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1、第6章 化学毒物的一般毒性作用 v一般毒性作用（general toxicity,基础毒性,basic toxicity）：指外来化学物在一定的剂量、一定接触时间和 接触方式下对机体产生的综合毒效应。 v一般毒性作用根据接触时间的长短可分为急性毒性、亚慢性 毒性和慢性毒性。相应的试验称急性毒性试验、亚慢性毒性 试验和慢性毒性试验。 v1 急性毒性作用 v2 局部刺激试验 （local irritation test） v3 蓄积毒性作用及其评价 v4 亚慢性和慢性毒性作用 *1 当 佃 蟹 祈 臻 聚 末 呻 竿 咎 报 常 曰 藉 涕 瓶 深 撕 膀 菠 返 碾 惧 抬 盖 峭 策 钵 倡
2、岩 语 窗 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1 急性毒性作用 v新外源化合物首先需必须阐明其急性毒性的 强度及特征。 v1.1 基本概念 v1.2 急性毒性试验的目的 v1.3 急性毒性试验设计 v1.4 急性毒性替代试验 v1.5 LD50应用中的有关问题 v1.6 急性毒性评价 *2 福 邹 缆 温 揽 侯 墙 什 苹 沤 珐 狐 乌 扶 币 德 蠢 强 停 署 啥 叉 慷 瞄 赁 仲 检 撰 微 造 厄 紧 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的
3、 一 般 毒 性 作 用 1.1 基本概念 v急性毒性（acute toxicity）是指机体一次 接触或在24小时内多次接触外来化学物后所 引起的快速剧烈的中毒效应（结构与功能变 化）。 v一次接触因给予途径不同定义不同：口服和 注射指瞬间将受试物给予机体；吸入和皮肤 接触指在特定期间内（24小时）机体持续接 触受试物。 *3 扶 谭 汤 掠 舍 竖 庇 怯 等 履 朴 本 就 其 答 碎 员 莆 姆 勃 啡 棕 担 车 聊 舒 历 杰 移 痈 五 陵 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.2 急性毒性试验
4、的目的 v确定受试物使一种或几种实验动物死亡的剂量水平（LD50， LD100，LD01 ），以初步估计该化合物对人类毒害的危险性。 v为进一步的蓄积毒性试验、亚慢性与慢性毒性试验及特殊毒 性试验提供剂量和判断指标的依据。 v阐明一种化合物的相对毒性、作用方式和特殊毒性表现，找 出量-效关系，以便其毒性包括临床症状、生理生化和病理 变化、毒性性质和可能的靶器官等有初步了解。为毒理学机 制研究的初步探索。 v确定机体在环境中接触的受试物侵入机体的途径，研究受试 物的代谢动力学过程。 v研究受试物急性中毒的预防和急救治疗措施。 *4 棒 瘪 专 棒 韭 樊 魄 独 柯 哄 儿 钧 痒 痊 眷 教
5、撞 晒 锥 孤 倦 骏 尾 蔡 乖 仪 裸 圈 抹 唉 敏 恼 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3 急性毒性试验设计 v1.3.1 试验动物的选择 v1.3.2 动物分组及样本例数 v1.3.3 动物喂养环境 v1.3.4 剂量选择 v1.3.5 染毒途径 v1.3.6 试验周期 v1.3.7 观察指标 *5 颁 的 硝 疆 调 灸 凭 忿 询 禹 狰 盎 侵 王 贡 油 喉 饱 扁 世 镐 挥 蕉 么 恿 缚 奏 权 恬 系 妒 扎 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6
6、章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.1 试验动物的选择 v原则是所选动物应使试验的结果能反映或预 测人体接触时的反应。要求动物健康，体重 差异不超过10%，试验前应禁食16小时。同时 尽量选用饲养管理方便、成本低的动物。 v1.3.1.1 动物种属选择 v1.3.1.2 动物品系选择 v1.3.1.3 动物性别选择 v1.3.1.4 动物年龄与体重选择 *6 斌 寸 划 犬 谜 鹊 释 樟 灿 绑 终 谜 跟 讲 运 疯 锌 锰 寸 早 挺 咽 雌 练 允 钝 沥 姿 勒 趴 猩 工 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学
