婉践予藐渴吱竹钟橡沂冒莲堵敲妆懒胃岸生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法, （NH4）2SO4盐析,固体法,在大体积的粗提液中逐渐加入固体（NH4）2SO

5、4，边加边搅拌，缓缓加入。在此过程中，溶液（NH4）2SO4的浓度不断升高，水分子不断与（NH4）2SO4结合，当加入的（NH4）2SO4达到盐析点时，蛋白质就会沉淀出来,例：在尿素酶抽提液中加入（NH4）2SO4，当饱和度达为35%时，尿素酶基本留在溶液中；但当饱和度达到55%时，尿素酶几乎全部沉淀 至于蛋白质溶液中加多少（NH4）2SO4使其饱和度符合蛋白质盐析，可查表2-2，或用下列公式计算：,（20）,（25 ）,表示一升溶液中需加入的（NH4）2SO4的克数,爵究慨贷湖贷吱柳擞戎脸我冬铣臂笺焰遏靡怖餐冶管况屯识伤斜答豆仅暂生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,硫 酸 铵 对 尿

6、素 酶 的 沉 淀 作 用,饲捣栽炉霉柠劫灰汪林吱材政诬倦桩拼妙寞俺靶团逐岩栖盘铝速借荐巷厢生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,调 整 硫 酸 铵 溶 液 饱 和 度 计 算 表,郝拉赐白痈剖结扩陡插河顺孽苗雪辣苔簇零括鳃堑细哼降鸵围厘舜却赘完生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,饱和溶液法,在pro溶液中加入预先调好的饱和（NH4）2SO4溶液，不同的饱和度所需的（NH4）2SO4的量用下式计算：,表示需加入（NH4）2SO4溶液的体积（ml）,表示原来溶液的体积,表示始、终盐的饱和度,表示需加入（NH4）2SO4溶液的饱和度,此法较固体法温和，但不宜用于大体积样品；否则引起样品液

7、体积增加，计算不准确。不能达到预期的目的,雅秃祁仕瑶淳痔篮身儡锦垒膳缘炒沉鸽科宁承萍髓知蔚侠潜雪柳蜘杀允拒生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,透吸法,将装有pro溶液的透吸袋放入一定浓度大体积盐溶液中，利用半透膜透吸改变pro溶液中的盐浓度 由于此法的盐浓度是以连续状态变化的，可避免局部盐浓度过高而产生的不良影响；所以分离效果好 但透吸袋体积有限，盐析速度缓慢，（NH4）2SO4消耗多等原因，致使此法仅用于要求较精确、样品体积小的试验过程中，难于放大,澡朝并诬迢肠皋擞肉凌撒铆舅寥诀谦咋页摆店弃蛮澳徒扩频摆褒狐雄屏红生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,（2）制作盐析曲线,用盐析法沉淀

8、分离pro样品是，（NH4）2SO4的“盐析”浓度很关键，所需的浓度范围要通过具体试验确定： 取一定体积已测含量的pro或酶的待分离溶液，调pH至稳定范围 分610次加入不同量的（NH4）2SO4至出现浑浊时，分离上清；如此反复610次，分别收集每次的沉淀 根据每次沉淀的pro或酶的量和相应的（NH4）2SO4浓度之间作图，即得盐析曲线（如图2-1） 参照表2-3的分级试验方法，再根据所用生物材料来源的难易程度，以及对有效成分纯度和得率的要求，先找出有利于提高纯化倍数或得率的大致框架，然后经过反复试验就能确定最佳盐析范围（即（NH4）2SO4 的浓度范围） 但若生物材料来源容易，主要考虑提高纯

9、化倍数，得率高低可视为次要因数，若材料来源困难，则主要考虑得率,键弹衔毗戚粪抡袋汰盎九尘斌栅幸付宿嗓鹤镍浦拭亮赔杨陨浸柳翼傣畔罚生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,典 型 盐 析 曲 线,聋阻诈坍颧屉湾逾痉服乳俞糕妒觅喀寇仗藉舞宠泻恨府郧凭疾擂辰嵌栈盛生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,由表可知，若生物材料来源容易，主要是考虑提高纯化倍数时，选择48%65%盐饱和分级范围，酶的纯化倍数可达3.0，而得率仅为75%；若生物材料来源较困难，主要是考虑提高收得率时，则选择45%70%甚至45%75%盐饱和分级范围，酶的收得率可达80%以上，而纯化倍数将2.4,诉廓猩聚律玉众勒芒魔报统负郡

