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1、3 7 6一 C h in J L a b D ig . . A 网 , 70 0 6 , V o 1 1 0 , N4 文章编号: 1 0 0 7一 4 2 8 7 ( 2 0 0 6 ) 0 4 一0 3 7 6 一0 3 单克隆抗体放免法监测环抱素 A血药浓度 在造血干细胞移植中的临床价值 胡 琉， ， 王 钧2 ， 张红宇 2翁 味梅1 ， 杨苹花， ， 陈 清 ， 郭乃榄 z贾 少微， ( 1 . 北京大学深圳医院 核医学科， 广东 深圳 5 1 8 0 3 6 ; 2 .北京大学深圳医院血液 内科) 摘要: 目的探讨单克隆抗体放免法测定全血环抱素 A ( C s A ) 浓度在造血
2、干细胞移植( HS C T ) 患者免疫抑制治疗 中的指导价值。方法采用单克隆抗体放免法检测2 8 例造血干细胞移植后应用 C s A患者的血药浓度， 从方法学上 严格进行实验室批内及 批间质量控制指标的评价， 同时观察C s A的临床应用与其血药浓度的关系。结果 3 4 7 批、 7 1 2 例次检测的非特异管结合率( N S B %) . 零标准管 结合率( B O %) , 批间有效剂量值E D 2 5 , E D 5 0 , E D 7 5 的变异系数、 反应误差关系( RE R) , 以及批内、 批间变异等各项指标均较理想。临床上对 C . A剂量、 剂型的调整皆以其血药浓度为 依据
3、， 并发现排斥反应与 移植物抗宿主病( G V H D ) 以及C . A毒副作用的发生均与全血C s A 浓度改变密切相关， 同时 也观察到了影响C s A血药浓度的因素。结论单克隆抗体放免法检测全血 C s A浓度在造血干细胞移植患者免疫抑 制治疗中 具有重要的临 床意义。 关键词: 单克隆抗体放免法; 环抱素 A血药浓度; 造血干细胞移植 中图分类号: 8 3 9 2 . 1 1文献标识码: A T h e c li n i c a l v a l u e o f mo n o c l o n a l a n ti b o d y r a d m imn wn a e s s a y f
4、 o r w h o le b l o o d c o n c e n t r a t i o n o f c y c l o s p o r in e A b e f o r e a n d a f - t e r h .a t o p o ie t ic s te r n c e l l t r a n s p l a n ta t i o n H U S h u , W A N G J u n , Z H A N G H o n g y u , e t a l . ( D e p a r t m e n t o f N u c le a r Me d ic i n e , P e k i
5、 n g U a i o e r s it y , S h e n z h e n H o sp it a l , S h e n a h e n 5 1 8 0 3 6 , C h in a ) A b s t r a c t : O b j e c t iv e T o i n v e s t i g a t e t h e c li n ic a l v a l u e o f r a d io i m m m m a s s a y ( R I A ) b a s e d o u m o n o c lo n a l a n t ib o d y t e c h - n o lo g
6、y f o r w h o l e b lo o d c o n ce n t r a ti o n o f c y c l o s p o ri n e A ( C w h o l e b l o o d c o n c e n t r a ti o n o f c y c l o s p o r i n e A ; h e m a t o p o i c t i c s t e m c e ll t r a n s p la n t a ti o n ( C h i n j L o b D i n g . , 2 0 0 6 , 1 0 : 3 7 6 ) 造血干细胞移植( H S C T