7、 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.1.1 动物种属选择 v啮齿类动物 v猫和犬 v猪和灵长目 *7 匡 揽 滞 咕 群 吊 踏 领 莫 禾 徽 借 舰 苍 纲 战 徐 埠 转 菏 葛 隘 萤 蚊 存 锈 堕 皖 霓 做 泪 储 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 啮齿类动物 v因缺乏呕吐反射而利于经口接触受试物的吸收，但 不适于研究经口能引起呕吐的化学毒物的毒性。 v大鼠和小鼠繁殖力强、寿命短、食谱与人类似、便 于分析比较明确的生物学指标，且价格低、易管理 。大鼠在代谢和毒性反应上与人类较为接近，用于
8、急性毒性试验占第一位。小鼠占第二位。 v家兔因盲肠较长，经口接触毒物在肠道的吸收充分 ，结果往往毒性大于其他动物。 *8 拣 橱 植 亚 秧 核 票 腋 衡 撂 戏 单 哺 慰 到 毖 妄 薛 帮 盔 耘 衣 幕 嚎 襄 啼 馆 辅 踏 义 老 灰 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 猫和犬 v因试验成本较高，不适于样本量大的试验如 测定LD50。 v仅仅用来验证对毒性或对受试物的毒效应做 深入研究时以及对某些毒作用的种属敏感性 进行比较。 v猫和犬有高度发达的呕吐反射系统，有催吐 效应的化合物在经口接触时应注
9、意。 *9 湘 讨 巾 谷 谎 徘 块 抨 兹 牌 染 哗 舞 近 纵 娜 蠢 顷 漆 做 没 铃 稠 贴 魔 忘 拄 酝 论 胸 没 鳞 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 猪和灵长目 v猪的食谱及皮肤结构与人接近，是一种用来 估计外来化合物对人急性毒性危害水平较好 的试验动物。但其饲养管理不便，价贵，也 不适于样本量大的试验。 v灵长目动物在种系上与人类最接近，结果最 能反映人体的反应。但其价格昂贵，获得较 难。基本不用于急毒试验。 *10 碍 激 风 讣 伦 钥 釉 柞 财 瞒 沼 碌 阔 践 悠 贸 翼
10、 望 倪 午 沂 拿 仲 泅 神 浓 醒 送 施 权 粱 困 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.1.2 动物品系选择 v动物品系是指源于一个共同祖先而具有特定 基因型的一群生物。 v不同品系的同种动物，可对同一被检物发生 不同反应，即存在品系差异。 v为了在同种动物中减少这种遗传特性所决定 的品系差异，在毒性试验中，最好采用同品 系动物，即纯种动物。 *11 充 搂 肖 僚 摄 蚕 癌 鬼 那 饥 仪 坷 蹈 蝗 边 贾 彼 桓 笛 池 喇 莲 虏 伦 鸯 疲 峙 羔 江 罩 廷 近 第 6 章 外
11、源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.1.3 动物性别选择 v性别的选择依试验目的、要求而定。 v如需要着重观察受试验物对雄性动物生殖功 能的影响，应选用雄性动物。 v如为受试物的致畸形试验作准备，则可只选 用雌性动物。 v如一般地阐明受试物毒性的大小与性质，则 应雌雄各半。 *12 肯 轮 玄 刷 间 清 趾 御 袖 品 醇 容 关 浴 蒲 亚 咸 帖 汪 务 丛 谈 贤 抬 埂 韦 莲 要 禹 级 翅 领 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性
12、作 用 1.3.1.4 动物年龄与体重选择 v动物年龄一般选用初成年者。 v最常用的是出生2-3月龄、体重分别为200克 和20克左右的大、小鼠；犬则需喂养1年左右 ；豚鼠体重200-250克；家兔2000-2500克； 猫1500-2000克。 v如需研究受试物急毒作用的年龄差别，则应 选用不同年龄组动物。 *13 硬 招 气 个 咒 嫡 锹 验 绎 沃 戊 粥 芹 馋 朴 紊 歹 沮 诺 木 像 冲 谆 囊 衷 靖 泽 波 腹 曾 医 角 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.2 动物分组及样本例数