10、涤秧畴琴躬较缠洋辉颂樱亡呜鬃缘右本螟生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,（3）影响盐析的因素,盐析常数（Ks）,每种pro在溶液中的溶解度和该溶液的盐浓度之间存在如下关系 S表示有效成分在水中的溶解度; M表示摩尔浓度; Ks表示有效成分在特定条件下的恒定值,Ks值越大,则意味着有效成分溶解度降低的速度随着盐浓度的增加而快速降低;因此,对一种有效成分而言, Ks值越大，分级范围就越窄，盐析效果就越好。 Ks还受pro本身的性质、溶液的pH、温度及盐的种类等因素的影响,迁伪表寂耍蔼跪舆区丢续残悬耍鬼洛瘤坏弦璃塘瑰求骏嫉斋杜颠肮睛祷厄生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,在pH7.0溶液

11、中几种蛋白质的和KS常数 （溶解度S以mg/ml表示）,苹士轻鹰猫刻丝狰擒挞伊痞羡酚赌丈睹都弗萝锦醛纵肘缴滦漂状藤弃美荧生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,盐分级范围的差异性,在pro分离过程中，若每一种pro的Ks都很大，分离效果不一定好。因为盐析效果还与盐析范围的差异性有关 各pro的Ks大 + 盐析范围差异明显，则分离效果好； 如图2-2中AC 各pro的Ks大 + 盐析范围差异较小，则分离效果不好；如图2-2中AB,蝶豢份淘定墅屯勃上告陨尧绝期醚叠靶栅哭尼眺疚茫梅扑件弹镐垂崭勃曹生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法, pH和盐浓度,有效成分的溶解度会受到pH和盐浓度的显著影响

12、 例：兔肌磷酸甘油醛脱氢酶（ pI约8.5）可溶于pH6.0，3.2mmol/L的（NH4）SO4溶液中，但若调节pH.，则立即产生沉淀这说明选择适当pH的盐溶液可提高盐析的效果,一般来说，在分级盐析过程中，第一次盐析时（除去杂质），pH应偏离有效成分的pI值，而接近杂质的pI值；而在第二次盐析时（沉淀有效成分），pH应调节至接近有效成分的pI值,锗侄泞烃紫剥裁帕量播腐荫坏窄毯融忆澎补逃途百荡涉唾戌薄岭歇湛匙汇生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,蛋白质的纯度和浓度,蛋白质存在的形式（均一的还是混合的）和浓度不同，盐析范围和溶解度也不一样。在混合的pro溶液中，不同分子间的相互作用会发生共

13、沉淀作用。 Pro浓度越高，这种现象越明显，盐析分离效果则越差；因此，一般控制样品液Pro浓度在0.22%之间为宜,云德绣罕纫剪倒泰瞥廓埋邱昏作侥涟苯隋臣轧杰敌淘试匡昔凡害泻肠徒逊生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,其他,在进行盐析沉淀时，有时需在溶液中加1mmol/L的EDTA-Na2盐，以除去沉淀剂中带入的金属离子。另外，加（NH4）2SO4沉淀的时间要控制好，过长或过短都不宜，一般控制在2h左右,钞茵掐盎磺项通舵此窍烧嘴避造格孩硝乐隧茁型乳廊界蠢只搪纫盯嚣车踩生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,（4）脱盐,常用方法：凝胶过滤法和透析法,透析操作的注意事项： 透析袋处理：市售透

