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1、第 1 页 寻常型银屑病并发寻常性天疱疮 2 例1 特征码 oxgwxcjYKwXQFuZHjspa 银屑病中细胞凋亡相关基因 bcl-2、Fas、bax 的检测 摘要 为了探讨细胞凋亡相关基因 bcl-2、Fas、bax 在银屑 病发病中的意义，采用免疫组化 ABC 法、SABC 法检测了这几种 基因在 15 例银屑病组织中的表达。结果发现银屑病的角质形成 细胞中抑凋亡基因 bcl-2 几乎不表达，促凋亡基因 Fas、bax 阳 性表达。提示促凋亡基因 Fas、bax 在银屑病中发病起重要作用， 而抑凋亡基因 bcl-2 作用可能不大。 关键词 银屑病、 bcl-2 基因、 Fas 基因、
2、bax 基因。 银屑病的发病机理尚不明确，角质形成细胞异常增生和角 化不全是银屑病的主要病理改变，以往对这方面的研究主要集 中在免疫学和生化学方面。近年来银屑病与细胞凋亡的关系逐 渐受到越来越多学者的重视。国外有学者报道银屑病表皮中角 质形成细胞凋亡异常增多。抑凋亡基因 bcl-2 和促凋亡基因 Fas、bax 是现今研究较多、较重要的几个细胞凋亡相关基因。 为了探讨这几种基因在银屑病发病中的意义，我们采用免疫组 化方法检测了银屑病中细胞凋亡相关基因 bcl-2、Fas 及 bax。 1 材料和方法 第 2 页 11 标本来源：采用 1994-1997 年我院保存的石蜡包埋组 织块。寻常型银屑
3、病 15 例，其中男 8 例，女例；年龄 11-68 岁， 平均年龄 29.13 岁；均为进行期银屑病。6 名正常人皮肤组织， 皆取自皮肤外科行重睑术、面部美容切除术者的皮肤，石蜡包 埋作为对照组。测定前先将石蜡包埋组织块作常规组织切片及 HE 染色，在光镜下核对诊断，证实其病理诊断无误方采用。 12 试剂：鼠抗人 bcl-2 单克隆抗体购自 Dako 公司，生 物素化羊抗鼠单克隆抗体系华美生物制品公司产品。兔抗人 Fas 多抗、兔抗人 bax 多抗及链酶亲和素-生物素-过氧化酶复 合物免疫组化试剂盒（简称 SABC 试剂盒）均购自武汉博士德生 物工程公司。 13 方法：载玻片用 APES 处
4、理后干燥备用，切取 4-5m 厚的石蜡切片，常规脱蜡水化。Bcl-2 基因的检测参照 ABC 法 稍加改进，阳性对照为正常淋巴结，阴性对照为不加一抗。 Fas、bax 基因的检测采用 SABC 法，阳性对照分别为武汉博士 德生物工程公司提供的 Fas、bax 基因阳性对照片，阴性对照为 不加一抗。 14 判断：显微镜下观察，棕黄色为阳性结果。阳性强度 判断标准如下：强阳性（+ + +）指 50%以上细胞阳性染色；中 等强度阳性（+ +）指 25%-50%细胞阳性染色；弱阳性（+）指 25%以下细胞阳性染色；阴性（-）指细胞均无任何阳性染色。 2 结果 6 例正常人皮肤组织中：bcl-2 基因除
5、部分基底细 第 3 页 胞呈阳性反应外，余阴性。 、Fas 和 bax 基因为阴性表达。15 例 银屑病组织中：bcl-2 基因在 15 例表皮增生的角质形成细胞中 均呈阴性表达，但 14 例部分基底细胞和浸润的淋巴细胞呈阳性 染色；Fas 基因在 12 例银屑病组织中呈阳性表达；bax 基因在 13 例中呈阳性，阳性染色遍布表皮各层角质形成细胞中及真皮 浅层浸润的淋巴细胞上。在缺少一抗的对照反应中结果均为阴 性，而作为阳性对照的正常淋巴结及 Fas、bax 基因阳性对照片 则呈广泛强阳性染色。 3 讨论 bcl-2 基因最早是 1984 年 Tsujimoto 等从滤泡性 淋巴瘤中分离出来的
6、一种癌基因，位于 18q21 位点的 bcl-2 基 因移至免疫球蛋白重链基因 14q32 位点附近，造成 bcl-2 蛋白 的异常表达。bcl-2 基因可抑制许多因素引起的细胞凋亡，故 称为：“细胞凋亡抑制基因” 。Fas 抗原又称 Apo-1 或 CD95，Fas 分子是个典型的型膜蛋 白，属肿瘤环死因子 （TNF）/神经生长因子（NGF）受体家族中的一员。研究发现 Fas 单克隆抗体在体内体处与 Fas 结合后均能导致表达 Fas 的 细胞发生凋亡，从而证明 Fas 是一种识别 Fas 配体，并将凋亡 信息传递给细胞的细胞表面受体，故 Fas 基因又称“凋亡基因” 。 Bax 基因属于
7、bcl-2 基因家族成员，其功能与 bcl-2 基因相反， 为促凋亡基因，bax 蛋白可与 bcl-2 蛋白形成异源二聚体，从 而抑制 bcl-2 基因的抗凋亡作用。我们的实验中正常的皮肤组 织部分基底细胞 bcl-2 基因呈阳性反应，这与国外学者的报道 第 4 页 相符合，有文献报道这些阳性细胞为黑素细胞，正常表皮中黑 素细胞与基底角质形成细胞的比例为 1：30，提示黑素细胞死 亡和再生的控制是非常严格的。黑素细胞 bcl-2 基因强阳性表 达，这可能与保护它们避免受内外环境的影响如紫外线的照射， 减少凋亡有很大关系。在银屑病中除黑素细胞和浸润的淋巴细 胞为阳性外，表皮增生的角质形成细胞均为阴性，这提示 bcl- 2 基因可能在银屑病中所起的作用不大。目前认为在这类丘疹 鳞屑性疾病中主要是 bcl-X 基因起作用。Wrone-Smith 等及 Foreman 等发现银 bcl-X1 1 基因在增生的角质形成细胞上呈强阳性表达，认为 bcl-X1 基 因可能通过抑制表皮细胞上呈强阳性表达，认为 bcl-X1 基因可 能通过抑制表皮细胞凋亡，从而延长细胞的存活期。而本实验 中银屑病组织促凋亡基因 Fas、bax 均为广泛性表达，这与国外 学者的结论一致。因此，我们认为在银屑病中促凋亡基因 Fas、bax 起重要作用，而抑凋亡基因 bcl-2 作用可能不大。 第 5 页