13、v试验动物应按年龄、性别和体重进行分层随 机分组。 v随机方法可用抽签法和随机数字表法，即先 将动物编号后，进行抽签或查随机数字表。 v注意随机不等于随意！ v每组样本例数小鼠10至20只，大鼠12至16只 ，家兔8至12只。 *14 这 箩 锥 馆 际 硝 谭 思 从 闸 费 亩 壹 炕 钾 孪 倪 霞 杨 沛 笺 胀 疮 君 期 芯 纠 股 贩 雁 淫 藉 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.3 动物喂养环境 v实验动物喂养室室温应控制在223，家兔 可控制在203，相对湿度30%-70%，无对 流
14、风。每笼动物数以不干扰动物个体活动及 不影响试验观察为度，必要时单笼喂养。 v饲养室采用人工昼夜为好，早6点至晚6点进 行12小时光照，其余时间黑暗。 v一般食用常规试验饲料，自由饮水。 *15 缀 喀 虑 录 俺 送 扦 粹 掌 豌 袭 当 亮 促 纂 幽 看 庙 谓 寞 兑 及 设 旬 喘 嗡 港 诊 档 痊 获 话 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.4 剂量选择 v一般采用查文献和预试验（少量动物试验） ，估计LD50的范围。 v然后以此剂量为中间剂量，然后以4倍数上下 各推两个剂量组，共5组，
15、使相邻两对数剂量 的差值相等。如P90表6-3。 *16 季 衬 沤 哲 又 聘 腰 培 名 民 踩 惰 恨 试 似 医 巩 牙 释 软 府 禽 测 装 所 壤 旧 歹 道 大 赡 胀 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.5 染毒途径 v接触途径的选择应以人在生产生活环境中接 触该化合物的方式为出发点。主要有： v1.3.5.1 经口接触 v1.3.5.2 经呼吸道接触 v1.3.5.3 经皮肤接触 *17 坦 搬 党 阿 距 树 岩 陶 氏 溢 弦 针 冰 防 惧 凤 藩 噪 私 蔽 再 邹 媳 糙
16、烧 府 某 坛 蕉 刹 班 售 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.5.1 经口接触 v其是指将受试物经口摄入或用机械直接送入胃的过 程。具体包括： v灌胃：接触量和时间准确，但操作相对不便。 v掺入饲料：是将受试物掺入饲料或饮水中，让动物 自行摄入的方法，其操作简便，但接触量和时间不 够准确。 v吞咽胶囊：是将受试物装入胶囊内，放入动物舌咽 部迫使动物咽下。本法操作不便，仅适于较大的动 物。 *18 妙 替 撒 勇 屡 斜 哦 膀 幼 天 膜 肌 厘 滤 蜀 梅 章 耕 戮 颁 蓑 爽 疽 瑟 戈 簧
17、 竹 此 娩 津 寥 速 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.5.2 经呼吸道接触 v其适于在常温、常压下生产生活中以气态、蒸汽态 、气溶胶、烟雾与粉尘状态存在的受试物的急性毒 性试验。 v具体接触方式有：吸入（将试验动物置于含有一定 浓度的受试物的染毒柜或其它容器中，让动物自然 吸入）和注入（将受试物直接注入试验动物的气管 或肺内）。 v该途径接触的持续时间可依据试验要求而定。毒性 大的接触时间可短些，毒性小的可长些。国内一般 在求LC50时为2小时。 *19 宰 共 饱 雷 掐 摧 境 审 趁 刽
18、匹 酣 圭 洛 汁 焊 珐 鸽 惶 舶 句 引 屯 醇 程 熄 缝 彬 集 只 轻 壬 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.5.3 经皮肤接触 v液态、粉尘态和气态外来化学物均有接触皮 肤的机会。不仅与外露皮肤接触并被吸收， 有的还能穿透衣服经皮肤吸收。 v外来化学物经皮肤吸收是指角质层完整的皮 肤，若皮肤破损，化学物经真皮直接吸收， 而与静脉吸收的机制相似。 *20 舔 潞 纂 芹 户 娘 芳 借 砂 尚 匠 材 绷 卯 年 青 瓷 候 帮 几 影 汐 坏 盛 谐 汕 豹 逞 楔 馆 旧 囱 第 6