7、 ) 是治疗血液系统恶性 疾病、 骨髓衰竭和一些遗传性疾病的有效方法， G V H D 及同 种异体移植排斥反应作为重要的 并发 症， 显著影响着移植的成功率。 环抱素 A ( C s A ) 是 造血 干细胞移植后 患者免疫 抑制治疗 中防治 G V H D 及同 种异体移植排斥反应的一线药物， 由于 价 通 讯作者 其具有潜在的 毒副作用， 治疗窗口 窄， 药代动 力学 个 体差异较大， 为提高C s A用药的安全性和有效性， 临床上需要对其血药浓度进行适时检测G - 5 1 。我 们采用单克隆 抗体放免法对本院血液内科2 8 例造 血干细胞移植患者进行 C s A血药浓度检测， 以期观
8、察该检测方法对临床用药的指 导意义。 1 资料与方法 1 . 1 研究对象2 0 0 2 年 3 月至 2 0 0 5年 1 月在我院 中国实验诊断学 2 0 0 6 年a 月第1 0 卷 第a 期 3 7 7 血液内 科进行造血干细胞移植的2 8 例患者， 男性 2 1 例， 女性， 例， 年 龄 1 2 5 1 岁， 包括急性非淋巴 细胞白 血病 1 1 例， 急性淋巴细胞白 血病5 例， 慢性 粒细胞性白 血病7 例， 急性杂合细胞白 血病2 例， 多 发性骨髓瘤2 例， 急性再生障碍性贫血 1 例。 移植 种 类: 同 胞供者 H L A全相合异基因造血干细胞移 植 1 8 例( 其中
9、异基因骨髓移植 1 例、 异基因外周血 造血干细胞移植巧例、 异基因骨髓加外周血干细胞 混合移植2 例) , 4 / 6 位点相合异基因 外周血造血干 细 胞移植2 例， 5 / 6 位点相合异基因外周血造血干 细 胞移植2 例， 非血缘无关供者外周血造血千细胞 移植4 例， 成人非血缘脐血干细胞移植2 例。以上 患 者在H S C T 前5 天即开始使用C s A ， 每 1 2 h 给药 一次。 1 . 2 标本采集 早晨6 - 7 时， 在C s A给药之前， 使 用5 m l 真空玻璃试管， E D T A抗凝， 经外周静脉采 血 1 一2 m l ， 立即送检， 监测 C s A谷浓
10、度。视临床需 要， 同 时对个别患者C s A 给药之后2h 按相同方式 采血， 监测峰浓度。 1 . 3 试剂、 仪器及检测方法 采用单克隆抗体放射 免疫分析法， 试剂从美国D i a s o r in 公司原装进口， 使 用上海原子核研究所 日 环仪器一厂的 S N - 6 9 7全 自 动双探头放射免疫7 计数仪。针对2 8 例造血干细 胞移植患者， 由 专人严格按说明书进行了3 4 7 批双 管侧定， 标准曲 线拟合方式为四 参数质量作用定律， 并采用WH O推荐的质量控制方案进行实 验室批内 及批间监测。 1 . 4 实验室及临床观察指标 1 . 4 . 1 实验室观察指标非特异管结
11、合率 ( N S B % ) , 零标准管结合率( B o % ) 、 批间有 效剂量值 E D 2 5 , E D 5 0 , E D 7 5的变异系数、 反应误差关系 ( R E R ) ， 以及批内、 批间 变异 等各项指标。 1 . 4 . 2 临床观察指标C s A血药浓度与剂型、 剂 量、 毒副 作用、 排斥反应及G V H D的 关系， 以 及影响 C s A血药浓度的因素。 2 结果 2 . 1 实验室指标 在3 4 7 批C s A血药浓度检测中， N S B %为 3 . 7 9 %土1 . 0 1 %, B O %平均为 4 3 . 1 8 % 士 3 . 7 1 %，
12、最高浓 度管结合率与最低浓度管结合率之 差为 3 5 . 2 1 % t 3 . 6 5 %, E D 2 5 , E D 5 0 , E D 7 5的批间 变 异系数( C V % ) 分别为 1 0 . 8 2 %, 7 . 8 1 % , 9 . 9 8 %0 严格绘制质控图， 每一 批质控值均在士 2 S D 范围内， 批内变异 5 %， 批间变异 8 %， 回收率为1 0 0 %士 8. 4 6%0 2 . 2 临床观察指 标 2 . 2 . 1 2 8 名造血干细胞移植患者中防治 G V H D及 排斥反应的适宜 C s A 血药浓度大多数为2 0 0 一 3 0 0 n g /