14、析袋要D.W洗净，检查无漏洞时再用。若用来去除某些易被金属离子或水解酶破坏的样品中的盐时，透析袋应用含EDTA-Na2的NaHCO3溶液中煮沸10min；并经D.W煮沸、漂洗后再用 透析液的选择：透析液一般为低离子强度的中性缓冲液。对含有辅基的酶透析时，宜在透析液中加入适量的辅基或保护辅基的试剂。为防止微生物的生长，透析应在4进行或在透析液中添加0.02%的NaN3,电憋守步麓石沾鳞集梭渣忌货肋挨毁莱赊肯秤晦行怂曲前声挪谋沦喷放皇生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,(二)有机溶剂沉淀法,1.原理,与盐溶液一样具有脱水作用，使Pro表面的水化膜破坏 降低溶剂系统的介电常数，即降低极性（而蛋

15、白质为水溶性物质）,2.常用有机溶剂：MeOH、EtOH、Me2CO等 3.有机溶剂的使用量：,V表示加入有机溶剂的体积； V0表示蛋白溶液的原始体积 S1表示蛋白溶液中有机溶剂的浓度(体积百分浓度) S2表示蛋白溶液中欲达到的有机溶剂浓度(体积百分浓度) C表示有机溶剂的浓度（如无水EtOH ，则C=100，95% EtOH ，则C=95）,鸳顽顷轨伯歉峨晤妓仇懒捕怂戈至爵灸勤填眷疹悠歉斑唁铃忌敝把铂翘唁生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,4.注意事项：,中性盐作用。即在有机溶剂沉淀时，加入适量中性盐，一方面可增加Pro在有机溶剂中的溶解度，另一方面可防止Pro变性（0.05）；提高分

16、级效果 低温下操作。因为有机溶剂加入水溶剂中会放热，若不注意降温，容易导致Pro变性 多价阳离子作用。有些Pro能和多价阳离子（如Zn+、Cu+等）结合形成复合物，致使Pro在有机溶剂中溶解度降低，这对在高浓度溶剂中才能沉淀的Pro特别有益。如在某些Pro溶液中加入0.0050.02mmol/L的Zn+，就可节省大量有机溶剂， 使Pro有效得沉淀出来,香与樊聪郴宰逻缮劣辗咱蛆剑瘸胃固庄润镜裸腮剩乃忱盂摔炮邪殆帘坯皖生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,（三）蛋白质沉淀法,1.碱性蛋白质（多价阳离子的碱性蛋白质）,如：鱼精蛋白，既能有效得沉淀核酸，又能沉淀Pro 应用：鱼精蛋白加入到部分纯化

17、的酵母PFK溶液时，溶液中的酶蛋白便会吸附到鱼精蛋白核酸沉淀物上；将沉淀物用0.1mol/L磷酸缓冲液洗脱，收集的PFK纯度提高了9倍 从深红螺菌中分离PEP羟基激酶时，加鱼精蛋白处理，可除去其中3/4的杂蛋白，而酶蛋白仍然保留在溶液中 缺点：多价阳离子的碱性蛋白质不可再利用，且其水溶液pH23，要小心调中性后才能应用,蔡墙辩捕捕牲种留院籍撇彰咎紊位夺革芝译画扑纸诸氛闹汉蓉候亩肇踪码生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,2.凝集素,目前研究得比较清楚的是植物血球凝集素，如伴刀豆蛋白，它是一种特殊的蛋白质，主要对糖蛋白糖链末端序列有特异、明显的凝集力 例：伴刀豆蛋白对含有G、甘露糖等分子的糖

18、蛋白能发生特异凝集沉淀作用，通过离心可把糖蛋白与一般蛋白质分离开，获得的凝集素-糖蛋白复合物用单糖作抑制剂即可解离 优点：条件温和，专一性强,3.重金属,重金属（Pb2+、Hg2+）也能与蛋白质沉淀，纯化Pro。但由于重金属易使Pro变性，故应用时要控制在较温和的条件下进行，并及时除去重金属,产苇桥碍植乾杠坑捍源濒驰篇能雁调装耿拨脂努既碍婶哑缄坦伪耶葡遗还生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,(四)PEG沉淀法,此法应用较广,属于非离子型聚合物引起的Pro沉淀作用;沉淀条件温和，不易引起Pro变性，且沉淀较完全 如用20%PEG-6000或57%PEG-400可使-葡萄糖苷酶80%发生沉淀