19、章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.6 试验周期 v急性毒性试验除计算受试物的LD50/LC50外， 还需要通过观察实验动物的中毒症状判断受 试物的毒作用性质，推断中毒的靶器官等。 v因此，试验周期一般为2周。 *21 灭 惕 蓖 晚 移 炔 历 搭 送 骄 当 散 界 铲 冗 犹 惫 缮 闽 拙 骂 戚 悯 仇 着 拄 稠 窘 搞 阑 漓 覆 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.7 观察指标 v应根据急毒试验的目的来确
20、定观察指标。 v1.3.7.1 致死量/浓度 v1.3.7.2 中毒症状 v1.3.7.3 死亡及其时间 v1.3.7.4 体重 v1.3.7.5 其他指标 *22 寞 弹 歼 借 谩 铱 绳 潘 傻 殖 獭 径 涌 龟 免 赞 嚷 道 矽 啪 吵 括 证 舜 符 沙 癣 眯 霄 湖 劣 弘 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.7.1 致死量/浓度 v常用LD50/LC50。其计算一般采用改良寇氏（ krber ）法： LD50= log1 Xmi(Pi0.5) Xm为最大剂量的对数；i为相邻两对数剂量
21、 之差的绝对值；Pi为各组阳性反应率的总 和。 v毒性较大的用LD5/LC5。 v毒性剧烈的用LD1/LC1。 *23 炒 毯 页 算 溯 葱 燃 获 剩 纫 蹭 匈 榆 骑 擞 佑 遮 卒 记 烬 壶 拇 狱 晕 善 角 真 湍 楷 慷 神 隘 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.7.2 中毒症状 v在急性毒性试验中，动物的中毒症状及死亡一般出 现在给予受试物24-48小时内，故观察1周即可。 v如中毒反应出现较迟，主要在给受试物后48小时-4 天，则观察期也应相应延长至2-4周。特别在48-72 小
22、时内要仔细观察各剂量组动物的一般反应、临床 表现、死前表现及这些反应出现的时间。 v具体观察指标见P123表6-1。 *24 沃 驱 佳 欧 粟 涵 纲 缩 艇 讣 诽 瘸 于 境 艾 角 月 量 亏 东 要 涂 沦 鹅 牢 闹 输 纸 帜 淬 独 刚 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.7.3 死亡及其时间 v观察试验动物接触受试物后的死亡过程有利 于探讨其中毒机制或死因。 v在同系化学物中，有些在致死量下表现出动 物先兴奋后抑制，死亡时发生抽搐；而有的 则只引起抑制症状，表现精神萎靡、反应迟 钝，并
23、在抑制状态下慢慢死亡，表明同系物 之间的毒作用有差别。 *25 厚 葛 睹 撵 萤 俩 突 突 琳 弦 乳 纬 凯 劲 刑 昭 颖 糙 靠 丧 邹 酥 或 漆 暑 黑 柒 障 础 粒 拔 浊 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.7.4 体重 v在急毒试验中对于存活动物尤其是低于LD50组的动 物，应观察动物体重变化，以便了解受试物引起的 中毒效应是短暂的还是较长期的。 v尽管引起动物体重下降或增长率减慢的原因较为复 杂，如受试物影响食欲或消化系统功能而使动物厌 食或拒食可使体重下降，受试物可能会引起腹泻
24、而 引起食物的吸收利用也可导致体重下降。 v影响肾功能可使水盐代谢的紊乱而可影响体重。 *26 跌 刚 公 荧 凿 坯 巢 砸 七 峻 防 毡 拐 哪 役 毕 谭 谅 散 掠 寨 损 担 亏 橱 侣 础 轨 驻 竭 妊 辜 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.3.7.5 其他指标 v根据上述某些指标的阳性结果可进一步扩大观察项目，如测 定体温、心电、脑电等生理学指标或某些生化指标，有利于 深入探讨受试物的毒作用特征。 v对死亡动物要取部分组织进行病理解剖学检查，记录各器官 系统肉眼可见的病变；停止观察后也应
25、抽取部分存活的动物 进行病理解剖学检查。 v病理解剖学检查对迟发性死亡动物，尤其是发生双峰死亡的 现象是必要的。双峰死亡指早期死亡较多，继而减少，然后 又出现大批死亡的现象。 v病理解剖学检查对估计受试物的毒理作用有一定的意义，并 可为亚慢性、慢性和其它毒性试验的设计提供依据。 *27 衰 格 沃 诱 割 菠 色 贝 敦 机 夺 锯 佰 沮 穗 涨 郧 订 性 兑 滨 督 粘 厄 艾 蘑 富 怠 搜 循 泛 仪 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.4 急性毒性替代试验 v1.4.1固体剂量法 v（fixed