13、m l , 当C s A浓 度低于2 0 0 n 酬 m l 时， 较易出 现 G V H D 及 排 斥 反 应， 当 高于3 0 0 n 扩 m l 时， 又 常 发 生 毒副作用。 2 . 2 . 2 不同 患者的C s A药代动力学存在着较大个 体差异， 在大致相似的 血药浓度下， 不同患者所需的 C s A剂量明显不同。青少年患者对 C s A的代谢速 率 很快， 投药量也相应很大。 对个别快代谢型患者， 为达到既充分防治 G V H D及排斥反应， 又尽可能避 免或减 轻 C s A 毒副作用的目的， 需使用输液泵2 4 h 持续给药。 2 . 2 . 3 移植后第1 个月， 静脉
14、给药较口 服给药能获 得更稳定的 C s A血药浓度。 2 . 2 . 4 给药方式由静脉向口服过渡时， 患者 C s A 血药浓度波动总体不大， 仅有少数例外。 2 . 2 . 5 当C s A与二性霉素、 氟康哇、 红霉素、 阿奇 霉素等配伍应用时， C s A血药浓度升高; 当与甲氰咪 肌、 苯妥英钠、 安定、 抗疥药等合用时， C s A 血药浓度 降低。 2 . 2 . 6 血液内科医生根据单克隆抗体放免法提供 的 血药浓度对C s A 剂型、 剂量进行的调整使大多数 患者既达到了免疫耐受、 防治GV H D及排斥反应的 目的， 又减 少了C s A毒副作用的发生或减轻了其毒 副作用
15、的 程度。C s A血药浓度检测结果与临床相符 率达到9 5 %以上。 3讨论 3 . 1 造血干细胞移植已广泛应用于多种恶性疾病 和非恶性疾病的治疗， 移植物抗宿主病( G V H D ) 被 认为是通过识别宿主组织， 从而 激活供者T细胞所 致， 反映了 供者T 细胞和受者器官间复杂的相互关 系， 涉 及到多种细胞因子的参与， 是异基因 造血千细 胞移植的主要并发症和死亡原因之一， 因 此受到了 广 大 血 液 学 工 作 者 的 高 度 重 视 ， 一 ，4,6 3 3 . 2 环抱素 A ( C s A ) 是从真菌( T o l y p o c l a d iu i p i if f
16、 a - t u m g a m s ) 代 谢产 物中 提取 的 一 种特 异 性 较强 的 免 疫抑制剂， 是由1 1 个氨基酸残基组成的 一种环状多 肤， 已 广泛 应用于器官移植( 包括异体造血干细胞移 植) ， 以阻止排异反应， 防止急、 慢性 G V H D。C s A 具有选择性抑制细胞毒T淋巴 细胞的 作用而不抑 制骨髓， 可 有效地抑制G V H D 及同 种异体 移植排 斥 反 应， 并 通过 减 少 类 固 醇 用 量 而 降 低 感 染的 发 病 率， 因 此 在 临 床上 一 致得 到广 泛 应用 2 . 7 ;d ) 。 由 于C s A 3 7 8C h i n
17、J D 山D i e g n , A p t f , 2 以 巧, V o 1 1 0 . N . 具有 很大的 药代动力学个体差异， 并具有潜在的不 良 反应， 譬如 肾毒性、 高血压、 高血钾、 肝毒性及神经 毒 性等， 所以 很有必要对其血药浓度进行适时检 测 2 , 4 , 7 , 8 3 . 3 测定 C s A血药浓度的方法主要有放射免疫 法、 荧光偏振免疫法、 高效液相色谱法等。 有文献报 道C s A在体内代谢物有 3 0 多种， 高效液相色谱法 测 定的C s A为 原形药物浓度， 其结果不受代谢物影 响， 而 荧光偏振免疫法所测的为 C s A原形和代谢物 总量， 故后者所
18、测值高于前者 9 , 10 。放射免疫法包 括第一代和第二代， 它们分别建立在多克隆抗体与 特异性单克隆 抗体技术之_ L 。由 于特异性单克隆 抗 体与循环代谢产物无交叉反应， 所以 第二代放免法 与高效液相色谱法相同， 其检测结果为原形药物浓 度 ， 幻 ， 这 样无疑 能为临 床医 生提 供 更为 便捷的 C s A 剂量调整依据。 3 . 4 荧光偏振免疫法采用进口 试剂盒， 快速、 简便、 准确， 但费用高昂， 尤其在样本数少的情况下易造成 较大的浪费。高效液相色谱法作为 C s A另一种准 确的测定方法， 费用低于荧光偏振免疫法， 但存在着 提取步骤多、 色谱条件严格等缺点 1 3
