《口腔临床医学专业毕业论文[精品论文]脂多糖诱发急性牙髓炎致敏的三叉神经节功能蛋白质组学研究.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《口腔临床医学专业毕业论文[精品论文]脂多糖诱发急性牙髓炎致敏的三叉神经节功能蛋白质组学研究.doc（43页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、口腔临床医学专业毕业论文 精品论文 脂多糖诱发急性牙髓炎致敏的三叉神经节功能蛋白质组学研究关键词：c-fos蛋白 胶质纤维酸性蛋白 蛋白质组学 神经系统致敏 口腔颌面部急慢性疼痛 急性牙髓炎摘要：目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封LPS的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程，探讨中枢致敏机制；
2、进而应用蛋白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性SD大鼠，设正常对照组和实验组。实验组动物左上第一磨牙开髓，封LPS，于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用HE染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、Western-blot的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)、三叉神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内c-fos和GFAP的变化时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE染色结果：随着LPS封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加
3、重。12-24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干c-fos蛋白变化时程：在LPS致急性牙髓致敏后，与对照组相比，实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加，并呈时间依赖性，24小时达到最高；对侧Vc核及Vi核的c-fos表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧相近；NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加，6h最高，随时间逐渐降低，48小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞GFAP的变化时程：在LPS致急性牙髓炎
4、致敏后，Vc变化时程慢于c-fos阳性神经元，24h至48h数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与c-fos阳性神经元分布区域相近。对侧Vc未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞48小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴定出48个差异点蛋白质斑点，其中21个表达量上调，27个下调，经质谱检测出10个点，分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂P0蛋白；组织蛋白酶B；丙酮酸脱氢酶E1；复制蛋白A和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封LPS可以有效的造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性
5、牙髓炎致敏过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的10种蛋白质中，包括了细胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应和能量代谢等重要生命活动中起关键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共同参与了LPS急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白ER29、神经丝蛋白及髓磷脂P0蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索，对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。正文内容 目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，
6、而神经系统致敏的问题正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封LPS的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用蛋白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性SD大鼠，设正常对照组和实验组。实验组动物左上第一磨牙开髓，封LPS，于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神
7、经节和脑干组织，用HE染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、Western-blot的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)、三叉神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内c-fos和GFAP的变化时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE染色结果：随着LPS封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加重。12-24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干c-fos蛋白变化
8、时程：在LPS致急性牙髓致敏后，与对照组相比，实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加，并呈时间依赖性，24小时达到最高；对侧Vc核及Vi核的c-fos表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧相近；NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加，6h最高，随时间逐渐降低，48小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞GFAP的变化时程：在LPS致急性牙髓炎致敏后，Vc变化时程慢于c-fos阳性神经元，24h至48h数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与c-fos阳性神经元分布区域相近。对侧Vc未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞48小时才出现较弱的阳性表达。 4
9、蛋白质组分析鉴定出48个差异点蛋白质斑点，其中21个表达量上调，27个下调，经质谱检测出10个点，分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂P0蛋白；组织蛋白酶B；丙酮酸脱氢酶E1；复制蛋白A和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封LPS可以有效的造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的10种蛋白质中，包括了细胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应和能量代谢等重要生命活动中起关
10、键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共同参与了LPS急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白ER29、神经丝蛋白及髓磷脂P0蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索，对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封LPS的方法，建
11、立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用蛋白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性SD大鼠，设正常对照组和实验组。实验组动物左上第一磨牙开髓，封LPS，于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用HE染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、Western-blot的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)、三叉神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内c-fos和GFAP的变化时程，用蛋白质组学方
12、法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE染色结果：随着LPS封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加重。12-24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干c-fos蛋白变化时程：在LPS致急性牙髓致敏后，与对照组相比，实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加，并呈时间依赖性，24小时达到最高；对侧Vc核及Vi核的c-fos表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧相近；NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加