26、 dose procedure） v1.4.2急性毒性分级法 v（acute toxic class method） v1.4.3上下移动法 v（阶梯法，up/down method） *28 愚 炊 柱 累 凌 怨 脓 雾 滦 日 击 份 函 阑 蹋 介 辨 阑 缠 鸳 挑 翘 掘 纶 危 梳 示 贷 挛 朱 默 云 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.4.1 固定剂量法 v与经典方法不同的是它不以动物死亡作为观察终点 ，可以利用预先选定的或固定的一系列剂量染毒， 从而观察化学物的毒性反应来对化学物的毒性
27、进行 分级。实践证明可大量节省试验动物。 v实验选择的剂量范围是5、50、500mg/kg，最高限量 是2000mg/kg。 v欧共体（EEC）的急性经口毒性分级标准是：高毒（ LD5025mg/kg），有毒（LD50为25-200mg/kg），有 害（LD50为200-2000mg/kg），不分级（LD50 2000mg/kg）4个等级。 *29 怜 闺 释 鸵 怯 哑 藉 黄 遂 泥 据 翠 仁 胸 肢 刨 直 贝 舌 只 画 超 洛 涉 刚 村 欠 标 毙 兜 拾 莆 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用
28、1.4.2 急性毒性分级法 v它是以死亡为终点的分阶段试验法，每阶段3只动物 ，根据死亡动物数，平均2-4阶段即可判定急性毒性 。使用动物数量少。 v首选大鼠进行试验，在25、200、2000mg/kg中选择 一个剂量开始试验，并据其结果判断：不需进一步 试验进行分级；下阶段以相同剂量的另一种性别试 验；下阶段以较高或较低的剂量水平进行试验。 v动物观察14天，在染毒当天观察体征和死亡至少2次 ，之后每天观察1次。 v染毒前和每周测体重，所有动物进行大体解剖，必 要时进行组织病理学检查（病检）。 *30 椎 腊 帅 巍 逊 康 讫 乎 些 壳 组 版 蹈 董 逆 色 勤 炊 继 杯 犀 勇 秧
29、 恭 汉 恐 袭 帽 贯 笆 攒 锚 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.4.3 上下移动法 v它以死亡为终点但也可用于观察不同的终点。 v特点是所需的动物数更少。 v根据初步的资料确定第一个动物接受化学物的剂量 ，由第一只动物染毒后的反应决定第二只动物接受 化学物的剂量，如果动物死亡，则下一个剂量降低 ；如存活则下一个剂量增高。该方法需要选择一个 合适的剂量范围，使大部分动物所接受的化学物剂 量都在真正的平均致死量左右。 *31 然 声 尧 锹 备 闰 辙 涌 癌 佣 溅 缴 殆 佰 霖 腐 砷 驼 都
30、阜 衰 囊 能 怪 香 另 喂 握 盏 仰 包 运 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.5 LD50应用中的有关问题 vLD50具有重要的毒理学意义：在药物研究中，评价 药物急毒的大小，比较不同药物毒性的大小；计算 药物的治疗指数；为后续的重复给药毒理学试验提 供剂量参考；比较不同途径的LD50值，获得生物利 用度的信息；试验中毒量及其体征为临床不良反应 监测提供参考。 vLD50的局限性：评价新药及化学物时提供的信息较 少，实用性有限；影响因素多，如性别、年龄、身 体状况及环境因素等；物种差异性影响大；经
31、典试 验所需的动物数量多。 *32 疤 拱 岳 靛 虞 偶 彭 晕 淌 墟 肚 棵 氨 塞 录 镐 郸 摩 咖 商 柒 宅 掏 碍 剂 钢 当 悔 豺 舵 滩 贺 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 1.6 急性毒性评价 v在生产、运输、贮存和销售使用过程中也需要根据外来化学 物的毒性分级，采取相应的防护措施。 v为评价外来化学物急毒的强弱及对人类的潜在危害程度，国 际上提出了化学物急毒的分级标准用以对急毒进行评价。 v为便于比较化学物的毒性及有毒化学物的管理，国内外根据 LD50的大小提出了许多分级标准。WH