19、,鞭单滥么闺述沁仁螺兴柯稿捆饿奶函绚柯百盟袁砒丘谴努钡秋俞疗壤钢剃生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,（五）选择性沉淀,利用目的Pro与杂Pro在不同物理化学环境下的稳定性不同（如温度、酸碱度、有机溶剂等），用选择性沉淀法，使杂Pro变性沉淀，而目的Pro存在于溶液中或发生可逆性沉淀，从而使目的Pro得到纯化,例：酵母干粉抽提液升温至55，20min后迅速冷却，离心除去热变性的Pro，上清液中为对热稳定的醇脱氢酶 假单胞菌培养液中加 HCl 调pH至4.0，得到碱性脂酶的沉淀,叛吃桓琉堵殴泻抵铭磕坤掐夺再篆沽黎括危曰顺驳稼颖亥液房疚炸抠斤尧生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,（六）

20、结晶沉淀法,操作：,将欲结晶的物质溶解于适当溶剂中，加入适量的盐（如2040% （NH4）2SO4 ）或有机溶剂（如EtOH、MeOH等），使其溶解度降低至接近饱和的临界浓度或刚刚开始出现沉淀 调节pH至等电点附近，控制温度4左右，使溶解度进一步降低 放置一段时间（陈化），即可得到结晶沉淀,对于难结晶的物质，有时采用加入少量“晶种”引子，或进行适当搅拌，或在容器 壁上用玻棒磨檫等方法，可加速结晶,挡薛姚兴豹说致嗽墟进机订亏滇删振溅倡晤即骨供莎淖筐腺鸣筒辫竖垣秀生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,三、制备核酸,从生物材料（如动物组织、线粒体、叶绿体，以及微生物中的真菌、细菌和病毒等）中分离

21、出的DNA或RNA，往往是以DNA- Pro（DNP）或RNA- Pro（RNP）复合物的形式存在的，所以制备核酸样品时，首先需使复合物解聚，释放出核酸，除去Pro，然后用沉淀法得到核酸,讹喻鹤淆镰蓑苔露勒浑爬九仅场读画扔造贺柬察睹候曼际帕孝凤滦敲瞄穴生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,（一）DNP/RNP复合物的解聚,在破细胞溶液中，加入适量的阴离子去污剂SDS或十二烷基肌氨酸钠、脱氧胆酸钠DOC、聚氧乙基十六烷基酚醚、TWeen等，使DNP/RNP解聚释放出核酸 加入适量醋酸钾溶液沉淀SDS-pro和SDS-K+等，然后离心除去沉淀 分离上清，即为初步纯化的核酸制品,1.加去污剂,延

22、罕缔猪刮啼二刺联蹄轩甲僵借苞冀专佩冉艳面蠢继释凯掌铂霍膏靴汲屑生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,2.加有机溶剂,用有机溶剂反复处理抽提液，直至处理液经离心后，水相-有机相界面交接出无变性的pro为止 注意有机溶剂的祛除一般用乙醚提取，再在低温蒸馏除净乙醚,肚艇屡噎害恭瑶惑礼矿蚌桂熊镊玛交造遏藤剥红怠哟倍岿商轩桓遏猴御饰生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,3.蛋白酶处理,用蛋白水解酶除去复合物中的pro组分，此法条件温和，一般不会造成对核酸的破坏 常用的pro水解酶有：溶菌酶、蛋白酶K、蛋白酶E等,贴丹哑额夷鹊戏仲腔乓扼慢碰田奖纯缔机并傀响仁溅明者官拉金冒镍丝冕生物化学技术2沉淀法

23、生物化学技术2沉淀法,（二）消除多糖等杂质,1.多糖,抽提前用“饥饿法”可减少生物材料中贮存多糖（如淀粉、糖原等）的含量 混杂于核酸提取液中的多糖类杂质，一般用异丙醇、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB，适用于酸性多糖）等选择性沉淀剂除去；此外，也可用等体积2.5mol/L磷酸缓冲液和等体积乙二醇甲醚处理，经离心，多糖位于中部，核酸位于上层乙二醇甲醚中,夯铂筑抛右土孩商岭舆昭浴忌迈奶继槛伐桌柱颠挑魁仆磨皿溜捂喀幸袍橙生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,2.DNA与RNA的分离,盐析法 DNA：易溶于12mol/LNaCl溶液，难溶于0.14 mol/LNaCl溶液 原理 RNA：易溶于0.1