19、 。 本研究中， 3 4 7 批检测的方法学指标提示单克隆抗体放免法测 定全血C s A浓度准确度高、 精密度及灵敏度强， 稳 定性好。由于 操作简便、 对仪器设备及测试环境要 求不高， 检测成本较高效液相色谱法和荧光偏振免 疫法低， 故便于实施， 值得推广。 、3 . 5 临床观察发现， 大多数患者 C s A血药浓度随 C s _A 用药 剂量变化而发生灵敏的改变， 并受多种配 伍用药及患者代谢状况， 肠胃、 肝脏功能， 饮食结构 等诸多因素的影响。通过适时监测 C s A血药浓度 能指导其剂量和( 或) 剂型的调整， 达到既充分防治 G V H D及排斥反应， 又尽可能避免或减轻C s
20、A毒副 作用的目 的， 因此单克隆抗体放免法检测全血 C s A 血药浓度在造血干细胞移植患者使用C s A的过程 中具有 重大的临床指导意义。 作者简介: 胡疏, 3 5岁， 女， 医学硕士， 副主任医师。 参考文献: I Win g e r d J R . V o g e lg G B , J o s n h i m D e e g H. S t e m C e ll T t a n s p la n - ra tio n : S u p p o rt iv e C a re耐 L a n g - T e r m C o m p fi - t io n s , H e m a t o o
21、g y , 2 0 0 2 :4 3 1 一 4 3 3 2 邓奎 斯 诺依( D u y u e s o o y R - J . ) ， 李幼 平， 主 编. 移植 免疫生 物学 M 北京: 科学出版社， 2 0 0 0 : 3 8 7 一 3 8 8 . 3 了 陈育红， 黄晓军，郭乃俊， 等. 异基因造血干细胞移植后急性移植 物抗宿主病的发生及其危险因素的探讨【 J l . 中华血液学杂志， 2 0 0 3 , 2 ( 2 4 ) : 6 1 . 4 1 Tm y o s h i I w a s a k i , R e ce n t A d v a n c e s i n t h e T
22、 re a t m e n t o f C r s ft - V e r - s a s H o s t D is ey e e J 1 . C li n ic a l M e d ic in e c o m p a r a t io n h ig h p e r fo r m a n ce l iq u id c h r o m a t o g r a p h y a n d m o n o c l o n a l r a d io i m m u n o a s s n y s t u d ie s J . T r a n s p la n t P ,-, 1 9 8 8 , 2 0 :
23、3 3 0 . 川 H a lt D R . J o h nt o n A , M a rs d e n J T , e t . 1 . M o n o c lo n . d A n ti b o d i e s fo r R z d io i rn m u n o a m a y o f C y c l o s p o r in e : a Mu l tc e n t e r C o m p a r is o n o f T h e ir P e r fo r m a n ce w it h t h e S a n d - P lo y c l -l R a d io i m m u n u
24、 a s s a y K i t J .C li n i c a l C h e m is tr y . 1 9 8 8 , 3 4 : 1 0 9 1 . 1 2 B a ll P E , M u n z e r H , K e fl e r H P , e t a l , S p e c i! 3 H R n d io im m u n o a s - s a y w i th a M o n o c l o n a l A n t ib o d ie s f o r M o n i to ri n g C y c lo ap o ri n e in b l o o d J . C f m im l C h e m is t r y , 1 9 8 8 , 3 4 : 2 5 7 . 1 3 范 芳， 谢瑞样， 吴国 森. 改良反相高效液相色谱法测定非清健 性异基因干细胞移植患者全血中环抱素A的C 2 浓度 1 . 中国 医院药学杂志, 2 0 0 4 , 5 ( 2 4 ) :2 8 2 . ( 收稿日期: 2 0 0 5 一0 6 一2 0 )