32、O公布的全球化学品统 一分类和标签制度（GHS）中关于急性毒性危险类别和标 签的要求见P125表6-2。 v注意：急毒不大，慢毒可能很大。因此不能将急毒分级与慢 毒分级混淆。 *33 里 段 拣 耻 厦 诽 没 视 段 尸 侈 汽 熙 仔 怎 兔 晾 腆 加 烟 褐 侮 钻 店 港 欠 女 蔫 撼 糖 以 条 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 2 局部刺激试验 v目的在于了解化学物对眼和皮肤的局部刺激性和腐 蚀性。 v2.1 眼刺激试验 v（eye primary irritation test） v2.2
33、皮肤原发性刺激试验 v（skin primary irritation test） v2.3 皮肤致敏试验 v（skin sensitization test, allergic contact dermatitis test） *34 身 碑 顷 管 沙 已 雨 助 未 郊 枷 鸭 样 泉 腥 蠕 因 侗 淆 溉 窥 橇 箕 游 硅 奢 溉 黔 租 架 冬 卸 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 2.1 眼刺激试验 v其观察终点为眼刺激和眼腐蚀。 v眼刺激（eye irritation）指眼前表面接触受试物
34、后产生的局部可逆性炎症变化。 v眼腐蚀（eye corrosion）指眼前表面接触受试物后 产生的局部不可逆性组织损伤。 v方法用Draize试验：家兔4只，滴眼后观察结膜（红 、肿、分泌物）、角膜（混浊度及范围）和虹膜（ 红、肿）的反应，按规定的分级标准进行评分。一 般观察7天，必要时延长至21天。 *35 钱 盛 入 堕 蚌 悦 晕 帮 铂 姚 销 蒙 唬 乏 手 构 得 萎 津 沂 闰 删 拇 感 掏 铅 烘 淋 啥 藤 泉 瓷 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 2.2 皮肤原发性刺激试验 v皮肤刺激（
35、dermal irritation）指皮肤接触受试物后产生 的局部可逆性炎症变化。 v皮肤腐蚀（dermal corrosion）指皮肤接触受试物后产生的 局部不可逆性组织损伤。 v不宜进行皮肤刺激试验的情况:构效关系及理化性质推测可 能有腐蚀性物质;急毒经皮试验有强系统毒性的物质;急毒经 皮试验染毒量达2000mg/kg仍未产生皮肤刺激体征的物质。 v试验采用家兔或豚鼠，观察时间应足以观察到可逆或不可逆 刺激作用，一般不超过14天。 v影响试验的因素：皮肤的完整性受破坏；固态物的物理性状 ；受试物在皮肤表面封闭染毒的严密程度；动物的年龄与皮 肤结构的关系；种属差异（一般敏感顺序为：兔豚鼠人
36、猪）。 *36 兽 褂 万 某 荷 脉 疾 渊 朽 匠 撞 捌 袁 末 岛 研 未 蜀 纵 像 帜 项 挥 剿 驾 削 西 撂 曙 融 救 昌 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 2.3 皮肤致敏试验 v皮肤致敏是一种对化学物免疫介导的皮肤反应，人 体这类反应表现为：瘙痒、红斑、水肿、丘疹、水 疱等。 v试验动物常选豚鼠。试验分两个阶段： v诱导接触（induction exposure）：是以较低或中 等浓度受试物对皮肤重复染毒（涂皮或皮下注射） ，一般需14天。 v激发接触（challenge exposu
37、re）：是间隔10-14天 后，用激发剂量（低于诱导时的剂量）受试物处理 未染过毒的皮肤部位，然后观察24小时、48小时和 72小时后皮肤反应。 v以皮肤反应程度进行评分，比较诱导及激发后皮肤 反应情况，以判断受试物能否产生皮肤过敏反应。 *37 曲 氮 脓 船 游 冠 勘 磁 膝 闲 闽 宛 纬 府 脖 迷 巾 估 慷 愿 胚 焙 祟 餐 潭 芯 稍 尼 附 嚼 饮 插 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 3 蓄积毒性作用及其评价 v3.1 基本概念 v3.2 实验方法及其评价 v3.2.1 蓄积系数法 v3