13、，6h最高，随时间逐渐降低，48小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞GFAP的变化时程：在LPS致急性牙髓炎致敏后，Vc变化时程慢于c-fos阳性神经元，24h至48h数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与c-fos阳性神经元分布区域相近。对侧Vc未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞48小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴定出48个差异点蛋白质斑点，其中21个表达量上调，27个下调，经质谱检测出10个点，分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂P0蛋白；组织蛋白酶B；丙酮酸脱氢酶E1
14、；复制蛋白A和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封LPS可以有效的造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的10种蛋白质中，包括了细胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应和能量代谢等重要生命活动中起关键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共同参与了LPS急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白ER29、神经丝蛋白及髓磷脂P0蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提
15、供重要的线索，对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封LPS的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用蛋白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性SD大鼠，
16、设正常对照组和实验组。实验组动物左上第一磨牙开髓，封LPS，于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用HE染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、Western-blot的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)、三叉神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内c-fos和GFAP的变化时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE染色结果：随着LPS封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加重。12-24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗
17、出明显，成牙本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干c-fos蛋白变化时程：在LPS致急性牙髓致敏后，与对照组相比，实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加，并呈时间依赖性，24小时达到最高；对侧Vc核及Vi核的c-fos表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧相近；NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加，6h最高，随时间逐渐降低，48小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞GFAP的变化时程：在LPS致急性牙髓炎致敏后，Vc变化时程慢于c-fos阳性神经元，24h至48h数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与c-
18、fos阳性神经元分布区域相近。对侧Vc未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞48小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴定出48个差异点蛋白质斑点，其中21个表达量上调，27个下调，经质谱检测出10个点，分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂P0蛋白；组织蛋白酶B；丙酮酸脱氢酶E1；复制蛋白A和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封LPS可以有效的造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的
19、10种蛋白质中，包括了细胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应和能量代谢等重要生命活动中起关键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共同参与了LPS急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白ER29、神经丝蛋白及髓磷脂P0蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索，对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性
20、疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封LPS的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用蛋白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性SD大鼠，设正常对照组和实验组。实验组动物左上第一磨牙开髓，封LPS，于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用HE染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、Western-blot的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc
21、)、三叉神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内c-fos和GFAP的变化时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE染色结果：随着LPS封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加重。12-24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干c-fos蛋白变化时程：在LPS致急性牙髓致敏后，与对照组相比，实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加，并呈时间依赖性，24小时达到最高；对
22、侧Vc核及Vi核的c-fos表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧相近；NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加，6h最高，随时间逐渐降低，48小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞GFAP的变化时程：在LPS致急性牙髓炎致敏后，Vc变化时程慢于c-fos阳性神经元，24h至48h数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与c-fos阳性神经元分布区域相近。对侧Vc未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞48小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴定出48个差异点蛋白质斑点，其中21个表达量上调，27个下调，经质谱检测出10个点，分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白
23、ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂P0蛋白；组织蛋白酶B；丙酮酸脱氢酶E1；复制蛋白A和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封LPS可以有效的造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的10种蛋白质中，包括了细胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应和能量代谢等重要生命活动中起关键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共同参与了LPS急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白ER29、神经丝蛋白及髓磷脂
24、P0蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索，对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封LPS的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用蛋
25、白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性SD大鼠，设正常对照组和实验组。实验组动物左上第一磨牙开髓，封LPS，于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用HE染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、Western-blot的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)、三叉神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内c-fos和GFAP的变化时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE染色结果：随着LPS封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加重。12-