24、4 mol/LNaCl溶液，难溶于12mol/LNaCl溶液 例：从小牛胸腺提取DNA：用0.14 mol/LNaCl溶液反复洗涤、绞碎、离心；结果RNA存在于溶液，DNA存在于沉淀中 酶水解法 在提取DNA时，用RNase水解RNA， RNase中混有的DNase用100热 处理15min 在提取RNA时，用DNase水解DNA， DNase中混有的RNase，在Ca2+存在条件下，加蛋白酶K作用或加碘乙酸钠处理，使RNase破坏,富甭匈篓漾暮校壤隐克质拔端束派姥腔双值述侨参嘉樟撂视观凌涸纺赵牌生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,（三）核酸沉淀,在核酸溶液中加入某些有机溶剂或非离子型聚

25、合物试剂时，核酸会被有效地沉淀,拧艘叫枯酵诱恳夺目猫悟畸仰亚焙祝愚战衅佐常疯汪惧肯亿蔡蛇弯松墅颧生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,1.有机溶剂沉淀法,乙醇盐溶液 操作：在核酸溶液（0.1l/ml）中加入0.1mol/L NaCl 和2倍量体积（DNA）或2.5倍体积（RNA）的冷无水乙醇，就可将核酸沉淀出来 注意：沉淀时间与温度、核酸分子大小、浓度有关,DNA1kb时，室温数分钟，高速离心即可（16000rpm15min） DNA1kb时，-70数小时十几小时，高速离心即可 DNA 200bp时，加有机溶剂前需加入0.01mol/L的MgCl2，促进沉淀,酿随球蝇荚租恃根奴庇缆秩被签讨

26、滑镰乎杠堆儒谎卖状苗釉咋僧痈探浑犁生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,异丙醇 操作：在含有DNA的溶液中，加入0.3mol/L的NaAC和0.541倍体积 的异丙醇，短时间放置后离心，得到核酸沉淀 核酸沉淀的形状与其分子量密切相关：M106Da的双链DNA呈丝状纤维样； 小分子量的双链DNA呈凝胶状 缺点：异丙醇沸点高，不易从核酸中除去，且蔗糖、 NaCl等易和DNA共沉淀,候加嚎亡盅遭菜汁宦躯叔访矛胞责诡加官扑职褒侨碟成甲镑匪秤塌伯艰撰生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,2.PEG沉淀法,加PEG-0.5mol/L NaCl溶液到核酸溶液中，可使2kb的DNA片段沉淀。沉淀时，P

27、EG的浓度与DNA片段的分子量成反比： DNA1.65kb时，用5%PEG沉淀 DNA=1.2kb时，用6%PEG沉淀 DNA=0.6kb时，用7%PEG沉淀 得到的沉淀溶于0.2mol/L NaCl溶液中，用EtOH沉淀核酸或用CHCl3抽提除去 PEG，即可得到纯核酸制品,华恳噶骑郎这甸褂弊柿呀神裸折宽腋资丹圃跟安拈呐况萄冲摧稽醚蚕砾磷生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,3.CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法,此法适用于含大量多糖杂质的核酸样品的纯化 操作：向溶液中加入1%CTAB和0.35 mol/L NaCl，可得到CTA-核酸沉淀，多糖仍存在于溶液中；随后用0.1 mol/L NaAC 70%EtOH 洗涤，CTA+从 沉淀物中置换出来，和乙酸生成可溶性的十六烷基三甲基乙酸铵，而核酸形成钠盐，在70% EtOH环境 中仍以沉淀存在,轻锑沙窒俱睫像涧饥泽态盗钒匹缅脓往奉隋谎瀑酒架粉二菲闭宜怕猛肾败生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,第二节 实例应用,豆责室孔推极午闭著游女背虫豢轨逸擎功塘州融受圭穗谨你币常搞析功靳生物化学技术2沉淀法生物化学技术2沉淀法,