38、.2.2 生物半衰期法 v3.2.3 蓄积率 v3.3 相关机体耐受性 *38 搬 蛔 株 爸 涤 猪 游 儿 靛 里 颈 躁 荚 胆 迂 孔 冉 骸 盼 涅 垢 藩 氢 襄 的 腑 诺 绢 闲 磺 树 视 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 3.1 基本概念 v蓄积作用指反复多次接触同一化学物时，因前次接 触时未完全自机体清除，使其多次接触后在体内的 总量不断增加的现象。 v蓄积性指化学物具有蓄积作用的性质。 v贮库指容易蓄积化学物的组织部位。常见的有血浆 蛋白、脂肪组织、肝、肾及骨骼。 v蓄积作用一方面包括
39、化学物在体内量的增加，另一 方面是组织结构和功能改变的累积。 *39 杜 坟 腐 垒 肝 全 阻 纲 推 昭 扛 迸 帐 工 斧 唤 寝 植 拇 凝 终 驭 裙 腰 秽 矢 桩 吊 届 书 悦 联 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 3.2 实验方法及其评价 v任何毒物都可在体内蓄积。有些毒物分次进入的量 虽小，但长期接触仍可产生毒性；有些毒物虽然毒 性较小，但大量接触也可产生毒性。 v化学物在体内的蓄积现象是发生慢性中毒的物质基 础。蓄积毒性试验是检测外来化学物蓄积性大小的 试验，以了解某种外来化学物在体内的
40、蓄积情况和 程度，并可为慢毒实验设计提供依据。 v短期试验（Short-term test）指在数日内（7-14天 ），每天使试验机体接触一次受试物的试验。以探 讨较大剂量和较短时间的毒性作用。其与急性毒性 试验不同。 *40 方 爬 癣 从 愈 蓬 烬 线 雀 陀 沥 缴 摩 砚 奇 操 殿 揖 托 祷 骗 荆 瓤 坡 炳 多 甚 石 砖 央 肚 桩 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 3.2.1 蓄积系数法 v本法是一种生物效应的试验方法。原理是在一定期限内以低 于致死量（ LD50 ）间隔分次给予受试动物
41、，直至出现预计 的毒性效应为止。计算达到预计效应的总蓄积剂量，求出此 蓄积剂量与一次接触该化学物产生相同效应所需剂量的比值 -蓄积系数K：ED50（n）/ED50 （l） vn-多次接触产生相同效应的剂量总和； vl-单次接触产生相同效应的剂量。 vK越大表明蓄积性越小。K1表示高度蓄积，1K 3表示 明显蓄积， 3 K5表示中等蓄积，K5表示轻度蓄积。 v蓄积系数的具体试验方法有： v固定剂量法 v定期递增剂量法 v20天试验法 *41 御 诵 刺 摘 邓 志 思 胁 梦 收 破 址 朵 杰 世 疮 荡 颠 圈 拐 钵 挪 粤 锣 惠 坚 蜕 窍 资 角 导 狸 第 6 章 外 源 化 学
42、物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 固定剂量法 v先按常规方法测定LD50 。然后用另一批条件相同的 动物，分成2-4组，每组10-20只，雌雄各半。 v试验组每日定时定量（1/20-1/5 LD50之间）并以相 同途径给予受试动物，试验期间每日记录动物的蓄 积死亡数至累计发生一半动物死亡（异外死亡除外 ），即可计算K值。若接触蓄积剂量已达到5个LD50 量，也可停止试验，表明K大于5。 v单次接触量应根据动物体重作相应调整。 v试验期最长100天（每次接触量1/20 LD50 ），最短 25天（每次接触量1/5 LD50 ）。 *42
43、巾 锻 栋 迫 邯 孟 殃 柬 罐 荆 比 厘 容 税 填 灵 设 勋 服 墨 臭 凛 炸 沙 兑 段 张 西 渴 倚 闷 躺 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 定期递增剂量法 v在测出LD50后，同上法选择相同条件的动物，分为 接触组和对照组。 v试验以4天为一期，每天给相同剂量受试物。开始按 1/10 LD50给予。此后每期给予量按等比级数递增 1.5倍。连续接触20天即可结束试验。 v若试验期中只要受试物引起一半动物蓄积死亡，也 可结束试验。 *43 叔 药 粘 筛 蹈 债 族 嫌 拔 安 戍 迅 蚌
44、替 耽 舍 贰 执 拐 国 喻 锯 邻 哲 删 宁 垦 五 淤 长 悯 传 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 20天试验法 v本法是我国对农药及食品安全性的毒理学评价中提 出的方法。 v采用体重200克左右的成年大鼠，也可用小鼠。每个 剂量组雌雄动物各10只。 v各组受试物剂量分别为LD50的1/20、1/10、1/5及 1/2，另设对照组。 v每天染毒1次，连续20天，各组染毒累量可达1、2、 4和10 LD50 。再继续观察7天。 v若1/20 LD50组有动物死亡，且有量效关系，则为强 蓄积性，应放弃继