26、24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干c-fos蛋白变化时程：在LPS致急性牙髓致敏后，与对照组相比，实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加，并呈时间依赖性，24小时达到最高；对侧Vc核及Vi核的c-fos表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧相近；NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加，6h最高，随时间逐渐降低，48小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞GFAP的变化时程：在LPS致急性牙髓炎致敏后，V
27、c变化时程慢于c-fos阳性神经元，24h至48h数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与c-fos阳性神经元分布区域相近。对侧Vc未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞48小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴定出48个差异点蛋白质斑点，其中21个表达量上调，27个下调，经质谱检测出10个点，分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂P0蛋白；组织蛋白酶B；丙酮酸脱氢酶E1；复制蛋白A和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封LPS可以有效的造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏
28、过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的10种蛋白质中，包括了细胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应和能量代谢等重要生命活动中起关键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共同参与了LPS急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白ER29、神经丝蛋白及髓磷脂P0蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索，对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题
29、正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封LPS的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用蛋白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性SD大鼠，设正常对照组和实验组。实验组动物左上第一磨牙开髓，封LPS，于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用H
30、E染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、Western-blot的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)、三叉神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内c-fos和GFAP的变化时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE染色结果：随着LPS封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加重。12-24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干c-fos蛋白变化时程：在LPS致急性
31、牙髓致敏后，与对照组相比，实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加，并呈时间依赖性，24小时达到最高；对侧Vc核及Vi核的c-fos表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧相近；NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加，6h最高，随时间逐渐降低，48小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞GFAP的变化时程：在LPS致急性牙髓炎致敏后，Vc变化时程慢于c-fos阳性神经元，24h至48h数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与c-fos阳性神经元分布区域相近。对侧Vc未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞48小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴定出4
32、8个差异点蛋白质斑点，其中21个表达量上调，27个下调，经质谱检测出10个点，分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂P0蛋白；组织蛋白酶B；丙酮酸脱氢酶E1；复制蛋白A和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封LPS可以有效的造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的10种蛋白质中，包括了细胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应和能量代谢等重要生命活动中起关键作用的酶，细胞骨架
33、破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共同参与了LPS急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白ER29、神经丝蛋白及髓磷脂P0蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索，对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封LPS的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病
34、理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用蛋白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性SD大鼠，设正常对照组和实验组。实验组动物左上第一磨牙开髓，封LPS，于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用HE染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、Western-blot的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)、三叉神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内c-fos和GFAP的变化时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能
35、表达差异蛋白。 结果： 1HE染色结果：随着LPS封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加重。12-24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干c-fos蛋白变化时程：在LPS致急性牙髓致敏后，与对照组相比，实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加，并呈时间依赖性，24小时达到最高；对侧Vc核及Vi核的c-fos表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧相近；NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加，6h最高，随时间逐
36、渐降低，48小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞GFAP的变化时程：在LPS致急性牙髓炎致敏后，Vc变化时程慢于c-fos阳性神经元，24h至48h数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与c-fos阳性神经元分布区域相近。对侧Vc未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞48小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴定出48个差异点蛋白质斑点，其中21个表达量上调，27个下调，经质谱检测出10个点，分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂P0蛋白；组织蛋白酶B；丙酮酸脱氢酶E1；复制蛋白A和细胞骨
37、架肌动蛋白。 结论： 1开髓封LPS可以有效的造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的10种蛋白质中，包括了细胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应和能量代谢等重要生命活动中起关键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共同参与了LPS急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白ER29、神经丝蛋白及髓磷脂P0蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索，对研究