45、续试验。若到1/2 LD50组才有动 物死亡，则为弱蓄积性。 *44 群 铸 献 妓 功 荤 黔 信 专 愁 妮 贿 垢 架 麓 漫 蟹 潮 竖 学 唉 卫 耿 佃 镶 睬 谢 赛 谆 驮 横 祝 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 3.2.2 生物半衰期法 v生物半衰期（t1/2）是指外来化学物在体内消除一半所需要 的时间。其可反应化学物在体内的蓄积量。蓄积量越大毒性 反应越强，但不一定呈平行关系。 vt1/2的测定可用作图法，先求出消除速率常数K。即以时间为 横坐标，一级动力学消除物质以血浆对数浓度为纵坐标
46、，零 级动力学消除物质以血浆浓度为纵坐标，其斜率为K。再根 据不同动力学消除特性求t1/2 ：一级消除t1/2 =0.693/k；零 级消除= 0.5C0/K。 v多数物质以一级消除。有零级消除特性的物质在接触量很小 时，也以一级消除，但累积到一定程度后转变为零级消除。 v除吸入接触外，蓄积极限值可按下列公式估计： vL=1.44X每日吸收量X t1/2 （日）。 *45 羌 樟 曹 停 梗 兴 愈 炼 丛 验 鼎 芬 色 嘎 讣 峡 充 往 畴 贪 证 蛾 炉 常 倚 铃 汛 佑 城 贴 聊 喧 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的
47、一 般 毒 性 作 用 3.2.3 蓄积率 v蓄积率是指在一定时间内，外来化学物在体内的蓄 积量与同一期进入机体总量的百分比。其越高该化 学物的蓄积性越大。 v其测定可用化学测定法测定，但较困难。 v实际采用生物测量法进行测定： 将动物分为试验组和对照组。试验组先在一定时期 （蓄积期）内每日给予一定量的受试物，但不得有 动物死亡。蓄积一定量后同时与对照组进行LD50的 测定，再按下列公式计算蓄积率。 蓄积率=（对照组LD50 -试验组LD50 ）/蓄积期试 验组给予受试物的总量 *46 瓜 勘 赶 毒 燕 蝎 尤 参 北 娩 学 抿 汛 堰 抽 妥 沟 披 霄 忻 经 颖 黎 舌 蕉 愿 萤
48、嘲 靶 健 饰 抚 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 3.3 相关机体耐受性 v耐受性是指在一定剂量下未出现或出现程度较预期 低的反应的现象。 v在蓄积试验中，有时常于实验结束时将存活的动物 给予一次冲击剂量（ 一般为LD50 ），然后与未进 行预先化学处理的对照组的死亡率进行比较，以确 定是否具有耐受性。若试验组较对照组的死亡率低 ，则具有一定的耐受性，若高于或与对照组的死亡 无差别，则无耐受性。 v蓄积性与耐受性往往同时存在，有些以蓄积性为主 ，而有些以耐受性为主。 *47 斩 舆 要 态 粳 句 督 篓
49、 瓢 捡 椅 水 茨 蘸 请 舔 灶 贡 育 蟹 撵 娱 湍 奏 补 挛 睹 杆 沛 盼 妒 胖 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 4 亚慢性和慢性毒性作用及其评价 v4.1 基本概念及试验目的 v4.2 亚慢性毒性试验设计 v4.3 慢性毒性试验设计 v4.4 亚慢性、慢性毒性作用评价 *48 牢 辛 不 分 鲸 渐 洒 梨 慷 缚 蕉 淘 乳 僧 量 敞 航 痉 禽 砷 掺 胆 鞍 眼 届 厨 傅 贡 瞎 徒 丧 担 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 4.1 基本概念及试验目的 v4.1.1 亚慢性、慢性毒性作用的概念 v4.1.2 亚慢性毒性作用的试验目的 v4.1.3 慢性毒性作用的试验目的 *49 昂 辖 瓢 剁 鞘 核 耻 攀 闸 熊 汞 靴 膊 驴 岳 耽 为 茬 驹 帛 闪 疥 株 钞 徒 聚 瓜 叙 犁 姑 甜 压 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 第 6 章 外 源 化 学 物 的 一 般 毒 性 作 用 4.1.1 亚慢性、慢性毒性作用的概念 v亚慢性毒