38、三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封LPS的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用蛋白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性SD大鼠，设正常对照组和实验组
39、。实验组动物左上第一磨牙开髓，封LPS，于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用HE染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、Western-blot的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)、三叉神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内c-fos和GFAP的变化时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE染色结果：随着LPS封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加重。12-24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙本质细胞
40、排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干c-fos蛋白变化时程：在LPS致急性牙髓致敏后，与对照组相比，实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加，并呈时间依赖性，24小时达到最高；对侧Vc核及Vi核的c-fos表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧相近；NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加，6h最高，随时间逐渐降低，48小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞GFAP的变化时程：在LPS致急性牙髓炎致敏后，Vc变化时程慢于c-fos阳性神经元，24h至48h数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与c-fos阳性神经元分布
41、区域相近。对侧Vc未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞48小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴定出48个差异点蛋白质斑点，其中21个表达量上调，27个下调，经质谱检测出10个点，分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白ERp29；低分子量神经丝蛋白；盘膜边缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂P0蛋白；组织蛋白酶B；丙酮酸脱氢酶E1；复制蛋白A和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封LPS可以有效的造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的10种蛋白质中，包括
42、了细胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应和能量代谢等重要生命活动中起关键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共同参与了LPS急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白ER29、神经丝蛋白及髓磷脂P0蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索，对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研
43、究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封LPS的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用蛋白质组学新技术，筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性SD大鼠，设正常对照组和实验组。实验组动物左上第一磨牙开髓，封LPS，于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用HE染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、Western-blot的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)、三叉神经脊束核极
44、间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内c-fos和GFAP的变化时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE染色结果：随着LPS封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加重。12-24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干c-fos蛋白变化时程：在LPS致急性牙髓致敏后，与对照组相比，实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加，并呈时间依赖性，24小时达到最高；对侧Vc核及Vi核的c
45、-fos表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧相近；NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加，6h最高，随时间逐渐降低，48小时仍高于对照组。 3急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞GFAP的变化时程：在LPS致急性牙髓炎致敏后，Vc变化时程慢于c-fos阳性神经元，24h至48h数量增多，此时星形胶质细胞胞体变大，突起增粗，染色加深，与c-fos阳性神经元分布区域相近。对侧Vc未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞48小时才出现较弱的阳性表达。 4蛋白质组分析鉴定出48个差异点蛋白质斑点，其中21个表达量上调，27个下调，经质谱检测出10个点，分别为甲状腺素运载蛋白；内质网蛋白ERp29；低分子量
46、神经丝蛋白；盘膜边缘蛋白；血清白蛋白前体；外周髓磷脂P0蛋白；组织蛋白酶B；丙酮酸脱氢酶E1；复制蛋白A和细胞骨架肌动蛋白。 结论： 1开髓封LPS可以有效的造成急性牙髓炎动物模型，是较好的痛觉致敏模型： 2在急性牙髓炎致敏过程中，随着炎症的进展，脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活，相互作用，共同造成神经系统的致敏； 3在鉴定的10种蛋白质中，包括了细胞结构蛋白、分子伴侣蛋白，生物合成相关蛋白、以及在应激反应和能量代谢等重要生命活动中起关键作用的酶，细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共同参与了LPS急性牙髓致敏的形成； 4内质网蛋白ER29、神经丝蛋白及髓磷脂P0蛋白可能成为评价
47、牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标，为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索，对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。目前，口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明，而神经系统致敏的问题正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中，各种牙髓损伤动物模型具有很多优点，而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型，对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。 目的：本研究结合临床实际，采用开髓封LPS的方法，建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型；研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程，探讨中枢致敏机制；进而应用蛋白质组学新技术，筛选
48、与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白，寻找痛觉相关蛋白。 材料与方法：雄性SD大鼠，设正常对照组和实验组。实验组动物左上第一磨牙开髓，封LPS，于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神经节和脑干组织，用HE染色方法观察牙髓炎症的发展变化，用免疫组化、Western-blot的方法分析脑干三又神经脊束核尾侧亚核(Vc)、三叉神经脊束核极间亚核(Vi)、三叉神经孤束核(NTS)核团内c-fos和GFAP的变化时程，用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。 结果： 1HE染色结果：随着LPS封药时间的延长，穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展，程度加重。12-24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化，穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成，牙髓组织充血、水肿渗出明显，成牙本质细胞排列紊乱，部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。 2脑干c-fos蛋白变化时程：在LPS致急性牙髓致敏后，与对照组相比，实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加，并呈时间依赖性，24小时达到最高；对侧Vc核及Vi核的c-fos表达数目少于实验侧，但变化趋势与实验侧相近；NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加，6h最